MMP- 9、miR- 497、CK- MB 表达对心肌梗死患者病情发生发展的影响

董照刚，郑喜胜，荀丽，马静，左方田

（南阳市中心医院1.综合ICU；2.病案室，河南 南阳 473009）

临床上的流行病学研究发现，急性心肌梗死（AMI）的发病率可超过485/1 万人左右[1]。 在具有基础性高血脂症的人群中，AMI 的发病率和致残率均可显著的上升[2]。 在探讨AMI 患者病情进展机理的过程中，发现细胞因子或者生物学相关蛋白的表达，能够通过影响到心肌细胞的缺氧缺血性损伤，加剧血管内皮细胞的损伤，进而参与到AMI患者的病情进展过程。 基质金属蛋白酶-9（MMP-9）是金属蛋白酶家族成员，其能够通过影响到心肌细胞间质成分的损伤，促进炎症性因子在播散，进而提高心肌细胞膜的损伤程度[3]；miRNA 是一类18～25 nt 长度的小分子非编码单链RNA。 它们广泛存在于真核细胞中，能通过降解靶mRNA 或者抑制其翻译，从而调节细胞增殖、分化与凋亡，参与个体发育、 机体代谢、 肿瘤发生及发展等过程,miR497 位于人类染色体17p13[4]；肌酸激酶同工酶（CK-MB）是心肌酶谱性指标，其能够反应心肌细胞及细胞内线粒体的损伤程度,在急性冠脉综合症或者AMI 患者中，CK-MB 的表达均可明显上升[5]。为了揭示MMP-9、miR-497、CK-MB 的表达与AMI 患者的病情关系，从而为临床上AMI 患者的诊疗提供理论方面的参考，本次研究选取2017年1月至2018年3月在我院就诊的AMI 患者118 例，探讨了MMP-9、miR-497、CK-MB 的表达及其与AMI 患者的病情关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 采用回顾性研究方法，选取2017年1月-2018年3月在我院就诊的急性心肌梗死（AMI）患者118 例，其中发作时间＜6h 患者52 例，发作时间6～12h 患者36 例，发作时间＞12h 患者30 例； 纳入标准： ⑴诊断符合中华医学会制定的AMI 标准，且经心电图和冠状动脉造影确诊；⑵患者心肌梗死发作时间明确； ⑶患者及家属知情同意血清采集前未行溶栓、急诊PCI 等治疗；⑷均为冠脉单支病变。 排除标准：⑴有恶性肿瘤、糖尿病、免疫性疾病、肝肾功能障碍、主动脉夹层、急慢性感染等其他疾病；⑵近3 个月内有手术治疗史；⑶妊娠期、哺乳期妇女；⑷脑出血、缺血性脑卒中等脑血管意外患者。 同时选取同期健康志愿者100例作为对照组，AMI 组和对照组受试者性别、年龄等比较差异无统计学意义（P＜0.05），见表1。 本次研究获得医院伦理委员会批准。

表1 AMI 组和对照组一般资料比较

1.2 实验方法 在入院后常规采集患者肘部静脉血4ml（对于对照组健康对照人群，在方便门诊进行志愿者外周血标本的采集，采用一次性无菌穿刺管采集肘部静脉血4ml），1500r/min 离心15min后采集上层清亮液体，-20℃放置冰箱保存。采用贝克曼库尔特公司生产的DX800 免疫发光仪器及配套试剂进行MMP-9、CK-MB 的检测，室内质量控制符合标准。 采用7300 型荧光定量PCR 仪(美国ABI 公司)进行miR-497 的检测，血miRNA 的引物和反向互补探针委托美国ABI 公司设计并合成。

1.3 统计学处理 统计分析采用SPSS19.0 软件，计量资料采用（±s)表示，两组间比较使用t 检验，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t 检验；计数资料比较使用χ2检验；相关性采用Pearson 相关分析。 P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AMI 组和对照组MMP-9、miR-497、CK-MB比较AMI 组MMP-9、miR-497 和CK-MB 明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 AMI 组和对照组MMP- 9、miR- 497、CK- MB 比较

2.2 AMI 组不同发作时间患者MMP-9、miR-497、CK-MB 比较 发作时间＞12h 患者MMP-9、miR-497 相对表达量和CK-MB 明显高于＜6h 和6～12h患者（p＜0.05）； 发作时间6～12h 患者者MMP-9、miR-497 相对表达量和CK-MB 明显高于＜6h 患者（P＜0.05）,见表3。

表3 AMI 组不同梗死面积患者MMP- 9、miR- 497、CK- MB 比较

表3 AMI 组不同发作时间患者MMP- 9、miR- 497、CK- MB 比较

2.3 AMI 组不同梗死面积患者MMP-9、miR-497、CK-MB 比较 梗死面积≥50%患者MMP-9、miR-497 和CK-MB 明显高于梗死面积＜50%患者（P＜0.05），见表4。

2.4 相关分析 将AMI 组患者MMP-9、miR-497与CK-MB 进行相关分析，结果显示：MMP-9、miR-497 与CK-MB 呈正相关（r=0.454 和0.471，P＜0.05）。

同时MMP-9、miR-497、CK-MB 与梗死面积进行相关分析，结果显示：miR-497、CK-MB 与梗死面积呈正相关 （r=0.344 和0.329，P＜0.05），而MMP-9 与梗死面积无明显相关性（P＞0.05）。

3 讨论

在合并有冠状动脉内皮细胞损伤或者粥样硬化性的患者中，AMI 的发病率可显著上升，在年龄大于55岁长期吸烟的群体中，AMI 的发病率可进一步的上调[6]。 临床上AMI 的发生，能够导致患者恶性心血管临床结局的发生，并导致患者总体生存时间的下降[7,8]。 对于AMI 患者的病情评估具有重要的意义，其能够在指导AMI 的治疗时机的选择、治疗预后的判断等方面发挥作用。 血清学指标的定量化研究，可以为临床上心血管疾病的诊疗提供一定的参考。 部分研究者主张通过肌钙蛋白等心肌酶谱指标，进而评估AMI 患者的病情。 但肌钙蛋白等指标评估的一致性率较低，其对于AMI患者病灶梗死面积评估的灵敏度不足40%[8]。 本次研究通过对于AMI 患者血清中MMP-9、miR-497、CK-MB 的分析研究，不仅能够揭示AMI 患者的病情进展机理，同时能够为临床上AMI 患者的治疗预后的判断提供参考指标。

MMP-9 能够通过激活金属蛋白分解酶，其对于细胞间质成分的分解作用，能够显著促进缺氧条件下炎症性因子的播散。 MMP-9 结构上包含了多个丝氨酸和脯氨酸结构,能够提高其对于心肌细胞膜表面糖蛋白的结合程度，进而加剧心肌细胞的损伤和凋亡[9]； miRNA 广泛存在于真核生物中，约有22 个核苷酸组成的小分子RNA，通过抑制mRNA 翻译调节基因转录后水平的表达，研究发现miRNA 在心脏的发育及心血管疾病(心肌纤维化、心肌肥厚、动脉粥样硬化、心肌炎、高血压等)中发挥重要作用[10]；CK-MB 是心肌酶谱性指标，其主要表达与心肌细胞膜及线粒体结构内，在心肌细胞膜破裂损伤的过程中，CK-MB 的表达可明显上升。部分研究者探讨了CK-MB 的表达与AMI 的关系，认为CK-MB 的表达上升对于早期诊断AMI具有重要参考意义[11]，但对于MMP-9、VEGF 的分析不足。

本次研究对于AMI 患者血清中MMP-9、miR-497、CK-MB 的表达分析研究可见，在病例组患者血清中，MMP-9、VEGF、CK-MB 的表达均明显上升，提示了MMP-9、miR-497、CK-MB 的高表达均能够参与到AMI 的病情进展过程。 分析相关指标的高表达与AMI 的病情关系，考虑由于下列基础性机制有关[12-14]：⑴MMP-9 的表达上升，不仅能够加剧心肌细胞的缺氧性损伤，同时还能够影响到心肌细胞间质成分的纤维化；⑵miR-497 能够影响到血管内皮细胞的凋亡，导致冠状动脉血管侧支循环的建立障碍；⑶CK-MB 的上升能够反应心肌细胞膜的损伤和分解程度。 朱嘉俊等[15]研究者也发现，在AMI 患者血清中，MMP-9 的表达浓度可平均上升35%～65%，在合并有明显的心功能紊乱或者其他恶性心血管临床结局的患者中，MMP-9 的表达浓度上升更为明显。 在不同的发病时间节点上，可以发现在发病6h、发病12h 的动态随访过程中，MMP-9、miR-497、CK-MB 的表达浓度逐渐上升，同时随着观察随访时间的延长，MMP-9、miR-497、CK-MB 的上升更为明显，提示了相关细胞因子的表达具有明显的时间依赖性，这主要由于随着发病时间的延长，心肌细胞的病理性损伤导致的累及性效应，能够促进体内多种病理性信号通路的激活，进而促进MMP-9、miR-497、CK-MB 的持续性释放。 在AMI 患者梗死面积较大的患者中，MMP-9、miR-497、CK-MB 的表达浓度较高，高于AMI 梗死面积较小组，统计学差异较为显著，进一步提示了MMP-9、miR-497、CK-MB 的高表达对于AMI 患者病情进展的影响，这主要由于相关指标的表达上升，能够影响到炎症性因子的播散，加剧血管分支的循环障碍，进而导致梗死面积的增加。 相关关系分析研究也可见，MMP-9、miR-497与CK-MB 呈正相关，推测相关指标可能在促进AMI 的病情进展过程中发挥了一定的协同作用。

综上所述，在AMI 患者血清中，MMP-9、miR-497 与CK-MB 的表达浓度明显上升，同时MMP-9、miR-497 与CK-MB 的表达与AMI 患者的发病时间或者梗死面积密切相关。