基质金属蛋白酶9在妊高症患者胎盘中表达水平与围产儿结局的相关性研究

朱立茎，李厦洁，梁丽华

(东莞市石碣医院，广东 东莞 523290)

0 引言

病人发生妊娠期高血压这一疾病，将会对母婴的身体健康造成不良的影响，并会引发妊娠期并发症，还会对胎儿的健康生长产生限制等诸多不种的影响。在近几年的医疗机构研究中表明，发生这一病情与滋养细胞侵入子宫部位螺旋动脉较浅，胎盘的血管构造中生理性结构障碍有着密切的关系，而滋养细胞为母体子宫中的内膜以及肌层的有效浸润是人体胎盘不断形成的重要环节。而基质金属蛋白酶在人体胎盘的发育和着床过程中起着十分重要的作用。基质金属蛋白酶发生调控失调时，将会引发人体细胞滋养细胞的侵袭能力出现异常现象，如果侵袭力较弱时，则将会出现妊娠期孕妇高血压等相关疾病，其中基质金属蛋白酶特别的重要。在有关的研究中显示，正常情况下足月的妊娠孕妇和妊娠期发生高血压疾病的病人，其胎盘滋养细胞当中和血清当中的有效表达，来研究探讨基质金属蛋白酶在妊娠期发生高血压疾病中的发病原理及作用。胎盘的正常发育对正常妊娠的维持至关重要，胎盘结构或功能异常可导致某些妊娠并发症。正常妊娠的维持是胚胎与母体之间极其复杂的相互协调过程，绒毛外滋养层细胞(EVT)的正常侵蚀是妊娠顺利进行的重要环节之一，近年来研究表明，滋养层细胞侵蚀过浅可导致妊娠期高血压疾病(HDCP)的发生。HDCP患者在胎盘形成过程中存在着螺旋小动脉血管重铸异常的现象，其绒毛外滋养细胞浸润能力下降，范围缩小，浸润仅达蜕膜段，子宫螺旋动脉未经历正常妊娠时的变化却保持着相对狭窄的管径和对缩血管物质的反应，从而造成了胎盘缺血。滋养层细胞对子宫螺旋动脉侵蚀不足，使胎盘植入过浅，导致胎盘血流灌注不足即胎盘缺陷，最终引发母体系统性血管内皮损伤，从而表现出HDCP的临床症状。滋养细胞的侵袭行为受子宫旁和滋养细胞自分泌的多种因子介导，其中基质金属蛋白酶系统尤其是基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)对细胞外基质的降解是滋养细胞侵袭的限速步骤。

1 资料与方法

1.1 研究对象

妊高症的入选标准：①妊娠高血压疾病诊断标准按照《2012年妊娠高血压疾病诊疗指南》；②单胎妊娠；③孕妇以往均无任何原发性心脏病，肝病，肾病等病史，无高血压病家族史；④自愿接受试验并配合试验检查；⑤年龄在18-40岁。根据上述标准，选取我院妇产科2019年8月至2020年10月孕妇，选取其中符合要求的有妊高症孕妇45例，再选取同期15名正常孕妇为对照组。两组孕妇年龄，孕周，孕次，产次等一般临床资料比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 研究方法

抽取实验组与对照组娩出30min内的胎盘组织1g，注意避开坏死和钙化区，立即置入立即置于-20摄氏度冰冻保存，Western blot测定组织中MMP-9的表达水平。试剂一抗(Anti-MMP-9 单克隆抗体)、试剂二抗(鼠抗兔IgG)均购自武汉博士德公司，1% NP-40裂解液购自上海江莱生物科技有限公司。试验方法：将大约500mg组织样本加入到400uL 1%NP-40裂解液中(上海江莱生物 科技有限公司)混匀，加入一定量的蛋白酶抑制剂后于4摄氏度、10000r/min下离心5min，测定上清液中的蛋白浓度。量取含蛋白20ug的上清液，加入到8%SDS聚丙烯酰胺凝胶中进行垂直电泳测定，然后转至硝化纤维素膜上进行转印。硝化纤维 素膜与Anti-MMP9 抗体(BA0573，boster)于4℃下过夜孵育(1：200)。利用等级资料的秩和检验进行统计分析，以P＜0.05为有统计学意义。应用Pearson法，分析其与围产儿1min Apgar评分及体质量的相关性，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 实验组与对照组胎盘中MMP-9的表达及比较

结果判定：通过灰度值计算得到MMP-9的量，其含量处于总体水平5%之下的样本判定为阴性(-), 5% ～ 15%判定为弱阳性(+), 16% ～ 50%判定为阳性(++), ＞50%判定为强阳性(+++)。两组比校，差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。即妊高症患者胎盘中MMP-9的含量显著低于正常胎盘含量。

表1 MMP-9在妊娠期高血压疾病患者与正常妊娠患者胎盘母面中的表达及比较

2.2 围产儿结局及其相关性

实验组围产儿1min Apgar及出生体重均低于对照组，组间差异具有统计学意义，P＜0.05。见表2。Pearson相关性分析处理结果显示胎盘MMP-9蛋白表达均与围产儿结局正相关(P＜0.05)。

表2 2组围产儿结局比较(±s)

表2 2组围产儿结局比较(±s)

指标 实验组(n=45) 对照组(n=15)1min Apgar评分(分) 8.18±1.50 9.64±0.52出生体质量(g) 2104.32±361.23 3468.47±483.20

3 讨论

3.1 基质金属蛋白酶属于滋养细胞所产生的重要水解酶,其分泌量的下降将会对胎盘着床以及血管重铸产生重要的影响，从而发生胎盘供血或供氧不足现象。出现胎盘缺血和缺氧将会对其局部产生氧化应激反应，可能引起脂质过氧化以及绒毛间隙的白细胞发生活化导致血管发生内皮损伤等问题,最终将会导致发生妊娠高血压等疾病。在近些年的有关研究发现,出现妊娠期的高血压与妊娠早期滋养细胞的侵袭有着密切关联,其主要机制表现为:妊娠期高血压病人的滋养层细胞在浸润子宫螺旋动脉时仅可以达蜕膜层,因植入过浅导致相对狭小的动脉血管管径和对缩血管的出现过极的反应,从而引发胎盘中的血流灌注情况不足,最终导致母体的系统性血管内皮发生损伤,表现为妊娠期高血压疾病的出现等临床症状。在有关的研究中，通过查看正常胎盘以及先兆子痫性胎盘中的螺旋动脉,可以检测到在正常胎盘的螺旋状动脉壁中的厚度随着妊娠期的发展而会变薄,而螺旋动脉的血管薄壁上有着滋养细胞的浸润,而对于先兆子痼时，螺旋动脉的血管壁较厚,螺旋小动脉血管中几乎看不到滋养细胞,较多的细胞滋养细胞离此部分血管会有较长的距离,这样螺旋动脉血管很难实现生理重铸,以致发生胎盘缺氧和灌注不足。妊娠期高血压作为一种常见的产科疾病,据临床统计，我国发病率约10%。多发于孕20周后,临床主要病症比较复杂,主要表现为血压升高,尿蛋白含量增加,抽搐、昏迷以及心力衰竭等症状,可能会造成脏器功能的损害,如果患者终止妊娠期会使病情有所好转。妊娠期高血压也是一种比较严重的妊娠并发症,病理变化主要表现为全身小动脉痉挛状态,血管内皮损伤、血管内皮功能缺失是其中的中心发病环节。

3.2 MMP-9是一种基层蛋白质水解酶，参与降解子宫内膜细胞外基质。其主要作用是能够使细胞外基质降解,与胎膜的破裂、胎盘的形成、孕妇的创伤修复、月经周期的调控以及滋养叶细胞侵入子宫过程发生障碍有关,它还能有效调节蛋白酶以及组织细胞因子的活性,通过释放内皮血管生长因子来参与到血管的生成过程中。在妊娠过程中，胎盘绒毛的细胞滋养细胞逐渐迁徙成绒毛的基底层形成具有强大侵蚀功能的绒毛外滋养细胞。这种细胞会降解细胞外基质，侵入子宫内膜和子宫螺旋动脉。而MMP-9正是这一过程中重要的生化介质。在体外培养实验中发现:妊娠7～11周，MMP-9的表达逐渐上升,在滋养细胞分泌的酶类中占主要优势。作为滋养细胞分泌的最有效的蛋白水解酶，MMP-9的分泌量与滋养细胞的侵袭能力和血管重铸密切相关。由此推断MMP-9的表达及活性的变化影响滋养细胞侵袭能力的变化，从而有可能导致滋养细胞对子宫内膜侵入过浅，子宫螺旋小动脉重铸障碍,血流灌注不足，胎盘缺血缺氧，最终出现临床症状，并对围产儿造成不利的影响。本研究提示妊高症患者胎盘中MMP-9呈低表达，且MMP-9低表达水平会不利于围产儿的发育。由此可见，胎盘中MMP-9水平与妊高症及围产儿结局具有相关性，可据此评估围产儿结局并予以早期干预。

3.3 妊娠期高血压疾病对新生儿出生结局的影响国内外的研究均表明HDCP可以增加胎儿宫内生长发育受限和小于胎龄儿发生的危险性。这两者不仅是围产儿死亡的重要原因，还会对婴儿期乃至更加长的时间内的身体发育和智能发育产生影响Ⅲ。对HDCP患者新生儿出生结局的研究，是长期研究的基础。妊娠期的高血压与新生儿出生结局有关的理论在几十年前就被Taylor提出。妊娠期高血压是全球第二位导致孕妇死亡的疾病，其引发的宫内发育迟缓、胎盘早剥、早产等又对围产结局产生不良影响。本次研究对象中病例组围产儿1min Apgar及出生体重均低于对照组，Pearson相关性分析处理结果显示胎盘MMP-9蛋白表达均与围产儿结局正相关。

3.4 由于根据疾病严重程度分组样本量少，所以在对比 Apgar及出生体重时把不同严重程度的妊高症孕妇分娩的新生儿作为实验组，本研究未深入分析胎盘中MMP-9含量与轻重度妊娠高血压以及围产儿结局的影响，只能说明MMP-9的表达与妊高症和围产儿结局具有一定的相关性。