免疫组化法和荧光原位杂交法在乳腺癌HER2 表达水平检测中的应用比较

廖玉婷，张嘉文，张丽君，梁远秋，高敏，陈靖

南方医科大学附属东莞医院病理科，广东东莞 523000

乳腺癌是全球范围内女性发病率和病死率均高的恶性肿瘤，复发和转移的发生率高，严重威胁女性的生命健康和生活质量，早发现、早诊断、早治疗能够显著改善患者的预后[1]。 乳腺X 线检查、超声检查、MRI 检查等是乳腺癌早期筛查的重要手段，随着细胞分子生物技术的不断发展，孕激素受体（progesterone receptor, PR）、Ki67、雌激素受体 （estrogen receptor,ER）、人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2, HER2）等分子标志物被用于诊断乳腺癌，预测治疗敏感性和患者预后，显示出良好的临床应用价值[2-3]。 研究显示15%～25%乳腺癌中HER2表达水平升高，HER2 过表达与不良生物学特征和临床结局有关，抗HER2 治疗能显著改善HER2 阳性乳腺癌患者的预后[4]。《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2019 年版）》中指出为期1 年曲妥珠单抗辅助治疗依然是早期HER2 阳性乳腺癌术后治疗的标准选择，以曲妥珠单抗为基础的化疗能显著提升HER2阳性乳腺癌患者的治疗效果，改善预后，因此通过免疫组化法（immunohistochemistry, IHC）和荧光原位杂交法（fluorescence in situ hybridization, FISH）检测乳腺癌HER2 表达情况对于筛选靶向治疗药物，制定治疗方案有重要意义[2-5]。 该研究应用IHC 检测HER2蛋白的表达水平，收集2019 年1 月—2020 年12 月在该院就诊的乳腺癌患者188例为研究对象，应用FISH 检测HER2 基因的扩增情况，探究两种方法的检测一致性，以其指导临床诊断和治疗。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集该院就诊的乳腺癌患者188例为研究对象，乳腺癌患者年龄为25～78 岁，中位年龄51 岁。纳入标准：①所有研究对象均经影像学和病理学检查确诊为原发乳腺癌患者； ②患者的临床病理学资料完整；③患者对研究内容知情同意。 排除标准：①接受过放疗或化疗者；②合并其他恶性肿瘤者；③合并严重感染者；④合并慢性消耗性疾病或肝肾等重要脏器功能衰竭者；⑤接受过内分泌或手术治疗者；⑥合并高血压糖尿病等基础疾病者。

1.2 方法

记录患者的年龄、组织学分类等临床资料，手术中取肿瘤组织，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋用于IHC或FISH 检测。 将组织切片脱蜡修复，IHC 染色使用HER2 检测试剂盒（免疫组化法）（Dako Denmark A/S）进行检测，结果根据《乳腺癌HER2 检测指南（2014版）》[6]判定，0、1+为阴性，3+为阳性，2+为不确定。FISH检测使用乳腺癌HER2 基因检测试剂盒（广州安必平医药科技股份公司）进行检测，结果根据《乳腺癌HER2检测指南（2014 版）》判定，HER2/CSP≥2.0 为扩增阳性，HER2/CSP＜2.0 且平均HER2≥6.0 为扩增阳性，HER2/CSP＜2.0 且平均HER2＜4.0 为扩增阴性，HER2/CSP＜2.0 且4.0≤HER2＜6.0 为扩增不确定，需增加判读的细胞数或更换肿瘤蜡块重新实施FISH 检测。

1.3 统计方法

采用SPSS 24.0 统计学软件处理数据，计数资料用[n(%)]表示，采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法检测HER2 的结果比较

188例乳腺癌患者中，IHC 3+乳腺癌患者46例，占比24.46%，2+乳腺癌患者73例，占比38.82%，0/1+乳腺癌患者69例，占比36.70%；FISH 检测HER2 扩增阳性的患者有62例，占比32.97%，HER2 扩增阴性的患者有126例，占比67.03%，两种检测方法的阳性率间比较，差异有统计学意义（χ2=85.990，P＜0.05）。 见表1。

表1 两种方法检测HER2 的结果比较

2.2 两种方法检测的灵敏度和特异度比较

当IHC 和FISH 检测结果都为阴性时，两种方法的一致性检验Kappa=0.399，FISH 检测的灵敏度为94.20%，特异度为48.74%，两种方法比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；当IHC 和FISH 检测结果都为阳性时，两种方法的一致性检验Kappa=0.639，FISH 检测的灵敏度为86.96%，特异度为84.51%，两种方法比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；当IHC 检测结果为2+时，两种方法的一致性检验Kappa=0.120，FISH检测的灵敏度为75.34%，特异度为38.26%，两种方法比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

乳腺癌是我国女性发病率最高的恶性肿瘤，临床常用TNM 分期及影像学检查结果对乳腺癌进行描述，近年来ER、PR、Ki67、HER2 等分子标志物被用于制定乳腺癌患者靶向治疗方案，降低患者的病死率，提升临床治疗效果[7]。由编码基因ERBB2 扩增可导致HER2 过表达，持续激活下游信号通路，与肿瘤细胞侵袭性升高和不良预后有关，赫赛汀（注射用曲妥珠单抗）为靶向HER2 的单克隆抗体，适用于HER2 过度表达的转移性乳腺癌，可作为单一药物治疗已接受过1 个或多个化疗方案的转移性乳腺癌或与紫杉醇或者多西他赛联合，也可用于接受手术、含蒽环类抗生素辅助化疗和放疗后的HER2 过度表达乳腺癌的辅助治疗，与紫杉醇等联合应用可使患者生存期延长，改善生活质量，同类药物帕妥珠单抗、拉帕替尼也被用于乳腺癌临床治疗[8-9]。 因此，使用IHC 或FISH检测得到的IHC3+或IHC2+/FISH+结果是定义HER2阳性的明确依据，是临床制定治疗方案的重要依据，HER2 状态的准确判断是疗效预测和患者筛选的前提，有重要的临床价值。

IHC 和FISH 是临床常用的HER2 表达水平检测方法，美国临床肿瘤学会/美国病理学会（American society of clinical oncology/college of American pathologists, ASCO/CAP） 发布的乳腺癌HER2 检测指南中推荐使用IHC 检测HER2 蛋白表达状态，应用FISH检测HER2 基因扩增水平，而IHC 检测HER2 表达结果中2+结果被判定为可疑病例，仍需进行FISH 检测进一步判定[10]。 该研究取乳腺癌患者的肿瘤组织，分别用IHC 和FISH 方法检测HER2 表达情况，188例乳腺癌患者中，IHC 检测HER2 表达阳性（3+）的患者占比24.46%，可疑阳性患者占比38.83%，阴性患者占比36.70%；FISH 检测HER2 扩增阳性的患者占比32.97%，HER2 扩增阴性的患者占比67.03%，显著高于IHC 检测HER2 阳性和阴性的患者比例，提示FISH 在HER2 表达状态判定中有更确定的检测结果。

当IHC 检测结果为2+时，两种方法的检测一致性最差，当IHC 检测结果为0/1+或3+时，两种方法的检测一致性较好，FISH 检测的灵敏性较高，提示患者在临床诊断时IHC 检测为2+，需进行FISH 检测明确诊断，作为最后的治疗依据，和指南中提到的检测方案相符[11]。 IHC 检测技术难度和试剂成本低廉，对实验室条件要求较低，检测收费较FISH 低，在临床检测中显示出更大的应用优势，更易于在基层医疗机构中推广应用。

HER2 位于17 号染色体上，部分患者可能存在17 号染色体为多倍体的情况，导致HER2 基因表达水平较高，董兵斌等[12]应用HER2/CEP17 信号比反应HER2 基因扩增状态，降低FISH 检测过程中可能出现的假阳性，预测新辅助化疗患者的预后病理状态。该研究中IHC HER2 0/1+和FISH 阴性、IHC HER2 3+和FISH 阳性检测均显示出良好的一致性，但两种方法的检测结果均有显著性差异，因此，对于IHC 和FISH 的HER2 检测结果临床是都需要参考的，对于IHC HER2 2+的乳腺癌患者，需根据患者ER、PR、BRCA1 和BRCA2 等分子标志物的表达情况综合选择治疗方案[13]。

综上所述，IHC 和FISH 是临床常用的乳腺癌HER2 表达的检测方法，IHC 检测结果为HER2 2+时，应使用FISH 检测进一步判定，实际工作中可结合具体情况，合理高效应用各种检测方法，为临床治疗提供准确依据。