联合cTnI、Mb和miR⁃133检测在AVM患儿诊断及预后中的作用

张小建 张军毅 冯嵩 李丹

急性病毒性心肌炎（Acute viral myocarditis，AVM）是由于心肌细胞遭受病毒感染所诱发的心肌炎症反应，柯萨奇B 组病毒为诱发该病最为常见的一类病毒［1］。AVM 患儿的临床表现不典型且缺乏特异性，临床诊断较为困难［2］。研究显示，AVM 病情加重时可诱发心源性休克、心力衰竭等并发症，危及患儿的生命安全［3］。探寻理想的生物学标志物在AVM 的诊断及预后观察中十分重要。心肌肌钙蛋白T（cardiac troponin T，cTnT）是心肌细胞肌钙蛋白的复合物亚单位，心肌细胞受损后会引起cTnT 释放到血液中，其水平与心肌损伤程度紧密联系［4］。肌红蛋白（Myoglobin，Mb）是心肌细胞损伤后最早出现异常增加的心肌蛋白标志物［5］。微小核糖核酸⁃133（microRNA⁃133，miR⁃133）属于微小核糖核酸（microRNA，miRNA）家族中的一员，近年来研究发现miR⁃133 与心肌损伤相关疾病密切相关［6］。本研究旨在探讨联合cTnI、Mb、miR⁃133 检测在AVM 患儿诊断及预后观察中的作用，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 基本资料

选取2017年5月至2020年4月期间郑州大学第一附属医院收治的136 例AVM 患儿作为研究组，其中男79 例，女57 例；平均年龄（6.33±1.65）岁。纳入标准：①皆满足《儿童病毒性心肌炎诊断标准》［7］；②病原学检查呈阳性；③临床资料完整无缺漏；④患儿年龄≤12 岁。排除标准：①合并其他器官组织恶性肿瘤或自身免疫缺陷性疾病、严重感染者；②存在肝肾功能损害者；③存在心脏病史者；④既往存在AVM 病史者；⑤精神认知障碍者。另选取同期健康体检的108 例健康儿童为对照组，男62 例，女46 例，平均年龄（8.14±2.14）岁。两组性别、年龄等基本资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。本研究经院医学伦理委员会批准通过，受试者监护人已签署知情同意书。

1.2 方法

所有对象均在医生协助下完善相关检查，研究组于入院后第2 d、对照组为体检当日抽取5 mL 空腹静脉血，离心（3 000 r/min，12 min，R=8 cm）后取分离血清，置于-80℃冰箱中保存，待检。使用北京乐普LEPU QuantGold 免疫定量分析仪，采用免疫荧光层析法测定Mb、cTnI 水平；采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应（Reverse Tran⁃scription⁃polymerase chain reaction，RT⁃PCR）检测miR⁃133 的表达，以U6 为内参，上游引物：5′⁃TTG⁃GTCCCCTTCAACCAGCTGT⁃3′，下游引物：5′⁃CAGTGCGTGTCGTGGAGT⁃3′；操作过程均严格按照说明书进行。正常参考值：cTnI≤0.09 μg/L；Mb≤80 ng/mL；miR⁃133≥3.1［8⁃9］。

1.3 随访

对研究组患儿进行为期1年的门诊或住院随访，根据患儿预后情况分为：预后不良组（包括持续性室速、室颤、心力衰竭、心脏移植、再入院、复发以及死亡等）和预后良好组（随访期间未出现不良事件）［10］。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计软件进行统计处理，计数资料以n（%）表示，行χ2检验，计量资料以（±s）表示，采用t检验；采用多元Logistic回归分析影响AVM 患儿预后的独立危险因素；采用ROC 曲线分析cTnI、Mb、miR⁃133 联合检测对AVM 的诊断价值；以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组cTnI、Mb、miR⁃133 表达水平比较

研究组cTnI、Mb 表达水平高于对照组，miR⁃133 表达水平低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组cTnI、Mb、miR⁃133 表达水平比较（±s）Table 1 Comparison of cTnI，Mb，miR⁃133 expression levels between the two groups（±s）

表1 两组cTnI、Mb、miR⁃133 表达水平比较（±s）Table 1 Comparison of cTnI，Mb，miR⁃133 expression levels between the two groups（±s）

组别研究组对照组t 值P 值n 136 108 cTnI（μg/L）0.59±0.15 0.07±0.02 35.760<0.001 Mb（ng/mL）98.26±25.74 34.33±8.65 24.718<0.001 miR⁃133 2.32±0.81 3.62±0.58 14.058<0.001

2.2 cTnI、Mb、miR⁃133联合检测对AVM的诊断价值

cTnI、Mb、miR⁃133 三者联合检测对AVM 诊断价值的AUC 最大，为0.915（0.844～0.986）（P<0.05）。见表2、图1。

表2 cTnI、Mb、miR⁃133 联合检测对AVM 的诊断价值Table 2 The diagnostic value of combined detection of cTnI，Mb，and miR⁃133 for AVM

图1 ROC 曲线图Figure 1 ROC curve

2.3 影响AVM 患儿预后的单因素分析

所有患儿均成功完成随访，136 例患儿中预后不良21 例，预后良好115 例。肾上腺素、QT 间期、cTnI、Mb、miR⁃133 为影响AVM 患儿预后的单因素（P<0.05）。见表3。

表3 影响AVM 患儿预后的单因素分析［n（%）］Table 3 Analysis of single factors affecting the prognosis of children with AVM［n（%）］

2.4 影响AVM 患儿预后的独立危险因素分析

经Logistic回归模型分析得：使用肾上腺素、QT 间期延长、cTnI>0.09 μg/L、Mb>80 ng/mL、miR⁃133<3.1 是影响AVM 患儿预后的独立危险因素（P<0.05）。见表4。

表4 影响AVM 患儿预后的独立危险因素分析Table 4 Analysis of independent risk factors affecting the prognosis of children with AVM

3 讨论

AVM 为我国儿童常见且多发的一种疾病，近年来发病率呈显著上升趋势［11］。目前对于AVM的发病原因尚未完全明确，考虑与病毒感染直接造成心肌细胞的损伤有关［12］。研究显示，病毒性心肌炎若未予以及时治疗，可能导致患者心律失常、心力衰竭以及肥厚性心肌病等严重后遗症的出现，加之AVM 临床表现无明显特异性，致使早期诊断早期治疗存在一定难度［13⁃14］。

cTnⅠ仅存在于心肌细胞中，外周血中含量极少。研究显示，在心肌细胞膜完整的情况下，cTnT无法透出细胞膜进入血循环；而当心肌出现损伤时，心肌细胞破裂，致使cTnⅠ释放进入血液循环［15］。本研究结果中，研究组cTnI 表达水平明显高于对照组，这与既往研究结果相似［16］，表明可将cTnⅠ作为判断心肌损伤的重要血清标志物。究其原因为，由于心肌的炎症致使心肌细胞膜的稳定性遭到破坏，胞浆中游离的cTnT 被释放，致使血清中cTnT 的表达水平升高。

Mb 为早期监测心肌损伤的较为理想的一个生化指标，属于亚铁血红素的低分子色素蛋白的一种，广泛存在于心肌和骨骼肌的细胞中，当肌细胞膜完整性破坏后，由于Mb 的分子量较小，Mb 可快速被释放出来并进入血液中［17］。Escherich 等［18］研究指出，Mb 水平在AVM 患儿中存在明显升高，这与本研究结果一致。这可能是由于病毒导致心肌病变部位的供氧减少，炎症细胞浸润，引发间质水肿，致使细胞凋亡、坏死，加之胞膜的受损造成了细胞膜的通透性出现改变，引发了心肌细胞中Mb的释放，使得Mb 在血液中含量的上升，可见Mb 可能与AVM 患儿疾病的发生、发展存在一定的关联。

miR⁃133 起源于心肌以及骨骼肌中，具有横纹肌组织特异性，其参与调控心肌细胞的增生、分化、肥大以及凋亡的过程，与心肌细胞损伤存在一定的关联。研究指出，miR⁃133 在心肌肥厚及心肌梗塞的动物模型中呈异常表达状态［19］。本研究结果提示miR⁃133 可作为诊断AVM的有效指标。ROC曲线分析显示，cTnI、Mb、miR⁃133 三者联合检测对AVM 诊断价值的AUC 最大，说明通过联合检测三者表达水平对诊断AVM 具有一定价值。Logistic回归模型分析显示，使用肾上腺素、QT间期延长及cTnI>0.09 μg/L、Mb>80 ng/mL、miR⁃133<3.1 是影响AVM 患儿预后的独立危险因素。可见cTnI、Mb、miR⁃133 可作为AVM患儿预后评估的重要指标，提示临床需加强对于患儿上述因子的观察，以改善预后。

综上所述，cTnI、Mb、miR⁃133 在AVM 患儿中呈异常表达，联合检测三者可作为诊断AVM 及预后观察的有效手段。