2018年湖南省规模猪场伪狂犬病血清学调查

王昌建，方 铃,2，林 源,2，唐小明，王卫国，鲁杏华，彭 志，李海珍，贺银辉，何世成，刘道新*

(1.湖南省动物疫病预防控制中心，湖南长沙 410014；2.湖南农业大学动物医学院，湖南长沙 410128；3.湖南天心种业有限公司，湖南长沙 410000)

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Seudorabies virus,PRV)引起的一种危害较大的病毒性疾病，临床上以发热、奇痒和脑脊髓炎为主要特征[1]。新生仔猪感染该病毒会导致高死亡率和神经系统疾病，成年猪感染后易发生呼吸系统疾病，怀孕母猪感染后易发生生殖系统疾病，导致繁殖障碍，从而造成巨大的经济损失[2-3]。伪狂犬病呈全球分布，欧美地区的部分发达国家(美国、荷兰等)已经彻底净化了该病[4]。该病在我国仍广泛存在，并被列为二类动物疫病。20世纪50年代，我国首次暴发该病，使用了PRV基因缺失疫苗后，该病得到了有效地控制[5]。然而，2011年底，我国许多地区免疫猪场又开始暴发此病[6]。对流行毒株进行分离鉴定，发现它与传统毒株相比，发生了突变，形成了独特的分子结构，其致病性和抗原特性也发生了相应的变化，从而导致传统疫苗株的保护力下降[7]。为了解湖南地区的猪伪狂犬病免疫情况及野毒感染状况，本研究采集了湖南省14个市州的4 288份血清，对PRV gE和 PRV gB抗体进行检测与分析，以期为该病的防控与净化提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血清样品 2018年采自湖南省14个市州208个规模猪场的4 288份猪血清样品，其中157个PR免疫猪场，共2 858份免疫血清；未免疫场51个，共1 430份未免疫血清。根据随机采样原则，每个猪场采集血清样品20～30份，无菌采集血液样本2 mL～3 mL，静置2 h～4 h，3 000 r/min 离心3 min，取上清液至无菌离心管中，置-20℃保存备用。

1.1.2 试剂 PRV gB抗体检测ELISA试剂盒和PRV gpI(gE)抗体检测ELISA试剂盒，美国IDEXX公司产品。

1.1.3 主要仪器 各种量程移液器，德国Eppendorf公司产品；微量震荡仪(SK96-3型)，江苏新康医疗器械有限公司产品；恒温箱(SPM-250型)，宁波江南有限公司产品；多功能台式离心机(5804R型)，德国Eppendorf公司产品。

1.2 方法

采用IDEXX公司生产的PRV gB抗体检测ELISA试剂盒和PRV gpI(gE)抗体检测ELISA试剂盒，按说明书进行检测。本研究检测的血清样品来自免疫了PRV gE基因缺失疫苗的猪场，如果PRV gE抗体检测结果呈阳性，则判定为野毒感染。对猪场结果进行判定和统计时，如果有一个样品呈阳性，则判定该猪场为野毒感染阳性场。

2 结果

2.1 2018年全省规模猪场PRV抗体检测结果

2018年度，共检测来自湖南省14个市州208个规模猪场血清样品4 288份。经PRV gE抗体检测，阳性场有81个，场阳性率为38.9%，阳性血清样品有901份，阳性率为21.0%；对其中免疫了PRV疫苗的157个猪场，2 858份血清样品进行PRV gB抗体检测，阳性场有143个，场阳性率为91.1%，阳性血清样品有2 233份，阳性率为78.1%(表1)。

表1 2018年全省规模猪场PRV抗体检测结果

2.2 不同地区规模猪场PRV gE抗体检测结果

对不同地区规模猪场PRV gE抗体检测结果进行统计，结果显示，14个市州PRV野毒感染率不尽相同，其中湘潭地区的场阳性率和个体阳性率均为最高，分别为70.0%和51.2%；邵阳地区场阳性率和个体阳性率均较低，分别为13.3%和3.3%；湘西州和张家界虽然场阳性率和个体阳性率均为0，但由于样品采集原因，并不能确定这两个地区没有PRV野毒感染情况(表2)。

表2 不同地区规模猪场PRV gE抗体检测结果

2.3 不同季节规模猪场PRV gE抗体检测结果

季节划分：春季(3月～5月)，夏季(6月～8月)，秋季(9月～11月)，冬季(12月～2月)。

对不同季节规模猪场的PRV gE抗体检测结果进行统计，结果显示，夏季PRV gE抗体阳性率最高(25.1%)，冬季PRV gE抗体阳性率最低，(13.2%)，春季和秋季PRV gE抗体阳性率分别为19.2%和24.1%(表3)。

表3 不同季节规模猪场PRV gE抗体检测结果

2.4 不同养殖规模猪场PRV gE抗体检测结果

对不同养殖规模猪场的PRV gE抗体检测结果进行统计，结果显示，存栏量大于1 000头的大型规模猪场PRV gE抗体阳性率最高(22.9%)，200头～1000头的中型规模猪场PRV gE抗体阳性率最低(13.0%)，存栏量小于200头的小型规模猪场PRV gE抗体阳性率为19.8%(表4)。

表4 不同养殖规模猪场PRV gE抗体检测结果

2.5 不同年龄阶段规模猪场PRV gE抗体检测结果

对不同年龄阶段规模猪场的PRV gE抗体检测结果进行统计，结果显示：种母猪PRV gE抗体阳性率高于其他年龄阶段的猪群，为36.2%，种公猪PRV gE抗体阳性率最低，为13.1%(表5)。

表5 不同年龄阶段规模猪场PRV gE抗体检测结果

3 讨论

预防和控制猪伪狂犬病最有效的手段之一是接种疫苗。目前，我国多使用PRV gE基因缺失疫苗来防控猪伪狂犬病，因此血清样品中检测出gE抗体即可确诊为野毒感染[8]。通过定期监测PRV gE抗体情况，淘汰阳性猪，可逐渐净化该病。同时，通过定期监测PRV gB抗体情况，可及时了解猪群的免疫情况，使疫苗发挥最大的保护作用。本研究结果显示，2018年湖南省PRV gB抗体场阳性率和个体阳性率分别为91.1%和78.1%，均高于群体免疫合格水平(70%)。PRV gE抗体场阳性率和个体阳性率分别为38.9%和21.0%，这说明虽然湖南省规模猪场免疫情况基本合格，但是野毒感染情况依旧广泛存在。根据年份统计[9-10]，2013年-2015年湖南省PRV gE抗体阳性率分别为：45.5%、21.71%、25.17%，总体呈下降趋势，野毒感染情况有所好转，说明湖南地区规模猪场猪伪狂犬病进化工作取得了一定成效。

按照不同地区对检测结果进行统计，全省14个市州的野毒感染情况有所不同，其中PRV野毒感染率最高的地区为湘潭，场阳性率和个体阳性率分别为70.0%和51.2%。结合采样信息，发现该地区存栏量大于1 000头的规模猪场较多，养殖密度大，现该地区存栏量大于1 000头的规模猪场较多，养殖密度大。同时该地区猪只调运较频繁，PRV可能通过车辆运输和人员进出而大范围传播，导致该地区PRV野毒感染率升高。当然，也有该地区猪场对猪伪狂犬病免疫程序混乱，导致疫苗免疫失败的原因[11]。张家界和湘西州两个地区的场阳性率和个体阳性率都为0，地区养殖密度小，能采集的样品数量少，所以不能完全排除这两个地区PRV野毒感染情况。

按照不同养殖规模对检测结果进行统计，存栏量大于1 000头的规模猪场野毒感染率最高(22.9%)，500头～1 000头的规模猪场野毒感染率最低，为13.0%。结果显示，中型养殖规模更有利于PRV地防控，这与王昌建[9]等报道中型养殖规模猪场野毒感染率最低相一致。

按照不同季节对检测结果进行统计，夏季和秋季PRV野毒感染率较高，为25.1%和24.1%，冬季PRV野毒感染率最低，为13.2%。结果显示一年四季都有PRV野毒感染情况。

按照不同年龄阶段对检测结果进行统计，种母猪PRV gE抗体阳性率最高，为36.2%，可能是因为种母猪的饲养周期较长，被PRV感染的风险比其他猪群高，也可能是人工授精时，被带PRV的公猪精液所感染。其次是哺乳仔猪，为31.5%，这可能是因为母源抗体的存在[12]。种公猪PRV gE抗体阳性率最低，为13.1%，结果说明种猪场存在PRV野毒感染，可能是通过引种传播[13]。

综上所述，湖南省免疫的规模猪场PRV gB抗体合格率达过了群体免疫合格水平，但PRV野毒感染情况普遍存在。因此，应加强猪场饲养管理、生物安全管理和疫苗免疫接种，提高猪群免疫力，并定期开展血清学调查，淘汰感染猪，从而净化该病。