β2-MG miR-182 BUN在老年慢性肾功能衰竭中的表达及相关性研究

孙 瑶， 孙 琨

(山东省淄博市中心医院, 山东 淄博 255000)

慢性肾功能衰竭(chronic renal failure，CRF)是一种慢性肾脏系统疾病，早期发病较为隐匿，随时间延长，肾功能进行性增加损害，引起一系列并发症，对患者生命健康安全产生严重威胁[1,2]。如果CRF患者病情未能得到有效控制，会发展为终末期肾病，因此需要寻找有效的指标，早期进行正确诊断预测[3]。血清β2-微量球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)是反映肾功能早期损伤的蛋白，当肾脏发生损伤时，血清β2-MG水平升高，是反映肾脏损伤中的灵敏指标。微小RNAs(microRNAs，miRNAs)可以调控基因的表达，miR-182是近年来发现的一种微小RNA，已有报道表明miR-182在多种恶性肿瘤组织中存在异常表达[4]。目前尚未有研究报道miR-182在CRF中的表达情况。血尿素氮(Blood ureanitrogen，BUN)常用于检查排尿功能是否正常[5]。临床作为反映肾功能的常用指标，在反映肾衰竭方面更为敏感临床上尚未有研究探讨β2-MG、miR-182、BUN联合检测在CRF中的应用及其三者间的相关性[6]。鉴于此，本研究检测β2-MG、miR-182、BUN在老年慢性肾衰竭患者中的表达，分析三者相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料:选取在我院接受治疗的43例慢性肾功能衰竭患者于2019年3月至2020年12月，作为研究组，年龄60-78岁，男25例，女18例，病程3-12年；选取同时期于我院进行健康体检的正常人43例，作为对照组，其中男24例，女19例，年龄61-78岁，两组受试者年龄、性别等一般资料比较无统计学差异(P>0.05)，研究组胱抑素C(Cystatin C,CYSC)、血清肌酐(serum creatinine，Scr)、视黄醇结合蛋白(Retinol-Binding Protein,RBP)表达均高于对照组(P<0.05)。纳入标准：所有患者均符合CRF诊断标准，肾小球滤过率(Glomerularfiltration rate，eGFR)32～92mL/min；肾小球滤过率大于70mL/min/1.73m2为早期，小于70mL/min/1.73m2为非早期，所有受试者均知情，签署知情同意书，经我院伦理会批准通过。排除标准：患有严重的心脑血管、肝、肾等疾病的患者；精神异常者；患有感染性疾病者；接受过透析治疗者。见表1。

表1 临床基线资料

1.2检测指标

1.2.1标本采集:采集5mL肘静脉血液于所有受试者入组后次日清晨空腹抽取，3000r/min离心10min，离心半径10cm，分离血清，置于-80℃冰箱保存待检。

1.2.2β2-MG、BUN检测:应用免疫比浊法测定血清β2-MG、BUN水平，检测仪器为Roche 8000全自动生化分析仪(德国Roche公司)，严格按照试剂盒说明书进行具体步骤操作。

1.2.3miR-182表达:miR-182表达情况应用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测。提取血浆总RNA，测定RNA浓度，进行qRT-PCR反应。合成cDNA，稀释10倍。分别使用目的基因miR-182及内参基因U6的特异性引物，引物序列：miR-182引物上游:5'-ACTACTTCGACTGAGACACG-3'，下游:5'-GTCTGCATGCTGTCCTTG-3'。采用386孔板20μL体系。50℃ 2min，1个循环；95℃ 10min，1个循环；95℃ 15s、60℃ 30s、72℃ 30s，40个循环；72℃ 10min，1个循环。以U6为内参，采用2-ΔΔCt法进行miR-182的相对定量。

1.2.4CYSC、Scr、RBP 检测:应用酶联免疫吸附测定法测定CYSC、Scr、RBP水平，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，严格按照说明书操作。

2 结 果

2.1β2-MG、miR-182、BUN表达在各组中比较:研究组血清β2-MG、miR-182、BUN表达水平均高于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 β2-MG miR-182 BUN表达在各组中比较

2.2β2-MG、miR-182、BUN三者相关性：研究组患者血清β2-MG与miR-182之间呈正相关(r=0.695，P=0.001)；血清β2-MG与BUN之间呈正相关(r=0.733，P=0.001)；血清miR-182与BUN之间呈正相关(r=0.778，P=0.001)(P<0.05)。见图1。

图1 β2-MG、miR-182、BUN三者相关性

2.3研究组疾病不同病理分期β2-MG、miR-182、BUN水平变化：研究组早期患者血清β2-MG、miR-182、BUN水平高于非早期患者(P<0.05)。见表3。

表3 研究组疾病不同病理分期β2-MG miR-182 BUN水平变化

2.4β2-MG、miR-182、BUN表达与老年慢性肾功能衰竭病理特征关系：患者血清β2-MG、miR-182、BUN水平与性别无关(P>0.05)，与年龄、少尿、水肿、大量尿蛋白有关(P<0.05)。年龄≥65岁、少尿、水肿、大量尿蛋白患者β2-MG、miR-182、BUN表达水平较高(P<0.05)。见表4。

表4 β2-MG miR-182 BUN表达与老年慢性肾功能衰竭病理特征关系

2.5β2-MG、miR-182、BUN对老年慢性肾功能衰竭的诊断价值:ROC分析β2-MG、miR-182、BUN诊断老年慢性肾功能衰竭灵敏度低于三项联合，具有统计学差异(P<0.05)。三项联合检测对老年慢性肾功能衰竭患者诊断效能较高(P<0.05)。见表5、图2。

表5 β2-MG miR-182 BUN对老年慢性肾功能衰竭的诊断价值

图2 β2-MG、miR-182、BUN对老年慢性肾功能衰竭的诊断价值

3 讨 论

CRF的特点是为尿液中肌酐和含氮废物的浓度出现可逆性增加，并且不能通过肾脏合理调节体液和电解质平衡，病理机制比较多变，因此，对于早期诊断CRF并预防并发症具有深远意义[7]。

β2-MG为单链多肽，属于组织相容性白细胞抗原的轻链或β链，可以自由通过肾小球滤过膜，肾小管被几乎全部重吸收并降解在近端。目前，临床上β2-MG在肾功能减退、自身免疫疾病、恶性肿瘤等中广泛应用于诊断，且诊断价值较好[8]。徐月霞等[9]的研究发现，β2-MG水平在CRF的病情发展中有一定的变化规律。miR-182属于miR-183/96/182簇的一员，对生物体的生长、分化、发育有着重要调控作用，可通过调节不同的靶mRNA，在肿瘤的形成和发展中发挥重要作用。近年研究[10]显示，miR-182在糖、脂代谢方面发挥着重要调控作用，若miR-182表达的紊乱，可能会导致代谢相关疾病的发生。BUN在临床中作为评估肾脏功能指标，其在反应肾功能衰竭方面十分敏感。其升高多见于高蛋白饮食、高分解代谢状态、缺水、肾缺血、血容量不足及各种肾功能衰竭的情况，特别是伴有血肌酐升高的时候。肾功能不全时，循环和组织中所潴留的具有毒性作用的物质为尿毒素，与肾脏疾病的进展和肾功能的衰退均密切相关。正常人体内，BUN表达水平较低，当患者肾功能发生损害时，BUN表达水平升高明显，加剧疾病的发生进展[11]。

基于此，本研究对β2-MG、miR-182和BUN在CRF患者血清中的表达意义展开研究。研究结果发现，在老年慢性肾功能衰竭患者血清中β2-MG、miR-182和BUN的表达均显著升高，且随着疾病的加重，其相对水平也逐渐升高。相比一般患者，当患者年龄≥65岁或具有少尿、水肿、大量尿蛋白等症状时，血清β2-MG、miR-182和BUN的增高会更加显著。相关性分析的结果进一步说明，三者的表达水平之间呈正相关，说明其在CRF中具有一定的关联性，可能进行联合检测来对CRF进行早期诊断筛查。

因此，本研究进一步探索不同时期CRF患者血清β2-MG、miR-182和BUN的表达，以及三者联合相较于单一检测的灵敏度。结果发现，早期CRF患者血清β2-MG、miR-182和BUN水平显著高于非早期患者，该结果说明β2-MG、miR-182和BUN的高表达能及早反映肾功能的损害，对CRF的早期预测、诊断和治疗有着重要意义，与现有研究结果[12]一致。ROC分析结果显示，三者联合检测诊断对老年慢性肾功能衰竭的灵敏度和准确度均显著高于单一检测，而特异度降低，说明β2-MG、miR-182和BUN可以进行组合，来更好的在早期对CRF患者进行诊断。

综上所述，β2-MG、miR-182、BUN在老年慢性肾功能衰竭中呈现高表达，三者之间具有正相关性，β2-MG、miR-182、BUN联合检测对于老年慢性肾功能衰竭的诊断价值较高，对预后较为重要，可为临床诊断和治疗CRF提供新的思路和理论依据。本文不足之处在于病例数较少，结果存在一定的局限性，今后仍需要进一步研究证实研究结论。