食管癌组织中lnc RNA DNAJC3-AS1的表达及其与临床病理特征的相关性研究

梁晓虎，雷尚昆，郭俊霞(1.宝鸡市人民医院 a.胸外肿瘤外科；b.胸外科，陕西宝鸡 71000；.宝鸡市中心医院全科医学科，陕西宝鸡 71008）

食管癌(esophageal cancer,EC)是消化道常见的恶性肿瘤[1-3]，预后较差[4-6]，严重危害人类健康。我国是EC的高发国家，也是世界上EC 新发病例最多的国家[7-8]。近年来研究表明，长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)的表达异常与多种疾病有关，尤其在肿瘤中扮演重要角色。因此，确定肿瘤相关的lncRNA 并且深度解析其生物学功能对阐明肿瘤的发生、发展至关重要。lnc RNADNAJC3-AS1位于染色体13q32.1，含有2个外显子，已有报道指出lnc RNADNAJC3-AS1 与骨肉瘤[9]和乳腺癌[10]密切相关。关于lnc RNADNAJC3-AS1 与EC的关联研究鲜有报道，本研究拟分析EC组织中lnc RNA DNAJC3-AS1的表达及其与临床病理特征的相关性，旨在为EC的临床诊疗提供合理参考。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2017年6月～2019年5月宝鸡市中心医院全科医学科收集的246例EC患者的肿瘤组织及相应的癌旁正常组织(距离原发灶＞5cm)为研究对象，取材后用液氮保存并标记。患者均为食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)，手术前未行免疫治疗、放化疗等抗肿瘤治疗。其中，男性180例，女性66例；年龄33～75岁，平均年龄54.9±13.1岁。本研究经由我院伦理委员会批准，患者自愿参加且均签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂 逆转录试剂盒(日本TAKARA公司)，ABI7500 PCR 仪(美国ABI)，Sybr Green荧光染料(日本TAKARA 公司)。

1.3 方法 从液氮中取适量EC组织标本，充分研磨后，用Trizol 法抽提总RNA，逆转录试剂盒将RNA 逆转录为相应的cDNA，用pfimer 5 软件设计引物，引物设计如下：正向引物5’-TTGCTCT AAGGCAGGTAGGTAA-3’；反向引物：5’-GGG TCTTCCACAATCGCTCT-3’。与Sybr Green 荧光染料配置，使用PCR 仪进行实验，qPCR Mix选用ABI 公司配套的Master Mix，反应体系根据其说明书配置。结果采用2-ΔΔCt法进行分析，使用GAPDH 作为内参。当lnc RNA DNAJC3-AS1在肿瘤组织中的相对表达量高于相应的癌旁正常组织则为高表达，反之为低表达。

1.4 统计学分析 采用SPSS 19.0 统计学软件进行数据分析，计数资料以n(%)表示，采用χ2检验，计量资料采用t检验，以均数±标准差（±s）表示。采用K-M 法绘制EC患者生存曲线，用log-rank检验lnc RNA DNAJC3-AS1表达水平与患者总体生存率(overall survival，OS)的关系。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 lnc RNA DNAJC3-AS1 在EC肿瘤组织及相应癌旁正常组织中的相对表达量 见图1。lnc RNA DNAJC3-AS1 在EC肿瘤组织中的相对表达量高于相应癌旁正常组织(0.008 9±0.020 3 vs 0.004 9±0.010 4，P=0.000 8)。

图1 lnc RNA DNAJC3-AS1 在EC肿瘤组织及相应癌旁正常组织中的相对表达量

2.2 lnc RNA DNAJC3-AS1表达水平与EC患者临床特征间的关系 见表1。依据2.1的结果，根据lnc RNA DNAJC3-AS1表达水平的不同将患者分为高表达组和低表达组，每组各123例。lnc RNA DNAJC3-AS1表达水平与EC患者饮酒史(χ2=25.07，P<0.001)、家族肿瘤史χ2=4.73，P=0.047)、BMI指数(χ2=16.94，P<0.001)、临床分期(χ2=33.39，P<0.001)、是否原位癌(χ2=11.97，P=0.001)、是否淋巴结转移(χ2=19.01，P<0.001)、是否远端转移(χ2=16.65，P<0.001) 和肿瘤类型(χ2=9.17，P=0.010)显著相关。

2.3 lnc RNA DNAJC3-AS1表达水平与EC患者总体生存率的关系 见图2。使用Kaplan-Meier法进行生存分析结果显示，lnc RNA DNAJC3-AS1 低表达组患者的中位生存时间为34.0个月，高表达组患者的中位生存时间为17.0个月。lnc RNA DNAJC3-AS1 高表达组患者的OS 低于lnc RNA DNAJC3-AS1 低表达组(χ2=20.93，P<0.001)。

图2 lnc RNA DNAJC3-AS1表达水平与EC患者OS的关系

表1 不同临床特征研究对象lnc RNA DNAJC3-AS1表达水平差异性分析[n=123，n (%)]

3 讨论

食管是癌症的常见发病部位，EC是全球排名第6位的癌症死因。EC 预后较差，对人类健康危害严重。近年来研究指出lncRNAs 在EC的发生、发展中扮演重要角色[11-12]，lnc RNA DNAJC3-AS1位于染色体13q32.1，含有2个外显子，其与DNAJC3是同源靶基因。有报道指出，在骨肉瘤组织中高表达并与骨肉瘤的分化程度、临床进展密切相关，其能提高骨肉瘤体内外的细胞增殖、迁移和侵袭能力，并降低对顺铂的药物敏感性。另外lnc RNA DNAJC3-AS1 在乳腺癌中高表达且其高表达能缩短乳腺癌患者生存期。目前，关于lnc RNADNAJC3-AS1 与EC的关联研究鲜有报道。

本研究结果显示，lnc RNA DNAJC3-AS1 在EC肿瘤组织中高表达，并且高表达lnc RNA DNAJC3-AS1 患者的OS 较低，这就说明了lnc RNA DNAJC3-AS1是EC的潜在生物标志物，其表达水平的升高会对EC患者的OS 带来消极影响。分析lnc RNA DNAJC3-AS1表达水平与EC患者临床病理特征间的关系，结果表明lnc RNA DNAJC3-AS1表达水平与患者饮酒史、家族肿瘤史、BMI指数、临床分期、T，N，M 等相关。

EC的组织学类型分为ESCC 和EAC，本研究纳入的对象均是ESCC患者，并未涉及EAC患者，因此关于lnc RNA DNAJC3-AS1 与EAC的关联仍未阐明，值得深入探究和分析。