MicroRNA、TIF1γ 和HBV- DNA 在乙肝相关肝细胞癌复发中的表达分析

臧唯，索朗多吉，旦增群培

1.吉林市中心医院肝胆外科，吉林吉林 132000；2.日喀则市定结县人民医院外科，西藏定结 857900

乙肝相关肝细胞癌是临床常见肿瘤疾病，有较高发生率和病死率，严重危害患者的健康安全[1]。目前已知在乙肝相关性肝癌复发中乙肝病毒基因（HBVDNA）阳性的存在有重要意义，在肿瘤免疫中虽然转录中介因子1γ （TIF1γ）、MicroRNA 作用功能已被进行了研究分析，但尚不确定三者间的关联性在乙肝相关肝细胞癌中的作用机制与表达情况[2]。 故该文选取2017 年1 月—2020 年12 月该院接收的78例乙肝相关肝细胞癌患者作为观察组对象，并另选取非复发乙肝相关肝细胞癌患者78例作为作为对照组，分析在乙肝相关肝细胞癌复发中TIF1γ、MicroRNA 和HBVDNA 的表达情况，并作进一步阐述，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

把该院接收的78例乙肝相关肝细胞癌患者作为观察组，男40例，女38例； 年龄54～79 岁，平均（66.52±2.14） 岁； 复发无法行手术治疗的患者有42例，乙肝相关肝细胞癌复发采取多次或二次手术治疗的患者有36例。 另选取非复发乙肝相关肝细胞癌患者78例作为对照组，男41例，女37例；年龄54～79岁，平均（66.48±1.26）岁。 两组一般资料对比，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。 对于该研究，医学伦理委员会知晓且同意研究进行。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1纳入标准研究选取的乙肝相关肝细胞癌者均已经手术病理、影像学检查确诊；研究所选病例年龄均≥54 岁，但≤79 岁；所选对象均签署知情同意书，同意研究进行。

1.2.2排除标准凝血功能障碍者； 免疫能力低下者；精神功能严重障碍者；对研究不配合者。

1.3 方法

实施实时荧光定量PCR（realtime PCR）技术对研究所选对象血浆中MicroRNA 表达情况及对肝脏组织细胞表达情况实施检测； 实施PCR 测定研究所选对象的HBV-DNA 情况，开展酶联免疫吸附试验（ELISA），操作时应根据试剂盒说明步骤严格执行，并对结果进行判断。 实施PCR 对TIF1γ 进行检测，PCR 产物与入线性化表达载体相连接，反应条件是在42℃环境下连接15 min，在25℃环境下连接30 min。该次研究开展，所应用的PCR 仪为医疗专用设备，型号为ABI-2720，由北京世纪科信科学仪器有限公司提供； 所应用的DNA 测序仪则是由上海艾研生物科技有限公司提供，型号为ABI Prism 3730XL 型；所应用的凝胶成像仪、凝胶成像仪均是由济南好来宝医疗器械有限公司提供，型号分别为BG-gdsAUTO 520型、DYCA-20F 型等；TIF1γ （16G9）：TIF1γ 抗体是上海创高提供，以人和鼠为适应物种。

1.4 观察指标

观察分析对照组、观察组TIF1γ、MicroRNA 高表达、低表达水平情况；观察分析复发非手术组、复发手术组TIF1γ、MicroRNA 高表达、低表达水平情况；观察分析手术前后对照组、复发手术组HBV-DNA 水平阳性率情况，并对手术前后的变化情况进行探究。 阳性率=HBV-DNA 水平阳性例数/总例数×100.00%

1.5 统计方法

采用SPSS 25.0 统计学软件进行数据处理，计量资料以（±s）表示，采用t 检验；计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组、观察组TIF1γ、MicroRNA 表达水平比较

对照组、观察组患者的TIF1γ、MicroRNA 高表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；较观察组，对照组的TIF1γ、MicroRNA 低表达水平更低，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 对照组、观察组TIF1γ、MicroRNA 表达水平比较（±s）

表1 对照组、观察组TIF1γ、MicroRNA 表达水平比较（±s）

组别TIF1γ高表达 低表达MicroRNA高表达 低表达观察组（n=78）对照组（n=78）t 值P 值0.10±0.09 0.08±0.05 1.716 0.088 0.49±0.06 0.01±0.02 67.028 0.001 0.12±0.07 0.10±0.09 1.549 0.123 0.52±0.14 0.01±0.06 29.572 0.001

2.2 复发非手术组、复发手术组TIF1γ、MicroRNA表达水平比较

复发非手术组、复发手术组患者TIF1γ、MicroRNA 高表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；较复发非手术组，复发手术组患者TIF1γ、MicroRNA 低表达水平更高，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 复发非手术组、复发手术组TIF1γ、MicroRNA 表达水平对比（±s）

表2 复发非手术组、复发手术组TIF1γ、MicroRNA 表达水平对比（±s）

组别TIF1γ高表达 低表达MicroRNA高表达 低表达复发非手术组（n=42）复发手术组（n=36）t 值P 值0.54±0.14 0.57±0.15 0.913 0.364 0.32±0.05 0.67±0.09 21.623 0.001 0.69±0.20 0.61±0.16 1.928 0.058 0.48±0.11 0.59±0.12 4.222 0.001

2.3 对照组、复发手术组手术前后HBV-DNA 水平阳性率比较

术前急性期、术后3 d、术后2 周时段，复发手术组、对照组阳性率比较，前者所占比高于后者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 对照组、复发手术组手术前后HBV-DNA 水平阳性率比较[n（%）]

3 讨论

乙肝相关肝细胞癌是临床常见恶性肿瘤疾病，有较高的病死率及发生率，严重威胁患者健康安全，影响患者生存时间。手术疗法是目前临床治疗该疾病的常用方法，虽然能取得较好效果，但也存在疾病复发概率。 研究证实，导致乙肝相关肝细胞癌复发的原因和多因素相关，如TIF1γ、MicroRNA 异常水平等[3]。 而且也有报道表明，不仅在其他直肠肿瘤中MicroRNA的低表达水平处于较高状态，而且MicroRNA 的低水平表达异常情况也会出现在乙肝相关肝细胞癌中[4]，由此能说明，MicroRNA 属于乙肝相关肝细胞癌的抑制因子。 转化生长因子（TGF）-β1通路桥架功能在乙肝相关肝细胞癌肝细胞中是相对繁琐的[5-6]。 有研究指出，在乙肝相关肝细胞癌中TGF-β1 通路的激活较为常见[7]，由此得出，TIF1γ 具有能对TGF-p/Smad 激活予以调控的通路功能[8]。研究表明，肝脏癌细胞经水平表达较低的TGF-β1来使其对TGF-β1促癌效应的敏感性增强，进而会提高肿瘤复发情况发生[9]。 另外，在乙肝相关肝细胞癌复发中HBV-DNA 担任重要角色[10]。有研究报道指出，乙肝相关肝细胞癌的复发病死率和HBV-DNA 阳性高表达有一定关联性，且量效关系明显，术后HBV-DNA 的高量效则是导致术后乙肝相关肝细胞癌复发的主要原因[11]。

虽然TGF-β1和MicroRNA 水平在乙肝相关肝细胞癌复发时和信号通路的功能机制、机体免疫功能机制尚未全部阐述清楚，但经测定免疫指标得出，TGFβ1与MicroRNA 存在于复发型肝相关肝细胞癌中[12-13]。TGF-β1与MicroRNA 作为一种媒介参与乙肝相关肝细胞癌的复发。由于乙肝相关肝细胞癌的发生属于一个多步骤、多因素参与的复杂过程，和乙肝病毒（HBV）慢性持续性感染有一定关联性[14]。HBV 慢性感染易诱发肝细胞增殖与再生、继发性肝纤维化和肝脏炎症受损等，从而造成肝脏恶性变化。 大部分乙肝相关肝细胞癌患者死于肿瘤快速进展相关病症，对其进行早期诊断时只有肝移植或肝切除可作为可行有效的治愈方法[15]，然而，更为有效的治疗靶点与诊断方法则无法确定。 有报道表明，在对基本细胞调节期间MicroRNA 能起到重要作用，这些过程包括细胞命运选择和发育、凋亡和增殖，基本上60%左右的人类基因受MicroRNA 调控。 MicroRNA 能对多种类型肿瘤进行调控，其异常表达和一些肿瘤的发生有一定关联性，其作用机制为当MicroRNA 呈现异常表达时，经对癌基因或肿瘤抑制基因的表达下调，能对肿瘤发生过程予以抑制或促进。 在该次研究中，以该院接收的78例乙肝相关肝细胞癌患者为观察组，并另选取非复发乙肝相关肝细胞癌患者78例作为对照组，从结果中可知，在比较TIF1γ、MicroRNA 表达水平中，观察组的低表达水平分别是（0.49±0.06）、（0.52±0.14），均高于对照组的（0.01±0.02）、（0.01±0.06）（P＜0.05）；复发手术组患者TIF1γ、MicroRNA 低表达水平分别是（0.67±0.09）、（0.59±0.12），明显高于复发非手术组的（0.32±0.05）、（0.48±0.11）（P＜0.05）；复发手术组术前急性期、术后3 d、术后2 周HBV-DNA 水平阳性率占比分别是86.11%、80.56%、41.67%，明显高于对照组的12.82%、17.95%、1.28%（P＜0.05）。 与周莹等[16]的研究结果类似： 复发手术组术后3 d 占91.2%、术后2 周41.7%高于对照组。 说明TIF1γ、MicroRNA 低表达水平，HBV-DNA 的高度复制能使肿瘤对机体的复发侵犯率增加，能对乙肝相关肝细胞癌患者的预后带来严重影响。 由此说明，针对乙肝相关肝细胞癌复发患者，在乙肝相关肝细胞癌早期治疗诊断中上述3种因子对其评价有重要作用，临床应用价值高[17]。

在肖钟迪等[18]的研究中虽然只分析了MicroRNA，并未对HBV-DNA、TIF1γ 做过多研究，但从分析可知，在肝癌中miR-218 低表达，且和肺癌预后及转移复发有一定关联性。 这一结果与该次研究证实的MicroRNA 低表达相一致。

综上所述，在乙肝相关肝细胞癌患者中，诱发乙肝相关肝细胞癌复发的因素主要为HBV-DNA 阳性表达，以及TIF1γ、MicroRNA 低表达水平增高，且能对乙肝相关细胞癌患者预后带来影响。