血清PON-1水平变化与非肌层浸润性膀胱癌患者术后疾病转归的关联性探究

韩利平，于文建，顾恺龙，李刚

（1.郑州市第九人民医院泌尿外科，河南 郑州 450052；2.郑州大学第一附属医院泌尿外科，河南 郑州 450000）

膀胱癌作为泌尿系统恶性肿瘤标准治疗方式为经尿道膀胱肿瘤切除术（TURBT），有研究指出，早期非肌层浸润性膀胱癌（NMIBC）术后5年生存率为85%～90%，但术后存在肿瘤残留率高、复发率高等特点，导致5年生存率降至60%[1,2]。故探讨NMIBC预后指标对其预后评估、制定治疗方案等具有积极作用。既往研究证实，DNA氧化损伤能够增加恶性肿瘤发生风险[3]。对氧磷酶-1（PON-1）作为机体内源性自由基清除剂对体内DNA氧化损伤具有保护作用，已被证实与颈动脉粥样硬化、冠心病等疾病发展及预后有关，但PON-1水平在NMIBC疾病进展及预后中研究较少[4,5]。鉴于此，本研究将探讨PON-1水平变化与NMIBC患者术后疾病转归的关联性，以为临床治疗、评估NMIBC患者提供新思路。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院(2012年5月～2015年4月)接收的108例NMIBC患者作为研究组，另选同期健康体检者87例作为对照组。对照组男49例，女38例，年龄38～79岁，平均（58.79±8.11）岁；体质量47～82kg，平均（65.19±5.03）kg。研究组男61例，女47例，年龄37～78岁，平均（59.16±7.98）岁；体质量48～81kg，平均（64.51±5.26）kg。两组基线资料（性别、年龄、体质量）均衡可比（P＞0.05）。

1.2 选取标准⑴纳入标准：研究组行TURBT治疗；研究组病理检查确诊为NMIBC；知情本研究并签署同意书。⑵排除标准：转移性膀胱癌；对本研究药物过敏者；血液、免疫系统疾病；术前曾接受膀胱灌注抗癌治疗；中途退出治疗者；化放疗史；合并严重感染；合并其他恶性肿瘤。

1.3 方法

1.3.1 收集资料 详细收集患者入院后一般临床资料，包括性别、体质量、年龄、肥胖、吸烟史、分化程度等。

1.3.2 制备血清标本 入组所有对象均于清晨抽取空腹肘正中静脉血5ml,以转速3000～3500r/min、半径8cm对血液标本进行离心10min。抽取上清液，于-80℃环境下保存待测，以备检测PON-1水平。

1.3.3 测定PON-1水平 采用日本日立7060全自动生化分析仪，以分光光度法进行PON-1活力测定，对硝基苯酚（美国Sigma公司）做作为底物，设定反应条件为37℃，波长为405nm，测定对硝基苯酚在350～500s内产生速度。反应体系：1：50稀释血清的对硝基苯酚产物，反应混合物含有Trishydrochloride10 mmo/L（pH8.0）、氯化钙2 mmol/L、paraoxon1.5 mmol/L、氯化钠1 mmol/L。对硝基苯酚摩尔吸光系数为18.05×103，PON-1水平单位采用U/L表示。

1.3.4 治疗方法TURBT术后均实施膀胱灌注化疗：50mg表柔比星，1次/周，进行初次灌注时需在术后24h内完成，持续治疗8周；后调整用药时间为1次/月，持续治疗10个月，随访5年。

1.3.5 预后评估 建立欧洲癌症研究与治疗组织（EORTC）风险预测系统，对每位研究对象进行评分、分级，其中复发预测最大值为17分，进展预测最大值为23分。肿瘤复发预测分为＜5分、5～9分、10～17分；肿瘤进展预测分为＜7分、7～13分、14～23分。

1.4 观察指标 ⑴比较两组PON-1水平。⑵比较不同EORTC进展预测评分的PON-1水平、中位生存时间。⑶比较不同EORTC复发预测评分的PON-1水平、中位无复发生存时间。⑷PON-1水平与生存时间的关联性分析。⑸疾病转归Logistic多因素回归分析。

1.5 统计学分析 采用SPSS22.0对数据进行分析，计量资料以()表示，t检验，多组间比较行单因素方差分析，多重比较采用LSD-t检验，组间比较采用Log-rank检验，采用Pearson法进行相关性分析，采用Logistic进行多因素回归分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组PON-1水平 研究组PON-1水平(120.79±26.48)U/L显著低于对照组(245.97±38.74)U/L，差异有统计学意义（t=26.721，P＜0.001）。

2.2 不同EORTC进展预测评分的PON-1水平、中位生存时间比较 随着EORTC进展预测评分升高，PON-1水平及中位生存时间呈降低趋势（P＜0.05），见表1。

表1 不同EORTC进展预测评分的PON-1水平、中位生存时间比较()

表1 不同EORTC进展预测评分的PON-1水平、中位生存时间比较()

分值EORTC进展评分＜7分EORTC进展评分7～13分EORTC进展评分14～23分F/Log-rank P例数 PON-1（U/L）33 51 24 148.97±30.48 114.69±26.79 98.71±22.17 27.118＜0.001中位生存时间（个月）50.5[41,60]45.0[32,58]41.0[28,54]5.897 0.009

2.3 不同EORTC复发预测评分的PON-1水平、中位无复发生存时间比较 随着EORTC复发预测评分升高，PON-1水平及中位无复发生存时间呈降低趋势（P＜0.05），见表2。

表2 不同EORTC复发预测评分的PON-1水平、中位无复发生存时间比较()

表2 不同EORTC复发预测评分的PON-1水平、中位无复发生存时间比较()

分值例数PON-1（U/L）EORTC复发评分＜5分EORTC复发评分5～9分EORTC复发评分10～17分F/Log-rank P 22 60 26 153.97±31.77 117.41±26.97 90.99±20.70 33.277＜0.001中位无复发生存时间（个月）48.0[38,58]44.0[32,56]38.0[25,51]4.159 0.042

2.4 PON-1水平与生存时间的关联性分析 经Pearson分析可知，PON-1水平与中位生存时间、中位无复发生存时间存在明显正相关关系（P＜0.05）。见表3。

表3 PON-1水平与生存时间的关联性分析

2.5 疾病转归Logistic多因素回归分析 年龄≥60岁、肥胖、存在吸烟史、分化程度高为NMIBC患者术后疾病转归危险因素（P＜0.05），见表4。

表4 疾病转归Logistic多因素回归分析

3 讨论

膀胱癌在我国恶性肿瘤发病率中居第9位，且初诊时75%为NMIBC[6,7]。据报道，NMIBC中约10%～15%最终可进展成浸润性肿瘤，或出现远处转移[8]。NMIBC预后不确定性为临床治疗造成极大难度，泌尿科亟需探讨可评估患者疾病转归的指标用以辅助临床制定个体化治疗方案。

既往研究表明，PON-1水平除在前列腺癌中表现为升高，其他各类癌症患者中其水平均显著降低[9]。本研究结果显示，研究组PON-1水平显著低于对照组（P＜0.05），提示PON-1水平在NMIBC患者中呈异常低表达状态。近年来，大量研究发现机体内脂质过氧化反应水平与恶性肿瘤发生相关，高氧化应激水平易损伤生物大分子（如DNA等），致使其功能、结构遭受破坏，已成为诱导肿瘤发生主要原因[10,11]。人类血清PON-1与高密度低脂蛋白（HDL）绑定，PON-1作为抗氧化酶，可同血液循环中HDL相结合，显著清除自由基，发挥DNA氧化损伤保护作用，有利于致癌性脂溶性自由基消除，膀胱癌患者机体抗氧化功能异常，DNA氧化应激损伤加重，自由基清除剂PON-1水平降低。

EORTC评分系统是基于欧洲7个研究中心对6个常见临床病理因素（肿瘤大小、数量、分期、病理分级、复发情况、是否存在原位癌）统计，并依照对预后影响大小赋予相应分值，用于评估术后膀胱癌1～5年复发或进展风险[12]。由本研究结果可知，随着EORTC进展预测评分升高，PON-1水平及中位生存时间呈降低趋势，随着EORTC复发预测评分升高，PON-1水平及中位无复发生存时间呈降低趋势，PON-1水平较低代表存在高水平氧化应激反应，氧化应激可通过细胞内转导通路，致使肿瘤细胞缺失正常接触性抑制，导致肿瘤细胞不断增殖，最终造成预后较差。本研究进一步对NMIBC患者PON-1水平与生存时间的关联性进行探究，经Pearson分析可知，PON-1水平与中位生存时间、中位无复发生存时间存在明显正相关关系（P＜0.05），表明PON-1水平与NMIBC患者疾病转归有关。此外，本研究经疾病转归多因素回归分析发现，年龄≥60岁、肥胖、存在吸烟史、分化程度高为NMIBC患者术后疾病转归重要影响因素，分析其原因：⑴年龄。年龄增长同时机体所产生氧自由基逐渐增多，但内源性抗氧化剂却较少生成，造成PON-1水平下降，也为老年人更易罹患肿瘤、动脉粥样硬化、高血压等疾病原因；⑵肥胖。肥胖为糖尿病、高脂血症等代谢性类疾病发生主要危险因素，肥胖患者具有高甘油三酯、高胆固醇、较低水平高密度脂蛋白，更易引起PON-1水平下降；⑶存在吸烟史。香烟中所含焦油相成分存在大量自由基,可结合DNA造成血管内皮细胞氧化损伤。⑷分化程度高。细胞癌变过程极为复杂，NMIBC分化程度越高，mRNA表达越强，对靶基因具有负性调控作用，预后较差。故临床应明确上述影响因素，为临床制定治疗方案、评估疾病预后提供参考依据。

综上所述，PON-1水平在NMIBC患者中呈异常低表达状态，PON-1水平与中位生存时间、中位无复发生存时间存在明显正相关关系，可作为疾病转归监测手段，为临床治疗提供指导依据。