薄层色谱法快速鉴别广陈皮与陈皮

巢颖欣，刘梦诗，杨秀娟，杨得坡，陈柏忠，蔡 轶，陶移文，郑国栋*

（1.广州医科大学药学院，广东 广州511436； 2.中山大学药学院，广东 广州510006； 3.广东新宝堂生物科技有限公司，广东 江门 529000）

陈皮为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮［1］，是我国传统的“药食同源”中药之一，含有丰富的黄酮类、挥发油成分及少量生物碱、酚酸等成分［2⁃5］，具有理气健脾、燥湿化痰等功效［6］。据2015 年版《中国药典》记载，陈皮药材主要分为陈皮与广陈皮［1］，其中广陈皮主要来源于广东、广西两省的茶枝柑，以广东新会所产陈皮最为道地，亦称“新会陈皮”。由于广陈皮与陈皮化学成分较为接近，目前尚无简单有效的鉴别方法对两者进行区分，尤其当药材加工为饮片或粉末时鉴别难度大大增加，不利于广陈皮与陈皮产业的健康发展，故寻找一种快速简便的方法准确鉴别广陈皮与陈皮显得尤为重要。

2015 年版《中国药典》 及相关报道中关于陈皮薄层鉴别大多仅以橙皮苷为单一指标［1，7］，未能全面反映陈皮药材特征且难以区分广陈皮与陈皮。而相关文献表明［8］，陈皮中除了含量较高的橙皮苷外，多甲氧基黄酮类成分如川陈皮素也是其主要成分之一，具有显著的抗炎、抗病毒、抗肿瘤等作用［9⁃11］。此外，陈皮中还富含挥发油成分［12］，具有抗氧化、平喘镇咳、抗炎抑菌等良好作用［13⁃14］。故本实验在药典的基础上加以改进，采用薄层色谱法同时鉴别黄酮类成分橙皮苷、川陈皮素及挥发性成分2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯，建立客观科学的标准以快速鉴别区分广陈皮与陈皮。

1 材料

HK⁃04B 摇摆式粉碎机（广州市旭阳机械设备有限公司）；ME 104 电子分析天平（十万分之一，瑞士梅特勒⁃托利多公司）；KQ⁃800KDE 超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；ZF⁃20D 暗箱式紫外分析仪（巩义市予华仪器有限公司）；Canon EOS M3 照相机（日本Canon 公司）；1～10 μL 玻璃点样毛细管（华西医科大学仪器厂）；薄层色谱双槽展开缸（20 cm×20 cm，上海信谊仪器厂有限公司）；硅胶G60 薄层玻璃板（10 cm×20 cm，德国Merck 公司）；硅胶GF254薄层玻璃板（20 cm×20 cm，山东烟台江友硅胶开发有限公司）；硅胶G60 薄层铝板（20 cm×20 cm，德国Merck 公司）；硅胶GF254薄层铝板（20 cm×20 cm，上海萨恩化学技术有限公司）。橙皮苷对照品（成都曼思特生物科技有限公司，批号MUST⁃15070211，纯度≥98%）；川陈皮素对照品（成都曼思特生物科技有限公司，批号MUST⁃15110911，纯度≥99%）；2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯对照品（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批号K1809090，纯度≥98%）。20 批广陈皮与14 批陈皮药材于2017 年10月至2018 年12 月收集自全国各柑橘主产地，并均经广州医科大学药学院郑国栋教授鉴定为正品，信息见表1。其他试剂均为分析纯。

表1 样品信息

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备 取适量橙皮苷、川陈皮素及2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯对照品，加甲醇摇匀后制得含1.39 mg／mL橙皮苷、1.00 mg／mL 川陈皮素、0.14 mg／mL 2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯的对照品溶液。

2.2 供试品溶液制备 取适量样品于打粉机内进行粉碎并过40 目筛。精密称取0.5 g 药材粉末置于具塞锥形瓶，加入5 mL 甲醇，密塞，称定质量，超声提取30 min（320 W），放冷后用甲醇补足减失的质量，滤过，取上清液，即得。

2.3 薄层色谱鉴别 采用2015 年版《中国药典》 薄层色谱法（第四部通则0502），吸取对照品、供试品溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G60薄层板上，先以环己烷⁃乙酸乙酯（5 ∶1）为展开剂，展至约8 cm，取出，晾干；再以乙酸乙酯⁃甲醇（10 ∶3）为展开剂，展至约3 cm，取出，晾干；最后以环己烷⁃乙酸乙酯（1 ∶1）为展开剂，展至约5.5 cm，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇试液，置于紫外灯（365 nm）下验视，结果见图1，可知广陈皮供试品色谱在与对照品色谱对应的位置均显示相同颜色的斑点，而陈皮供试品色谱中无明显的2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯斑点。

图1 34 批样品薄层色谱图

2.4 薄层色谱方法学验证

2.4.1 专属性试验 吸取橙皮苷对照品溶液（1.39 mg／mL）、川陈皮素对照品溶液（1.00 mg／mL）、2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯对照品溶液（0.14 mg／mL）、药材供试品溶液（S7、S9、S20、S23）各2 μL，在“2.3”项条件下展开，未喷1%三氯化铝乙醇试液前于UV 365 nm 处检识，结果见图2，可知供试品色谱与川陈皮素、2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯对照品相应位置显示相同颜色的斑点。再喷以1%三氯化铝乙醇试液后于UV 365 nm 处检识，发现橙皮苷对照品斑点变成亮黄色，且供试品色谱在相应位置呈现相同颜色的斑点，表明该方法专属性良好。

图2 专属性试验结果

2.4.2 稳定性试验 吸取对照品溶液以及供试品溶液（放置0、1、3 d）各2 μL，在“2.3”项条件下展开，喷以1%三氯化铝乙醇试液于UV 365 nm 处检识。结果表明，供试品溶液在3 d 内稳定性良好。

2.4.3 耐用性试验 吸取对照品溶液与供试品溶液（S7、S9、S20、S23）各2 μL，按“2.3”项下条件考察不同厂家薄层板的层析效果，结果见图3，可知不同厂家的薄层板（包括玻璃板和铝板、G60硅胶板和GF245硅胶板）均能检测到橙皮苷、川陈皮素、2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯，且分离效果良好，提示该方法耐用性良好，适用性广泛。

图3 不同厂家薄层板的薄层色谱图对比

3 讨论

3.1 样品前处理方法考察 考察了临用前粉碎、放置一段时间（1 d、20 d、6 个月）的药材粉末。图4 表明，放置一段时间的广陈皮粉末色谱图中2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯斑点明显减弱甚至消失，提示粉碎后陈皮药材油室被破坏，挥发性成分2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯易散失，不利于保存，故应选择在临用前粉碎药材。

图4 临用前粉碎、放置一段时间药材粉末薄层色谱对比

3.2 供试品溶液制备方法 《中国药典》 关于陈皮的薄层色谱鉴别中，采用了加热回流法提取并进行适当浓缩，但较为繁琐复杂，而且难以准确把溶液浓缩至1 mL。本实验采用超声提取法，取0.5 g 样品粉末，加5 mL 甲醇提取20 min（320 W），该方法方便快捷，薄层色谱图上主斑点清晰明显，可用于供试品溶液的制备。

3.3 展开系统选择 由于3 种指标成分橙皮苷、川陈皮素、2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯极性相差较大，采用同一种展开剂难以把三者有效分离，故本实验考虑根据三者极性的大小采用3 次展开法。首先采用环己烷⁃乙酸乙酯（5 ∶1）展至8 cm 以分离2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯等小极性成分，然后采用乙酸乙酯⁃甲醇（10 ∶3）展至3 cm 以分离橙皮苷等大极性成分，最后采用环己烷⁃乙酸乙酯（1 ∶1）展至5.5 cm以分离川陈皮素等中低极性成分。此外，在该展开系统下橙皮苷、川陈皮素、2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯的Rf 值分别为0.22、0.39、0.76，均在0.2～0.8 的范围内，符合薄层色谱的要求。

3.4 方法的优良性 采用该方法时，主斑点清晰平整，指标成分彼此有效分离，能有效定性鉴别陈皮中的橙皮苷、川陈皮素及2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯。根据果实的成熟度及采收时间，道地药材新会陈皮一般分为柑青皮（农历立秋至寒露之间）、微红皮（农历寒露至小雪之间）、大红皮（农历小雪至冬至之间），本实验对柑青皮、微红皮、大红皮3种类型新会陈皮样品进行全面考察，结果均显示明显的2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯斑点。此外，在供试品色谱中其他产地广陈皮也显示出明显的2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯斑点，而其他品种陈皮在橙皮苷和川陈皮素含量上与广陈皮差异较大，均无明显的2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯斑点，表明2⁃甲氨基⁃苯甲酸甲酯为广陈皮特征性成分。与采用单一指标成分作为判别依据的文献相比［1，15］，该方法同时结合3 种指标成分对广陈皮与陈皮进行分析，更能全面反映两者在化学成分上的共性与异性，故可作为其快速鉴别的有效手段。