细胞间黏附分子-1在三阴性乳腺癌组织中的表达及意义

刘鹏飞 湖南中医药高等专科学校附属第一医院乳腺科,湖南省株洲市 412000

三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌常见的分子分型之一，是指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)以及人表皮生长因子2(HER-2)均呈阴性表达的乳腺癌，具有恶性程度高、易复发转移及预后差等临床特点，对女性健康构成严重威胁[1]。细胞间黏附分子-1(ICAM-1)是黏附分子免疫球蛋家族的重要成员之一，介导着黏附反应过程，在促进炎症粘连、机体免疫调节及肿瘤恶化转移中有着重要作用。研究表明，ICAM-1通过结合特异性受体，能够增强炎症细胞以及肿瘤细胞等与内细胞之间的黏附，激活内皮细胞，使其更易穿透到内皮。而内皮细胞的黏附分子通过介导细胞之间或细胞与基质间的结合，形成信号转导、活化，进而参与细胞的增殖与分化、炎性反应、免疫应答及肿瘤生长、转移等多种生理病理过程[2]。目前，已有较多研究报道了ICAM-1在肝癌、肺癌、胃癌中表达[3-5]，但关于其在TNBC中报道的研究尚少。为此，本研究旨在探讨ICAM-1在TNBC中的表达，并分析其与患者临床病理特征及预后的关系，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集2017年1月—2019年12月我院TNBC手术标本60例，包括癌组织60例及癌旁组织60例。患者均首次发病，术前均未行放化疗治疗，均为女性，年龄23～81(56.12±11.65)岁；TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期29例，Ⅲ期17例，Ⅳ期5例；病理类型：浸润性导管癌36例，浸润性小叶癌6例，基底细胞癌9例，其他9例；肿块直径：≤2cm者26例，>2cm者34例。18例患者术后出现复发转移，其中局部复发4例，骨转移6例，肝转移6例，肺转移2例。所有标本固定(10%甲醛溶液)后，均行常规石蜡包埋处理，制成厚度为5μm的病理切片。

1.2 免疫组化法检测ICAM-1在TNBC中的表达 常规标本制片。取载玻片，采用防脱片剂处理后，置于58～60℃烤箱内进行烘烤，30～60min。切片脱蜡至水：二甲苯60℃环境下处理5min，共3次。予以100%酒精-95%酒精-75%酒精依次处理，各3min。采用3%H2O2，室温条件，灭活内源性酶，5～10min。采用pH值为6.0的枸橼酸盐缓冲液(0.01mol/L)进行抗原热修复处理。然后以5%BSA进行封闭，ICAM-1单抗(英国Abcam)，1∶50稀释，4℃环境下放置过夜。加入生物素化山羊抗兔IgG，37℃环境下放置20min。加入试剂SABC，37℃条件下放置20min。DAB显色处理，加蒸馏水1ml，混匀后加至切片。最后采用苏木素复染，以碱性PBS返蓝，用中性树脂进行封片。

1.3 结果判读 所有免疫组化切片均由两名高年资病理医师进行评估。参照文献中标准进行判读，根据阳性细胞比例与着色深度进行综合评分，在每个切片中随机选取5个视野，各视野分别计100个细胞，然后按细胞数≤25%、25%～50%、>50%分别计1分、2分、3分；ICAM-1蛋白属于细胞膜蛋白，着色部位为细胞膜及细胞质，按无着色、浅黄色、深黄色或棕褐色分别计0分、1分、2分。最终得分为两项评分之积，综合评分为0分或1分，判定为阴性表达，综合评分为2分、3分、4分或6分，则判定为阳性表达。

1.4 观察指标 (1)比较TNBC癌组织及癌旁组织ICAM-1表达情况；(2)比较不同临床病理特征的TNBC患者ICAM-1表达情况差异；(3)比较ICAM-1阳性表达与阴性表达TNBC患者的生存预后。

1.5 统计学方法 应用SPSS22.0软件处理数据。计数资料比较行χ2或Fisher精确概率检验；用Kaplan-Meier对TNBC患者进行生存曲线分析；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TNBC癌组织及癌旁组织ICAM-1表达情况对比 TNBC癌组织ICAM-1阳性表达率(75.00%，45/60)明显高于癌旁组织(10.00%，6/60)，差异有统计学意义(χ2=51.867，P<0.001)。

2.2 ICAM-1表达与TNBC临床病理参数的关系 ICAM-1表达与TNBC淋巴结转移(P=0.035)、组织学分级(P=0.002)、TNM分期(P=0.030)显著相关，而与年龄(P=1.000)、肿瘤直径(P=0.764)、病理类型(P=0.397)、脉管癌栓(P=1.000)等无关。见表1。

表1 ICAM-1表达与TNBC临床病理参数的关系[n(%)]

2.3 ICAM-1表达与TNBC患者生存预后的关系 Kaplan-Meier生存曲线分析显示，ICAM-1阳性表达者生存期明显低于ICAM-1阴性表达者(χ2=5.745，P=0.015)。见图1。

3 讨论

TNBC是一种特殊类型的乳腺癌，易复发且转移早。由于该类型乳腺癌的ER、PR、HER-2均呈阴性表达，内分泌治疗与靶向治疗均难以发挥效果，而临床又缺乏规范的化疗方案，使得其被视为较顽固的肿瘤，故寻找其治疗靶点成为一大难题。

图1 ICAM-1阳性表达与阴性表达的TNBC患者生存曲线

ICAM-1是黏附分子免疫球蛋家族的重要成员之一，在促进炎症粘连、机体免疫调节及肿瘤恶化转移中有着重要作用。其通过结合特异性受体，能够增强炎症细胞以及肿瘤细胞等与内细胞之间的黏附，激活内皮细胞，使其更易穿透到内皮。而内皮细胞的黏附分子通过介导细胞之间或细胞与基质间的结合，形成信号转导、活化，进而参与细胞的增殖与分化、炎性反应、免疫应答及肿瘤生长繁殖、转移等多种生理病理过程[6]。ICAM-1在正常组织中表达水平较低，但在肺、肾、胃组织中有着较高表达。新近研究发现，ICAM-1在多种前列腺癌[7]、卵巢癌[8]等多种恶性肿瘤组织中呈高表达，与恶性肿瘤具有相关性。Hayes等[9]学者对300例正常组织、癌组织进行了免疫组化研究，发现ICAM-1表达与恶性肿瘤相关，在肿瘤转移中发挥着重要作用。已有较多研究报道了ICAM-1与肺癌[10]、肝癌[11]等临床病理参数的关系。但关于ICAM-1与乳腺癌尤其是TNBC关系的报道尚少。因此，本研究采用免疫组化法对TNBC癌组织与癌旁组织的ICAM-1表达情况进行检测，结果显示，ICAM-1在癌组织中的表达明显高于癌旁组织，且与淋巴结转移、组织学分级、TNM分期相关，提示ICAM-1或许可作为反映TNBC恶性程度的指标。此外，本研究还显示，ICAM-1阳性表达者生存期明显低于ICAM-1阴性表达者，提示ICAM-1表达与TNBC患者预后相关，ICAM-1阳性表达者预后较差。

综上所述，ICAM-1与TNBC的侵袭、转移相关，可作为判断肿瘤恶性程度的指标，其高表达可提示预后不良。ICAM-1有望成为治疗TNBC的潜在靶点。