联合检测HCC患者血清中GP73、GLYPICAN-3、MiR-335表达水平与患者诊断价值的关系

曹英，马许辉，张卉，屠荫琼

（1.河南大学医院消化内科，河南 开封 450002；2.河南大学淮河医院消化内科，河南 开封 475000）

肝细胞癌（HCC）是肝癌的主要组织学亚型，占原发性肝癌的90%,是全世界癌症相关死亡率的第三大常见原因[1,2]。目前，移植是治疗肝癌最有效的方法,但在移植过程中，肿瘤复发率和转移率较高。无论是由于肿瘤负担还是肝功能不好，70%以上的晚期患者不适合移植[3,4]。因此，早发现早治疗对于干细胞肝癌患者来说是影响疗效的关键因素。目前，HCC的评估主要以患者症状的变化为依据，临床确诊后患者可能已经处于肝癌中晚期,不利于患者及时干预治疗。近年来，随着分子生物学技术的不断进步,许多血清学因子的研究为HCC的病情评估带来了新的可能。近期的研究[5,6]发现GP73、GLYPICAN-3与MIR-335在HCC的发生发展中表达异常，可能与肝癌的发生有关。为此笔者联合诊 断GP73、GLYPICAN-3与MIR-335应 用 于HCC患者。

1 资料与方法

1.1 一般资料HCC组选取2018年1月至2019年1月我院收治的96例HCC患者，年龄在34～72岁，平均年龄为（54.68±7.35）岁，体重在50～75kg，平均体重（52.58±8.39）kg；病程1～7年,平均病程为（2.42±0.59）年；同时LC组选取68例肝硬化（LC）患者，年龄33～73岁，平均年龄为（54.89±7.56）岁，体重53～76kg，平均体重为（53.47±8.42）kg；病程为1～6年，平均病程为（2.51±0.63）年。另选取对照组我院体检的36例健康志愿者,年龄32～71岁间，平均年龄为（54.59±7.48）岁，体重50～76kg，平均体重为（52.95±8.15）kg。三组患者一般资料具有临床可比性（P>0.05）。

1.2.1 纳入标准 所有患者均符合第八版内科学中HCC的诊断标准[7]；入院前未服用免疫抑制剂等相关药物；未合并呼吸系统感染；无严重呼吸循环系统慢性疾病；未合并妊娠。

1.2.2 排除标准 物质依赖患者；未能完成本研究所含测评表者；合并肝脏手术史者；患有严重肾脏疾病或者凝血功能异常患者。

1.3 方法 比较各组患者入院后测定其GP73、GLYPICAN-3、MIR-335表达水平。分析并比较单纯GP73、GLYPICAN-3、MIR-335以及联合GP73、GLYPICAN-3、MIR-335评估对HCC的评估效果。采用ROC曲线分析各评估方法的效率。实验室检查：抽取清晨空腹肘静脉血5ml，离心取上清液。血清MIR-335采用PCR法标准三部法测定，GP73、GLYPICAN-3采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定。

1.4 评价标准GP73≥32.51 ng/ml或MIR-335相对表达量≤1.28或GLYPICAN-3蛋白>5 ng/mL我们将其评估为HCC。系列联合标准：各评估方法均为阳性，判定才成立；平行联合标准：只要评估方法中有一种评估为阳性，即判定成立。

1.5 统计学处理 采用spss19.0进行分析，计数资料采用χ2检验比较，计量资料采用t检验比较，ANOVA比较多组间计量资料，以P<0.05时，具有统计学差异。

2 结果

2.1 三组患者血清GP73、GLYPICAN-3、MIR-335水平比较HCC组血清GP73、GLYPICAN-3水平显著高于LC组和对照组（P＜0.05），HCC组血清MIR-335水平显著低于LC组和对照组（P＜0.05），而LC组患者GP73、GLYPICAN-3水平显著高于对照组（P＜0.05），LC组患者MIR-335水平显著低于对照组（P＜0.05）。见表1。

表1 三组患者血清GP73、GLYPICAN-3、MIR-335水平比较（）

表1 三组患者血清GP73、GLYPICAN-3、MIR-335水平比较（）

注：与HCC组比较，*P＜0.05；与LC组比较，#P＜0.05。

组别 n HCC组LC组对照组96 68 34 F P GP73(%)GLYPICAN-3（pg/mL）4.7±2.54*#3.32±1.43*0.23±1.12 7.52 0.002 142.3±26.4 119.2±25.3 102.3±20.2*#10.367 0.000 MIR-335（ng/mL）66.8±13.2 92.8±12.3 103.5±13.43*13.235 0.000

2.2 单项检测评估HCC病情评估效能比较 单独的GP73、GLYPICAN-3、MIR-335进行评估，HCC病情评估特异度差异显著（P＜0.05），其中，GLYPICAN-3评估的特异度显著高于GP73、MIR-335的评估特异度（P＜0.05）。见表2。

表2 单项检测评估HCC病情评估效能分析

2.3 联合检测评估HCC病情效能比较 对于平行联合检测，GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估的敏感度阴性预测值均显著高于GP73+MIR-335、GLYPICAN-3+MIR-335（P＜0.05）；对于系列联合检测,GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估的特异度显著高于GP73+MIR-335(P＜0.05);采用GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估时，系列联合检测的敏感度显著低于平行联合检测（P＜0.05），特异度显著高于平行联合检测（P＜0.05）。见表3。

表3 联合检测评估HCC病情效能比较

2.4 联合检测评估HCC的ROC曲线分析GP73+MIR-335、GLYPICAN-3+MIR-335及GP73+GLYP ICAN-3+MIR-335评估HCC的ROC曲线如图1，平行联合检测ROC曲线下面积分别为0.748、0.750和0.903，系列联合检测ROC曲线下面积为0.737、0.708和0.891，GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估的ROC曲线下面积显著高于GP73+MIR-335、GLYPICAN-3+MIR-335（P＜0.05）。见图A、B。

图1 ROC曲线分析：A为平行联合检测，B为系列联合检测

3 讨论

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种高死亡率的原发性肝癌。它是一种全球范围最常见的恶性肿瘤,尤其是在亚洲、非洲和南部欧洲。近年来,得益于医疗检验以及诊断技术的不断改进，肝细胞肝癌的检出率不断升高[8,9]。这不仅仅使得肝癌患者能得到有效的治疗,早期发现使得肝癌患者能尽早得到治疗,大大改善了此类患者的预后,而这些诊断技术的进步离不开癌症标志物的发现[10,11]。然而单独应用癌症标志物的诊断效能并不理想，因此很难单独应用于临床肝癌的诊断中。为此,笔者联合GP73、MIR-335、Glypican-3等血清标志物，将其用于肝细胞肝癌的诊断中。

高尔基体跨膜糖蛋白73(GP73)是肝癌早期诊断和术后复发病情评估的理想血清标记物,敏感性、特异性远高于40年前问世的甲胎蛋白(AFP)。研究[12]发现，GP73在正常肝组织中呈现低表达，或者不表达状态，但当干细胞病变时，GP73表达水平显著升高。值得注意的是，其表达水平的升高与病变严重性并未有显著相关性,而与疾病发生发展时期显著相关。miRNA是高度保守的非编码单链小分子RNA，miRNA家族在生物体调控过程中具有重要的作用。研究发现部分miRNA具有抑制肝癌等肿瘤生长的作用,而当miRNAs异常低表达时,常提示肿瘤的发生发展，其中就包括mir-335。有学者[13,14]尝试研究其与肝细胞肝癌的相关性，发现肝细胞肝癌患者体内血清mir-335呈现低表达状态，可能与肿瘤的生长有关。Glypican-3是近年来出现的特异性肿瘤标志物的蛋白,其特异性及敏感性相对于甲胎蛋白具有一定的优势。此外，其在肝细胞肝癌、肝硬化以及病毒性肝炎的鉴别诊断中具有较高的应用价值。

本 研 究 中，HCC组 血 清GP73、GLYPICAN-3水平显著高于LC组和对照组（P＜0.05），HCC组血清MIR-335水平显著低于LC组和对照组（P＜0.05），而LC组患者GP73、GLYPICAN-3水平显著高于对照组（P＜0.05），LC组患者MIR-335水平显著低于对照组（P＜0.05）。此结果表明，GP73、GLYP ICAN-3、MIR-335与HCC病情变化有关，路翔宇等人[15,16]也在研究中得出相似结论。单独的GP73、GLYPICAN-3、MIR-335进行评估，HCC病情评估特异度差异显著（P＜0.05），其中，GLYPICAN-3评估的特异度显著高于GP73、MIR-335的评估特异度（P＜0.05）；对于平行联合检测，GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估的敏感度阴性预测值均显著高于GP73+MIR-335、GLYPICAN-3+MIR-335（P＜0.05）；对于系列联合检测，GP73+GLYPICAN-3+MI R-335评估的特异度显著高于GP73+MIR-335（P＜0.05）；采用GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估时，系列联合检测的敏感度显著低于平行联合检测（P＜0.05），特异度显著高于平行联合检测（P＜0.05）。此结果表明，GP73+GLYPICAN-3+MIR-335联合诊断能有效提高单独GP73、GLYPICAN-3、MIR-335诊断的诊断准确度,系列联合在特异度的提升方面更有优势,而平行联合则更有助于提升诊断的敏感性。GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估的ROC曲线下面积显著高于GP73+MIR-335、GLYPICAN-3+MIR-335。此结果表明，GP73+GL YPICAN-3+MIR-335联合评估更能有效提高HCC的病情变化,其中平行联合评估效能略高于系列联合，但没有差异。所以需要根据临床诊断需要选择联合诊断方法。

综 上所述，GP73+GLYPICAN-3+MIR-335联合检测对肝细胞肝癌诊断效率显著高于各单项检查，具有较高的准确率、特异性和敏感性，值得临床推广。