趋化因子CXC配体13、双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1b蛋白阳性表达与宫颈癌患者相关病理学参数的关联性探究

胡 淇

湖南省宁乡市人民医院病理科 410600

宫颈癌属女性生殖系统常见恶性肿瘤，侵袭性较强，易发生远处转移，早期诊断及治疗对患者预后改善具有重要意义。病理学研究表明，宫颈癌均由人乳头状瘤病毒(HPV)感染引起，但仅少数HPV最终可发展至宫颈癌，提示致癌还需其他因子共同参与，探寻宫颈癌发生发展相关生物学标志物仍是目前临床研究的重点课题[1]。趋化因子CXC配体13(CXCL13)与胃癌、结、直肠癌等多种恶性肿瘤的发生发展有关，具有调节肿瘤细胞浸润、促血管生成等作用[2]。双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶1b(Dyrk1b)在肺癌、卵巢癌、胰腺癌等多种恶性肿瘤组织中均呈高表达状态，在细胞周期及细胞凋亡过程中均发挥重要作用[3]。为探究上述两种生物学标志物与宫颈癌发生及发展的关系，本文将我院63例宫颈癌患者作为观察对象，分析CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达与相关病理学参数关联性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月—2020年3月我院宫颈癌患者63例，其中年龄38～67岁，平均年龄(49.63±5.81)岁。均行宫颈癌根治术治疗，术中取患者癌组织及癌旁正常宫颈组织标本(距癌变病灶边缘1.5～2.0cm，术后经组织病理学检查确认未发生癌变)。

1.2 纳入及排除标准 (1)纳入标准：均经术后组织病理学检查确诊为宫颈癌；术前无放疗、化疗、免疫、内分泌相关治疗史；均知情本研究并签署同意书。(2)排除标准：合并其他恶性肿瘤；妊娠、哺乳期女性；所取组织标本无法正常行免疫组化检查。

1.3 方法

1.3.1 组织标本CXCL13、Dyrk1b蛋白表达检测：将手术切除的组织标本采用10%甲醇固定48h，石蜡包埋，以4μm厚度连续切片，经烤片、室温脱蜡、水化后，采用柠檬酸盐液实施热抗原修复，时间为2min，后采用PBS液反复冲洗3次，每次时间为5min，再于室温下采用3%过氧化氢水浴10min，再以PBS液反复冲洗3次，每次时间为5min，加入50μl非免疫山羊血清(上海哈灵生物科技有限公司)封闭抗原，于37℃温度下孵育15min后，去除山羊血清，加入鼠抗人CXCL13单克隆抗体(上海酶研生物科技有限公司，1∶50)及兔抗人Dyrk1b(武汉博士德生物工程有限公司，1∶100)单克隆抗体，室温下孵育1h，以PBS液冲洗，室温下水浴15min后，DAB显色，显色时间为4～5min，冲洗后采用苏木精复染细胞核，梯度乙醇脱水，中性树胶封片固定。

1.3.2 阳性表达判定标准：每张切片于高倍镜下取5个视野，均实施染色程度评分及阳性细胞(细胞核或细胞质中出现淡黄色、棕黄色或棕褐色的细胞)百分比评分，两项评分相加≥4分即为蛋白阳性表达。(1)染色程度评分：无染色记0分，淡黄色(轻度染色)记1分，棕黄色(中度染色)记2分，棕褐色(重度染色)记3分。(2)阳性细胞百分比评分：≤5%记0分，>5%～25%记1分，>25%～75%记2分，>75%为记3分。

1.4 观察指标 (1)癌组织、癌旁正常宫颈组织中CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达率。(2)不同病理学参数(病灶直径、肿瘤类型、分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润深度)癌组织CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达情况。(3)CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达与相关病理学参数关联性。

1.5 统计学方法 通过SPSS22.0软件进行数据处理，计数资料以[n(%)]表示，行χ2检验，采用Spearman分析法进行相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织标本CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达率 癌组织CXCL13蛋白阳性表达率为65.08%(41/63)，Dyrk1b蛋白阳性表达率为80.95%(51/63)，均高于癌旁正常宫颈组织的0.00%(0/63)、14.29%(9/63)(χ21=60.777，P1<0.001；χ22=56.127，P2<0.001)。

2.2 不同病理学参数癌组织CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达情况 不同病灶直径、分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润深度癌组织CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达均有明显差异(P<0.05)，不同肿瘤类型癌组织CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 不同病理学参数癌组织CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达情况[n(%)]

2.3 关联性分析 经Spearman分析得知，CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达与病灶直径、FIGO分期、淋巴结转移、肌层浸润深度呈正相关，与分化程度呈负相关(P<0.05)，见表2。

表2 关联性分析

3 讨论

既往临床研究表明，趋化因子、信号传导因子、转录因子等共同参与恶性肿瘤发生发展及浸润转移，探寻宫颈癌发生发展相关因子对病情进展评估及预测预后均有重要意义[4]。

CXCL13属趋化因子家族细胞因子，又称B细胞趋化因子，具有调控炎症细胞浸润、抑制肿瘤细胞凋亡、促进血管新生及肿瘤细胞转移等作用，是诱发恶性肿瘤发生发展的重要因子[5]。相关研究指出，CX CL13抑制剂可有效作用于CXCR5/ERK信号通路，进而缩小肿瘤体积，由此分析CX CL13可通过活化相关信号通路促进肿瘤组织生长[6]。本研究结果显示，CXCL13在宫颈癌组织中呈高表达状态，且其阳性表达与肿瘤直径、FIGO分期、肿瘤分化程度等多种病理学参数均呈明显相关性，由此可见CXCL13在宫颈癌恶性进展中具有重要调控作用，可能与其促新生血管生成、促肿瘤细胞增殖活化的作用相关。

Dyrk1b蛋白属丝氨酸/苏氨酸激酶，在正常组织中一般不表达，但在多种恶性肿瘤中均呈过度表达[7]。相关临床研究表明，Dyrk1b抑制剂可有效抑制宫颈癌细胞增殖及侵袭，具有诱导癌细胞凋亡作用，且敲除Dyrk1b基因后，癌细胞增殖分化相关蛋白的结构及化学性质可发生改变，因此认为，Dyrk1b蛋白可调控癌细胞增殖分化相关蛋白表达，进而促进癌细胞增殖与分化[8]。本文结果中，宫颈癌组织Dyrk1b蛋白阳性表达率明显高于癌旁正常组织，且其阳性表达可随肿瘤增长、淋巴结转移、浸润深度增加而升高，说明Dyrk1b蛋白可参与宫颈癌的发生及发展，可能与其促癌细胞增殖、稳定蛋白结构等作用相关。

综上可知，与癌旁正常组织比较，宫颈癌组织中CXCL13、Dyrk1b蛋白阳性表达率较高，且其阳性表达与相关病理学参数呈明显相关性，均是宫颈癌恶性进展中的重要因子。