子宫内膜癌组织中血管紧张素（1-7）及线粒体组装受体水平表达与临床病理特征的相关性

陈丽华,朱婕曼,刘玉凤,刘 浩,马春星,张 凡,刘云春(河北北方学院附属第一医院.妇产科；.病理科，河北张家口075061)

绝经后女性是子宫内膜癌的高发群体，患者多并发高血压、糖尿病等基础疾病，且部分患者因早期无症状而未能及时治疗干预，给患者治疗带来困难，成为短期预后不良的诱因。糖链抗原125（cancer antigen 125，CA125）、糖类抗原199(carbohydrate antigen199，CA199)等肿瘤标记物在子宫内膜癌早期诊断与预后判断中的价值已被临床多次报道，但CA125，CA199 亦可在子宫内膜异位症、盆腔炎症及卵巢癌等患者中出现异常表达，这使其判断患者短期预后的特异性价值有所局限。血管紧张素（1-7）[angiotensin-（1-7），Ang-（1-7）]与受体阻断药（Ang Ⅱ）均属肾素-血管紧张素系统具有多功能的活性肽，有研究表明，肾素-血管紧张素系统（renin‐angiotensinsystem，RAS）是一种调节系统，能调节水钠平衡、体液平衡等，在调节体内平衡和正常生理功能中起着重要作用[1-2]。其不仅存在于循环系统中，还存在于心、肾、脑、子宫等许多其他器官中[3]。本研究旨在探讨Ang-（1-7）及其MasR 受体在子宫内膜癌临床治疗及患者预后等方面的价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取我院2017年4月～2019年4月手术切除的78例子宫内膜癌组织，经病理确诊均为子宫内膜癌。患者年龄35～73岁，平均年龄52.73±19.45岁，体重指数20.25±2.36kg/m2，其中绝经有57例，未绝经有33例，40例并发高血压，27例并发糖尿病，23例并发子宫肌瘤，并收集同时期32例子宫内膜不典型增生患者子宫内膜组织及16例正常子宫内膜组织作为对照，所有患者术前均未进行化疗。本研究获得我院伦理委员会批准。纳入标准：①患者均签署知情同意书；②患者均在宫腔镜下穿刺活检后证实为子宫内膜癌。排除标准：①严重肝肾疾病者；②自身免疫系统缺陷者；③并发有其他原发性恶性肿瘤者。见表1。

表1 各组研究对象一般资料比较（±s）

表1 各组研究对象一般资料比较（±s）

类 别 子宫内膜癌组(n=78) 子宫不典型增生组(n=32) 正常子宫组织组(n=16) F/Z P年龄(岁) 52.73±19.45 51.61±19.32 49.27±18.69 75.142 0.946体重指数（kg/m2） 20.25±2.36 20.31±3.21 20.24±1.96 24.213 0.266宫腔深度(mm) 7.25±2.47 7.02±2.65 7.13±2.52 35.123 0.735孕次 2 2 2-0.526 0.615

1.2 仪器与试剂 采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测，试剂盒购自美国Adlitteram Diagnostic Laboratories 公司，酶标仪为澳大利亚anthos 2010型，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 方法 ELISA检测Ang-（1-7）,将新鲜冷冻子宫内膜组织在预冷氯化钠注射液中多次洗涤，称取0.2g，然后依次加入氯化钠注射液和甲基磺酰氟（Phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF）。组织净重（G）∶0.9g/L 氯化钠注射液（M1）∶PMSF（BT1）=1∶10∶100。超声匀浆至透明无颗粒状。在4℃下于1 2000g 离心5 min，取上清液。Wstern blot检测MasR 受体的蛋白表达,将子宫内膜组织超声匀浆成透明无颗粒状，离心后取上清液。将30g总蛋白加入15g/L的SDS 聚丙烯酰胺凝胶混合电泳，在PVDF 膜上印迹，用5g/L 脱脂牛奶密封1h，抗MasR 一级抗体（1∶1 000）4℃孵育过夜。TBST 膜清洗3次，每次10 min，然后与辣根过氧化物酶标记的次级抗体在室温下孵育1h。用TBST冲洗薄膜3次，然后显影。使用QuantityOne 软件进行灰度分析。

1.4 统计学分析 统计分析使用SPSS 18.0 统计软件进行数据分析，子宫内膜组织及子宫内膜癌组织中Ang-(1-7)和MasR表达水平差异采用单因素方差分析（F检验）,计量资料采用均数±标准差(±s)表示，阳性率采用百分比表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组患者Ang-（1-7），MasR阳性率比较 子宫内膜癌组、不典型增生组与正常子宫组织组Ang-（1-7）阳性率分别为56（71.79%），12（37.50%），2（12.50%）；阴性率为22（28.20%），20（62.50%），14（87.50%），差异有统计学意义（χ2=11.506，P=0.000）。MasR阳性率分别为51（65.38%），11（34.38%），1（6.25%）；阴性率为27（34.62%），21（65.62%），15（93.75%），差异有统计学意义（χ2=8.619，P=0.002）。

2.2 三组患者Ang-（1-7），MasR组织内表达结果 见表2。与不典型增生组织和正常组织相比，子宫内膜癌组Ang-（1-7）和MasR表达显著增高（P<0.05）。

表2 三组Ang-（1-7），MasR组织内表达结果（±s）

表2 三组Ang-（1-7），MasR组织内表达结果（±s）

项 目 子宫内膜癌组（n=78） 不典型增生组（n=32） 正常子宫组织组（n=32） F p Ang-（1-7）（μg/L） 1.35±0.23 0.78±0.15 0.45±0.08 45.323 <0.05 MasR（μg/L） 2.43±0.83 0.87±0.56 0.78±0.23 76.238 <0.05

2.3 Ang-（1-7），MasR的表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系 见表3。Ang-（1-7），MasR表达在不同TNM 病理分期、不同分化程度及有无转移子宫内膜癌患者中差异均有统计学意义（均P<0.05）。

表3 Ang-（1-7），MasR的表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系

3 讨论

绝经后女性是子宫内膜癌的高发群体，患者多并发高血压、糖尿病等基础疾病，且部分患者因早期无症状而未能及时治疗干预，成为短期预后不良的诱因[4-5]。因而，对患者预后影响因素进行研究可为临床治疗提供参考。CA125，CA199 等肿瘤标记物在子宫内膜癌早期诊断与预后判断中的价值已被临床多次报道，但CA125，CA199 亦可在子宫内膜异位症、盆腔炎症及卵巢癌等患者中出现异常表达，这使其判断患者短期预后的特异性价值有所局限[6-8]。

Ang-（1-7）与Ang Ⅱ均属肾素-血管紧张素系统具有多功能的活性肽，侯智为等[9]动物实验证实Ang Ⅱ可促进血管内皮生长因子表达而加快子宫内膜癌肿瘤血管生长，还有基础研究显示Ang Ⅱ可通过调节转化生长因子β 和c-myc 基因参与肿瘤增殖[10]。而Ang-(1-7)是Ang Ⅱ拮抗因子，Ang-(1-7)可能通过抑制Ang Ⅱ达到抑制肿瘤增殖的作用。另外，Ang-(1-7)可抑制子宫内膜上皮细胞分化，诱导异常增生的肿瘤细胞凋亡，其作用具有剂量依赖性[11]。MasR 对Ang-(1-7)可发挥传递效应，并可调节Ang Ⅱ表达，达到调控子宫内膜组织生长作用[12]。因而，MasR 在子宫内膜癌组织中表达与Ang-(1-7)一致，本研究发现子宫内膜癌组Ang-（1-7）及MasR阳性率均高于子宫内膜不典型增生组和正常子宫组织组，说明子宫内膜组织Ang-（1-7）及MasR阳性率高表达可能提示患者预后不良。

我们还发现，MasR表达上调，VEGF和MVD也上调。VEGF是一种功能强、特异性高的可溶性血管生成启动因子，与肿瘤生长、侵袭和转移具有密切的相关性[13-14]。SEKI 等[15]发现子宫内膜癌细胞可分泌VEGF，促进血管生成，淋巴管浸润区高于非淋巴管浸润区，与MVD 一起对患者生存率有显著影响。MVD 作为肿瘤血管生成定量分析的指标，能清楚地反映其浸润转移能力[16]。SALVESEN等[17]对60例子宫内膜癌患者进行了平均19年的随访调查,发现子宫内膜癌中MVD 与肿瘤分级、肌层浸润及淋巴管脉管浸润具有相关性，是子宫内膜癌的独立预后因素。本次实验表明MasR表达上调、VEGF表达上调和MVD 升高呈正相关，证明AngII 可能通过MasR 增加VEGF的分泌达到促进子宫内膜癌间质新生血管形成的作用。

综上所述，MasR 在子宫内膜癌中表达上调与病理分期、分化程度及有无转移等因素具有密切的相关性，且MasR，VEGF水平表达上调和MVD水平升高呈正相关，提示MasR 可能参与了子宫内膜癌的发生发展，而MasR表达的上调促进了子宫内膜癌细胞的生长和血管生成，可能成为判断子宫内膜癌预后的一个指标。而Ang-(1-7)可能通过抑制Ang Ⅱ达到抑制肿瘤增殖作用，Ang-(1-7)还可抑制子宫内膜上皮细胞分化，诱导异常增生的肿瘤细胞死亡，且MasR 对Ang-(1-7)可发挥传递效应，并可调节Ang Ⅱ表达，达到调控子宫内膜组织生长作用。因此，Ang-（1-7）和MasR的表达与子宫内膜癌患者的预后密切相关，为临床诊断及治疗提供了新的治疗靶向，值得临床进一步推广应用。