急性胰腺炎患者血清miR-148a-3p和miR-551b-3p的表达水平及其临床价值

许海梅 李永超 刘海珊 廖雪霞 张裕照

海南儋州市人民医院消化内科， 儋州 571179

AP是常见的消化系统疾病，轻症患者病情较轻，可自愈，而重症AP(SAP)病情进展迅速、并发症多、预后较差，给临床治疗造成了极大的困难。因此，如何对SAP进行早期诊治和预后判断是当前研究的热点问题。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一种由21～25个核苷酸组成的非编码RNA分子，通过转录后水平调控基因表达，参与AP的发病过程[1]。研究表明，miR-148a-3p及miR-551b-3p在AP时异常表达，其与AP患者的发病及病情严重程度密切相关，是AP预后监测、靶向治疗的潜在生物学标志物[2-3]。本研究通过检测AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p的表达水平，分析其判断SAP患者预后的价值，以期为SAP的早期救治提供指导。

资料与方法

一、一般资料

选取2017年1月至2020年9月间儋州市人民医院收治的152例AP患者，其中男性95例，女性57例，年龄27～68(50±11)岁。根据病情严重程度分为MAP组(70例)、MSAP组(40例) 和SAP组(42例)。另根据42例SAP患者的预后情况，分为生存组(25例)和死亡组(17例)。纳入标准：(1)符合中国急性胰腺炎诊治指南(2014)AP诊断及分级标准[4]；(2)发病入院时间<72 h。排除标准：(1)合并严重心、肝、肾、呼吸系统疾病及恶性肿瘤者；(2)已接受外院治疗后转诊来院者。另选取同期50例体检健康者作为对照组，其中男性34例，女性16例，年龄30～65(51±10)岁。本研究通过医院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

二、血清 miR-148a-3p及miR-551b-5p表达检测

所有AP患者于发病当天(对照组于体检时)采集空腹静脉血5 ml，置于无抗凝剂的离心管中，离心分离血清，采用ABI 7500型荧光定量PCR仪进行实时荧光定量PCR。miR-148a-3p正向引物序列为5′-AGATCGCATCATCGATAGAC-3′，反向引物序列为5′-GATAGCCTGTACGTGCAGCT-3′；miR-551b-5p正向引物序列为5′-GACTAGCTGCAGCGTAGTAG-3′，反向引物序列为5′-ACTTCAGATGCATGCACATG-3′；内参照U6正向引物序列为5′-CTGAGTCACTAGCTAGA-3′，反向引物序列为5′-ACTGTGCAGCGTAGCAT-3′。PCR反应条件：95℃预变性10 min、95℃变性15 s、60℃复性60 s，45个循环。通过仪器自带软件获取Ct值，采用2-△△Ct公式计算miR-148a-3p及miR-551b-5p的相对表达量，每个样品设3个复管，取均值。

三、统计学处理

结 果

一、各组一般资料比较

各组性别、年龄及体重指数比较，差异无统计学意义，具有可比性(表1)。

表1 3组急性胰腺炎患者与健康对照者一般临床资料比较

二、AP组和对照组miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平比较

AP组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平分别为3.18±1.27及1.94±0.85，明显高于对照组的0.96±0.28及0.51±0.12，差异均有统计学意义(t值分别为16.412、13.115，P值均<0.001)。

三、病情严重程度不同的AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平比较

SAP组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平分别为4.36±1.70及2.80±1.04，均明显高于MSAP组的2.84±1.10及1.68±0.53和MAP组的2.50±0.92及1.42±0.45，差异均有统计学意义(F值分别为12.850、11.273，P值均<0.001)；而MSAP组与MAP组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平的差异无统计学意义。

四、SAP死亡组和生存组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平比较

SAP死亡组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平分别为5.30±1.95及3.62±1.37，均明显高于生存组的3.47±1.40及2.08±0.91，差异均有统计学意义(t值分别为14.820、13.624，P值均<0.001)。

五、血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平判断SAP患者预后的价值

miR-148a-3p及miR-551b-5p判断SAP患者预后的最佳截断值分别为4.15、2.70，二者联合判断SAP患者预后的AUC值明显高于miR-148a-3p、miR-551b-5p单项指标(P值均<0.001)，其灵敏度为98.3%，特异度为84.6%(图1、表2)。

图1 血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平判断重症急性胰腺炎患者预后的ROC曲线

六、 SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平的相关性

Pearson相关分析显示，SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平呈正相关(r=0.835，P<0.001，图2)。

讨 论

miRNA是一类短序、内源启动的小分子RNA，具有组织特异性、性质稳定和易于获取等特点，为其成为新的生物标志物提供了较好的前景[5-6]。miRNA参与细胞生长、促血管生成、诱导细胞分化和调节免疫，可能在AP的发病过程和预后判断中发挥了关键作用[7-8]。有研究指出，miR-148a-3p及miR-551b-5p参与介导炎症反应相关的基因调节过程，在胰腺组织异常表达，且参与胰腺炎的发生发展，具有成为SAP诊断及预后判断的生物学标志物及治疗靶点的潜能[9-10]。

表2 血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平判断重症急性胰腺炎患者预后的价值

图2 重症急性胰腺炎患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平的相关性

本研究显示，与对照组比较，miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平在AP组中明显升高，提示其在AP发病中发挥了一定作用。与MSAP组和MAP组比较，miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平在SAP组中明显升高，且miR-148a-3p及miR-551b-5p在死亡组的表达明显高于生存组，说明高表达的miR-148a-3p及miR-551b-5p可能促进AP的病情进展，导致预后较差。这主要是miR-148a-3p及miR-551b-5p参与调节炎症细胞因子，两者的高表达促使各种因子及炎症递质释放，造成全身炎症反应综合征，导致循环、呼吸或肾功能衰竭，进而造成SAP患者死亡。有研究认为，SAP患者miRNA表达水平明显高于MAP和MSAP患者，miRNA对判断AP的病情进展具有较好的帮助[11]。Zhang等[12]和Kus′nierz-Cabala等[13]研究发现，与对照组比较，miR-551b-5p在MSAP和SAP患者中的表达明显升高，其可能通过调节炎症反应来参与SAP的发生，有望作为SAP病情判断的一个可靠指标。另有研究表明，miR-148a-3p在AP中高表达，参与了AP发病过程，在AP诊断和预后判断中具有较大的帮助[14]。本研究结果显示miR-148a-3p及miR-551b-5p对SAP患者预后判断均具有一定的价值，两项联合判断的灵敏度更高，说明miR-148a-3p及miR-551b-5p可作为判断患者SAP预后的良好指标，两项联合的效能更好。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突