HDP 患者抗2- GP1 抗体水平与妊娠结局的相关性研究

张颖，武明莉，刘芳，杨小风

（郑州大学附属郑州中心医院妇产科，河南 郑州 450000）

妊娠期高血压疾病(hypertension disorder of pregnancy HDP)是妊娠期产妇特异性常见并发症[1],典型临床症状主要表现为高血压、水肿、蛋白尿等[2]。HDP 是造成不良围生儿结局的危险因素[3]。目前关于HDP 的发病机制较为复杂，其中以胎盘缺血缺氧致血管内皮细胞严重损伤而导致全身小血管痉挛进而表现出妊娠期高血压的临床症状的机制学说备受专家青睐[4]。 抗磷脂综合征（antiphospholipid syndrome，APS），以抗磷脂抗体（antiphospholipid antibody，APA） 水平升高为主要病理性改变，参与血管内皮细胞的损伤过程，是HDP 发病的重要危险因素[5,6]。近年来，有研究报道[7]抗β2-糖蛋白1 （β2-glycoprotein 1，β2-GP1）作为APA 重要的辅助因子也参与HDP 的缺血缺氧损伤过程。 目前国内外关于β2-GP1 与HDP 诊断、 病情及妊娠结局评估的相关报道并不多，本研究选取2018年1月至2019年3月在我院治疗的HDP 患者按照病情严重程度分为轻度、 重度。 同时选取健康产妇70例作为对照组，对比分析各组血清抗2-GP1 抗体水平及随访妊娠结局差异。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月至2019年3月在我院治疗的HDP 患者87 例，其中轻度患者34例，重度患者53 例（轻度：孕周20 周后收缩压≥140mmHg 和/或舒张压≥90mmHg，蛋白尿≥0.3g/24h 或随机尿检尿蛋白阳性≥（+），重度：收缩压≥160mmHg 和/或舒张压≥110mmHg，蛋白尿≥2g/24h 或随机尿检尿蛋白阳性≥（++）。 纳入标准：（1）诊断符合《妇产科学》中的标准[8]；（2）初产妇；（3）单胎妊娠；（4）患者及家属知情同意；（5）入院前未经治疗。 排除标准：（1）有胎儿畸形、胎儿遗传性疾病；（2）产妇有肝肾功能障碍、结缔组织病、HIV 感染等其他疾病；（3）妊娠期糖尿病、妊娠期并发重症肝炎、妊娠期肝内胆汁淤积症等并发症。 同时选取健康产妇70 例作为对照组，HDP 组和对照组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 HDP 组和对照组一般资料比较

1.2 实验方法β2-GP1 抗体检测： 三组研究对象均为孕晚期，分别抽取三组患者住院第一天空腹状态静脉血3ml，置于含10%（体积比）枸橼酸钠抗凝液的试管中，室温静置30min 后，采用离心机以3000r/min 转速离心15min，将上层分离血清置于-20℃冰箱 中保存备用，采用酶联免疫吸附法（ELISA） 检测孕妇β2-GP1 抗体水平，所需试剂盒购自苏州露水生物科技有限公司，操作步骤严格按照说明书进行。

选取血清样本用缓冲液以1:20 比例稀释，再以10 倍浓缩，取干净吸管取酶结合物以1∶10 比例用缓冲液稀释，清洗缓冲液，10 倍浓缩处理，用缓冲液与蒸馏水以1∶10 稀释处理，并利用恒温箱控制温度在2～8℃。 分别于相应的微孔中加入100μl 的标准品、阳性对照、阴性对照及稀释处理后的样本，并在室温条件下进行30min 的温育。 洗板操作后进行酶结合物的温育，操作与处理时间与上述无异，再次进行洗板处理，后取100μl 底物进行微孔温育15min，最后于所有微孔中加入终止液，最终进行比色处理。

1.3 随访方法 所有对象定期每个月去医院复查一次。

1.4 统计学处理 本次研究的数据分析采用SPSS22.0 软件，抗β2-GP1 抗体、年龄、孕周等资料采用（±s)形式表示，独立样本t 检验比较组间差异；不良妊娠结局等资料采用频数或百分比表示，χ2检验分析组间差异。 检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 HDP 组和对照组血清抗β2-GP1 抗体、妊娠结局比较HDP 组血清抗β2-GP1 抗体水平明显高于对照组（P＜0.05）；HDP 组胎儿生长受限、早产比例明显高于对照组（P＜0.05）。 见表2。

表2 HDP 组和对照组血清β2- GP1 抗体、妊娠结局比较

2.2 HDP 组不同病情患者血清抗β2-GP1 抗体、妊娠结局比较HDP 组重度患者血清抗β2-GP1 抗体水平明显高于轻度患者（P＜0.05）；HDP 组重度和轻度患者不良妊娠结局比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表3。

表3 HDP 组不同病情患者血清抗β2- GP1 抗体、妊娠结局比较

2.3 HDP 组有无不良妊娠结局患者血清抗β2-GP1抗体比较 HDP 组不良妊娠结局患者血清抗β2-GP1 抗体水平明显高于良好妊娠结局患者（P＜0.05）。 见表4。

表4 HDP 组有无不良妊娠结局患者血清抗β2- GP1 抗体比较

2.4 血清抗β2-GP1 抗体判断不良妊娠结局的价值血清抗β2-GP1 抗体判断不良妊娠结局的ROC 曲线下面积为0.686 (P＜0.05)，截断值为5.80U/ml，灵敏性和特异性分别为70.00% 和62.00%，见图1。

图1 ROC 曲线图

3 讨论

妊娠期高血压（HDP）一般为发生在妊娠20 周后孕妇以高血压、 蛋白尿或全身器官功能紊乱为典型病理特征的妊娠特有疾病，发病率为2.5%～3%，可导致母亲及胎儿器官出现不同程度的损伤，甚至危及母婴生命安全,是导致母亲及胎儿死亡的重要危险因素。 研究HDP 发病机制对及早诊断该疾病并寻找新的治疗思路具有重要意义。 既往文献报道[9,10]免疫、遗传或血管内皮损伤学说是HDP常见的发病机制。 血栓是贯穿HDP 发病机制全过程的主要病理性改变，同时血小板下降、血管内皮损伤、病理性妊娠等也较为常见。 有学说报道[11]抗磷脂抗体（ACA）是诱发上述临床病理性改变-ACA阳性综合征的主要诱因，对孕婴预后产生较大影响。 Singh 等[12]研究表明,抗磷脂综合征(APS) 是HDP 发病的高危因素，ACA 在诱发ACA 阳性反应间接诱导APS 的发生过程中具有一定意义。 近年来，有研究发现[13]抗2-糖蛋白1（抗β2-GP1）抗体是诱发ACA 阳性反应影响更大的物质，甚至可直接诱发APS 的发生，增加HDP 发病风险。

ACA 是一类针对各种带负电荷磷脂的自身抗体的代表，其靶抗原是存在于细胞膜或线粒体膜中具有甘油磷脂类结构的带负电荷的心磷脂，病理状态下该类心磷脂转移至细胞外通过与血清中的β2-糖蛋白1 型结合暴露抗原位点而激活产生自身抗体即抗β2-糖蛋白1 抗体（抗β2-GP1）。 有研究报道[14]抗β2-GP1 水平与血栓状态密切相关，可间接反应HDP 患者的病理性改变进展情况，同时，抗β2-GP1 诊断特异性较强，其水平超过正常范围一般见于自身免疫性疾病，可作为自身免疫血栓水平的标志物，区别于感染性疾病。 有研究报道[15]抗β2-GP1 水平升高对反应ACP 综合征的诊断灵敏性为30%～60%，特异性98%，由此推测抗β2-GP1 水平检测有利于间接反映HDP 患者血栓状态和ACP 发展进程，对诊断其疾病发展和指导临床治疗具有重要意义。 本研究结果显示，HDP组血清抗β2-GP1 抗体明显高于对照组（P＜0.05）；且HDP 组重度患者血清抗β2-GP1 抗体水平明显高于轻度患者（P＜0.05）；提示，抗β2-GP1 水平升高不仅可作为诊断HDP 的重要指标，还可反映HDP发病严重程度。 这与Ames 等[16]通过酶联免疫吸附法(ELISA) 检测分析HDP 组和健康组孕妇抗β2-GP1 水平的差异发现前者患者水平显著高于后者的结论一致。

本研究结果显示，随着HDP 患者抗β2-GP1抗体水平升高不良妊娠结局发生率升高; 提示，抗β2-GP1 抗体对HDP 患者产生一定负性作用，是导致孕妇不良妊娠结局的重要危险因素。 但本研究进一步研究未发现抗β2-GP1 抗体水平升高对HDP 组重度和轻度患者不良妊娠结局的显著影响，这与Zhang 等[17]报道结果不同，该学者发现，重度HDP 患者较轻度HDP 患者抗β2-GP1 抗体水平显著升高且具有更高的不良妊娠结局。 这可能与研究对象不同和样本量有限等有关，后期需扩大样本进一步确定抗β2-GP1 抗体水平在不同病情程度的HDP 患者妊娠结局的影响。

综上所述，HDP 患者抗β2-GP1 水平升高，与不良妊娠结局可能存在一定关系。 既往文献仅报道抗β2-GP1 抗体水平与HDP 发生率的相关性，很少有关于抗β2-GP1 抗体水平与HDP 发生严重程度和致不良妊娠结局发生率的关系。 既往文献仅确定抗β2-GP1 抗体水平升高在诊断HDP 的价值，并未发现β2-GP1 抗体水平与疾病严重程度的相关性，本研究则基于既往文献研究基础，深入确定其水平与轻重度HDP 发生率和导致胎儿生长受限、早产等不良妊娠结局发生率的关系，研究更深化HDP 发病机制的免疫学硕，更全面客观，有利于为HDP 的治疗提供新的免疫学思路。