尾叶香茶菜挥发油化学成分分析及抗炎能力研究

黄 婷，李春艳，肖海雯,李晓敏

(1.安康学院 化学化工学院，陕西 安康 725000；2. 安康学院 陕西省富硒食品质量监督检验中心，陕西 安康 725000；3.沈阳兴齐眼药股份有限公司，辽宁 沈阳 110000)

尾叶香茶菜Isodon excia (Maxin.)Hara是生长在我国吉林、甘肃、山西等省的一种多年生草本植物[1, 2]。其全草入药，具有清热解毒，健胃，活血的功效[3]。挥发油是存在于植物中的可随水蒸蒸汽蒸馏出来的油状液体，不同植物的挥发油组成成分不同，生物活性也不相同[4, 5]。尾叶香茶菜叶、花和果实尤其是尾叶香茶菜的叶的水煎提取液具有很好的抗炎、镇痛、抑菌等作用[6～8]。近年来，随着对尾叶香茶菜的药理作用及化学成分研究的不断深 入，其在临床的应用愈来愈广泛[9～11]。笔者研究以尾叶香茶菜为原料，通过水蒸气蒸馏法(SD法)提取挥发油，并进一步研究其化学成分，并研究了其抗炎作用，希望有助于未来尾叶香茶菜药用价值的研究利用。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

实验所用尾叶香茶菜采自吉林省长白山。生理盐水购于石家庄四药有限公司；冰醋 酸、二甲苯、乙醚、无水硫酸钠购于国药集团化学试剂有限公司；氢化可的松购于上海上药信谊药厂有限公司。

昆明小白鼠，4周龄，体质量18～22 g ，购于泰邦生物制品有限公司。

1.2 仪器与设备

美国热电公司生产的Trace. GC. Ultra/Polaris. Q型气相色谱/质谱联用仪(GC-MS)，NIST02版质谱数据库，美国安捷伦公司生产的Xcalibur质谱工作站。

1.3 实验方法

1.3.1 挥发油的提取 实验时，通过水蒸气蒸馏法进行提取操作，获取挥发油[12]，再取适量的尾叶香茶菜，取其地上部分，去根，再阴干，再将其粉碎，烘干2 h，过0.85 mm筛。称取1 kg，浸泡一段时间，60℃加热1 h，静置过夜，蒸馏6 h。将几次馏分充分合并，再取适量乙醚，对其进行萃取，再将获取的乙醚萃取液合并，通过无水Na2SO4进行干燥，大约24 h，再进行过滤，将其置于常压环境中，经过蒸馏、乙醚回收等操作后，会得到淡黄色溶液，发出较为特殊的气味，这就是挥发油，按照公式1，可以获取得油率[13]。

得油 率/%=(挥 发 油 质 量/原 材 料 质 量) ×100%

(1)

实验考察了尾叶香茶菜的得油率与加热时间、加热温度以及蒸馏时间之间的联系，再针对这三个因素采取L9(33)正交实验。

1.3.2 挥发油GC-MS分析 获取挥发油后，笔者研究通过GC-MS将其中的化合物分离鉴定出来，实验要求见表1。

表1 GC-MS 操作条件

质谱实验要求：标准EI源；温度设置方面，离子源应为200 ℃，接口应为260 ℃，进样量设置为1.0 μL，分流比设置为30∶1，扫描范围设置为35～600 aum；电子倍增电压设置为 1.28 千伏。

通过 Xcalibur质谱工作站，GC-MS对实验的样品进行研究，以NIST02版的质谱数据库图库对获取的质谱图做比对鉴定，并大量参考这方面的文献，以最终获取尾叶香茶菜这一原料所提取的挥发油的实际化学成分。

1.3.3 抗炎实验 通过小鼠耳廓肿胀法[14]，首先，选取80只雄性小鼠，将其随机分为8组，每组10只， 各设置为阳性对照组、空白组、给药组，将适量二甲苯涂抹在小鼠右耳上，小鼠左耳不采取任何操作，时长30 min，再通过脱颈的方法将小鼠处死，再分别将小鼠的两耳取下来，在相同的部位通过8 mm打孔器获取小鼠的圆耳片，将其置于电子天平上，获得精确的重量，肿胀度即两个耳片的重量的差额，按照公式(2)可得到抑制率[13]。

抑制率=

(2)

2 结果与讨论

2.1 水蒸气蒸馏法提取尾叶香茶菜挥发油

以尾叶香茶菜为原料，通过水蒸气蒸馏法提取其中的挥发油，接下来，对加热时间、蒸馏时间和加热温度采取 L9(33)正交实验，极差分析结果见表 2。

表2 水蒸气蒸馏法正交试验设计与结果

可以看出 RA>RC> RB ，极差越大对尾叶香茶菜挥发油得油率的影响越大，因此各因素对得油率的影响次序是： A(加热温度)>C(蒸馏时间)>B(加热时间)，表 2 为方差分析，其中显示，得油率的高低与蒸馏时间以及加热温度之间存在密切关系。以尾叶香茶菜为原料，通过水蒸气蒸馏法对挥发油进行提取的工艺中，A2B2C3效果最好。也就是在 60℃条件下，加热 1 h，再蒸馏 6 h。在此实验条件下平行实验 5 次， 得 油率为(0.267±0.85)%(P<0.05)。

2.2 尾叶香茶菜挥发油中的化学成分及相对含量

对获取的尾叶香茶菜挥发油，通过 GC-MS 展开研究，首先，对此实验样品进行检测，共得到 70 个峰，再大量查阅有关文献、比对谱图库[15]，一共鉴别出 35 种化合物，其成分约为总峰面积的 52.77%。图1为 GC-MS 研究得到的组分的总离子流程图，表 3 中列出了采用峰面积归一化法计算出每种化合物的构成比例。这 35 种化合物中，小部分是芳香族以及脂肪酸化合物，基本全是含氧类衍生物。其中，含量最大的是 4-异丙基安息香酸甲酯，约为 6.77%；第二位是 2,10-二甲基-9-十一醇，约为 5.49%；第三位是正十六碳酸，约为 4.90%；第三位是对烯丙基茴香醚，约为4.35%。部分文献指出[16]，以尾叶香茶菜的茎叶部分为原料所得到的挥发油中，大多数为直链烷烃化合物，含量最大的是亚油酸以及亚麻酸，但笔者实验中鉴定的这两种成分的含量极低，仅有0.63%和0.33%，说明生长环境和部位不同，所含挥发油的化学成分不同。

图1 GC-MS测得挥发油总离子

2.3 抗炎实验

采用食用大豆油作为空白实验，以氢化可的松作阳性对照， 给药4种剂量。经过与空白组、 氢化可的松组对比分析， 挥发油的抑制作用见表4。结果显示， 针对小鼠耳朵涂抹二甲苯导致的肿胀，挥发油剂量为0.030 mL·kg-1时，抑制率是34.88%，剂量为0.070 mL·kg-1时，抑制率是42.29%，挥发油为这两种剂量时的抑制效果较好。

表3 尾叶香茶菜挥发油化学成分分析结果

表4 尾叶香茶菜挥发油对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响( n=7, P<0.05)

3 结论

采用水蒸气蒸馏法提取尾叶香茶菜挥发油，设备简单、操作方便、成本低廉和不污染环境， 提取工艺为加热温度60℃1 h，蒸馏6 h，得油率0.267%。 针对得到的挥发油，通过气相色谱-质谱联用检测仪做成分鉴别，共得到35种化合物, 在实验的色谱总馏出峰中，这35种化合物的峰面积约为52.77%。采用二甲苯致小鼠耳肿胀法对挥发油抗炎作用进行研究， 针对小鼠耳朵涂抹二甲苯导致的肿胀，挥发油给药组剂量为0.030 mL·kg-1时，抑制率是34.88%，剂量为0.070 mL·kg-1时，抑制率分别为42.29%，挥发油为这两种剂量时，抑制效果最好。