总胆汁酸检测试剂盒性能验证

宫存杞

济宁市第一人民医院，山东 济宁272000

胆汁酸是胆固醇在肝脏分解代谢的产物，胆汁是由肝脏分泌到胆汁中，并随胆汁排入肠腔。胆汁酸的生产和代谢与肝脏有十分密切的关系。当肝细胞发生病变时，血清总胆汁酸升高，因而血清总胆汁酸水平是反映肝实质损害的一项重要指标［1］。总胆汁酸的准确测定对指导临床具有重要意义，本研究采用美国临床实验室标准委员会制定的相关指南，对德赛诊断系统有限公司生产的总胆汁酸测定试剂盒的精密度、正确度、线性范围、生物参考区间等进行验证。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 德赛诊断系统有限公司生产的总胆汁酸测定试剂盒，校准品（批号：00045）均为同一批次。全自动生化分析仪（罗氏8000）。样本来源：门诊患者2例及健康体检者20例。

1.2 方法

1.2.1 精密度的验证。用两个浓度的患者标本（11μmol/L、100μmol/L）进行精密度验证，具体方案依据美国临床和实验室标准委员会的EP15-A2方案［2］。

1.2.2 正确度验证。根据实验室现有条件，采用浓度为22.5μmol/L、45.0μmol/L的校准品作为样本，采用EP15-A2方案［2］，每天分别重复测试2个水平浓度标本5次，连续检测5天，分别计算每个浓度25个测量值总均值及相对偏差。判断相对偏差是否在实验室允许范围之内。

1.2.3 线性范围验证。采用EP6-A［3］文件方案进行线性范围的评价。收集两个浓度的血清标本，分别为低浓度样本（L，2μmol/L）、高浓度样本（H，182μmol/L），分别按照低浓度样本（L）、0.75L+0.25H、0.50L+0.50H、0.25L+0.75H、高浓度样本（H）配制五个不同浓度的标本，每个浓度标本检测两次，求平均值，计算预测值与测量值之间的相关系数，若相关系数≥0.95，说明预期值与测量值之间相关性极好。

1.2.4 生物参考区间的验证。随机抽取20例健康查体检本为测试对象，均为查体后排除其它常见性疾病的标本，在生化分析仪上检测总胆汁酸，验证方法参考CLSI SC28-3［4］。

1.3 统计学分析 采用Excel 2019进行统计学分析。

2 结果

2.1 精密度验证 采用EP15-A2方案，测定高低两个浓度的患者标本，共得到30个结果，分别计算批内、批间CV（100%），结果均低于厂家声明的精密度。见表1。

表1 总胆汁酸试剂批内及批间精密度结果（%）

2.2 正确度验证 采用浓度为22.5μmol/L、45μmol/L的校准品作为样本，每天测量一个批次，每个样本测量4次，共检测5天。将计算值与靶值比较，计算偏倚，结果见表2。数据显示总胆汁酸试剂的偏倚结果在实验室允许氛围内。

表2 总胆汁酸试剂正确度验证结果

2.3 线性范围验证 根据EP6-A文件进行线性回归分析，回归曲线见图1。回归系数为0.9999，符合试剂盒声明的要求范围。

图1 线性范围验证

2.4 生物参考区间验证 选择20份健康人样本进行总胆汁酸检测，结果见表3，与厂家提供的参考范围（1～10μmol/L）进行比较，仅有两人超出范围，符合临床使用要求。

表3 参考区间验证结果

3 讨论

胆汁酸是胆汁中固体物质含量最多的一种，是胆固醇代谢最终产物，是一类胆烷酸的总称。血清总胆汁酸水平反映肝实质性损伤，是肝病实验室诊断的一项重要指标。试剂的良好性能是保证检验结果准确、可靠的前提。本研究采用美国临床实验室标准委员会制定的相关指南对德赛诊断系统有限公司生产的总胆汁酸测定试剂盒的精密度、正确度、线性范围、生物参考区间等进行验证。

精密度是指在规定条件下获得的相互独立的测量结果之间的一致程度，精密度通常以不精密度来度量，如标准差和变异系数。本研究用两个浓度的患者标本进行精密度的验证，两个浓度的样本批间CV分别为1.02%、1.09%，低于厂家声明的1.75%，批间CV分别为1.20%、1.37%，低于厂家声明的1.93%。

用于线性范围验证的标本应尽可能覆盖整个线性范围，配制五个不同浓度的标本，每个标本检测两次并求平均值，对理论值和检测值进行线性回归分析，R2=0.9999大于允许的0.995，表面试剂盒的线性范围符合要求。

本研究采用20例健康者标本来验证，结果只有2例不在区间内，因此可以接受本试剂盒提供的参考区间。综上所述，总胆汁酸试剂盒性能和厂家声明的一致，检测系统具有良好的精密度、准确度、线性范围，可以用于临床分析。