黄连上清丸的显微鉴别

占丽琴，彭玲娜，马杰，罗艳，丁野，孙辉

湖南省药品检验检测研究院，湖南 长沙 410001

黄连上清丸由黄连、栀子（姜制）、连翘、炒蔓荆子、防风、荆芥穗、白芷、黄芩、菊花、薄荷、酒大黄、黄柏（酒炒）、桔梗、川芎、石膏、旋覆花、甘草共十七味药材组成，具清风散热、泻火止痛的功能，主要用于风热上攻、肺胃热盛所致的头晕目眩、暴发火眼等收载于《中国药典》2020 年版一部［1］。现标准中均无显微鉴别项目，而本品剂型中浓缩丸为其中九味处方药材生粉投料，水丸、水蜜丸、大蜜丸均为全处方生粉投料。本研究对黄连上清丸进行显微鉴别，为其质量控制提供依据。

1 材料

Leica DM2500 显微镜，水合氯醛试液为本实验现配，对照药材黄连（批号121752-201801）、栀子（批号120986-201610）、连翘（批号120908-201817）、防风（批号120908-201817）、荆芥穗（批号121424-201505）、白芷（批号120945-201510）、黄芩（批号120955-201810）、菊花（批号121384-201805）、薄荷（批号120916-201812）、大黄（批号120984-201202）、黄柏（批号121510-201807）、桔梗（批号121028-202113）、川芎（批号120918-201813）、旋覆花（批号121125-201904）、甘草（批号120904-202021）共15 味，均购自中国食品药品检定研究院，试剂均为分析纯。黄连上清丸来自3个生产企业，共10 个批号，详细信息见表1。

表1 黄连上清丸样品信息

2 方法与结果

2.1 显微鉴别粉末特征提取

通过文献查询［2-5］，及实验观察，筛选出黄连上清丸中有专属性的粉末特征，见表2。

表2 黄连上清丸专属性粉末特征

2.2 显微鉴别

根据黄连上清丸的处方及制法，选择合适的方法处理样品：（1）蜜丸，取样品适量，切开，用水脱蜜后，取沉淀物适量制片，观察。（2）水丸、浓缩丸，取样品适量，研细，取粉末制片，观察。粉末特征如下［1］。（1）晶纤维，成束，鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶（黄柏）。淡黄色或近无色，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶（甘草）。（2）草酸钙簇晶，草酸钙簇晶直径20～160 μm，有的至190 μm（酒大黄）。（3）石细胞，鲜黄色呈分枝状，壁厚，层纹明显；有的呈大型纤维状，长达900 μm（黄柏）。石细胞类圆形、类方形或长方形，壁较厚或深厚（黄芩）。鲜黄色，单个散在或数个成群。呈类圆形、类方形或不规则形，边缘大多不平整或有凹凸，壁厚，有的层纹明显，纹孔小，孔沟细（黄连）。（4）种皮石细胞，黄色或淡棕色，长多角形、长方形或形状不规则，壁厚，纹孔甚大，胞腔棕黄色（栀子）。（5）冠毛，多列性非腺毛，边缘细胞稍向外突出（旋覆花）。（6）韧皮纤维，单个散在或数个成束，梭形，壁厚，孔沟细（黄芩）。鲜黄色，多成束，较粗短，呈纺锤形或长梭形，壁厚，纹孔较稀，孔沟较粗（黄连）。（7）晶体，半透明，断面具绢丝样光泽（石膏）。（8）花粉粒，类球形，直径32～37 μm，表面有断刺，具3 孔沟（菊花、旋覆花）。（9）非腺毛，1～8 细胞，弯曲，壁厚，具壁疣突（炒蔓荆子、荆芥穗、薄荷、旋覆花）。（10）木纤维，成束，较细长，壁稍厚，木化纹孔稀疏（黄连、黄芩）。（11）淀粉粒，单粒圆球形、多角形、椭圆形或盔帽形，直径3～25 μm（白芷、黄芩、黄连、酒大黄、川芎）；复粒由2～7 分粒组成（黄芩、酒大黄、川芎、）；复粒由2～12 分粒组成（白芷）。

取10 批次黄连上清丸分别制片10 片（5 片水制片，5 片水合氯醛制片），观察粉末特征，统计并计算每个显微特征出现的平均次数，平均次数≥10 为易见、5 ≤平均次数＜10 为常见、1 ≤平均次数＜5 为可见［6］。结果石膏晶体、大黄的草酸钙簇晶平均次数都＞10 次/片，为易见；白芷的淀粉粒、黄连的韧皮纤维、黄芩的韧皮纤维、黄柏的晶纤维、黄柏石细胞、甘草的晶纤维平均次数都＞5 次/片，为常见；黄连的石细胞、栀子的种皮石细胞、旋覆花的冠毛平均次数都＞1 次/片，为可见。

2.3 显微鉴别标准

通过实验观察得到黄连上清丸粉末特征，与对照药材粉末特征进行比对，结合实验中检出粉末特征的难易程度，选择特征唯一、检出率较高的粉末特征，作为黄连上清丸的显微鉴别依据。结合文献调研［7-8］，拟定显微鉴别标准如下：（大蜜丸、水蜜丸、水丸）纤维束鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞壁木化增厚；石细胞鲜黄色，呈分枝状，壁厚，层纹明显，有的呈大型纤维状，长达900 μm（黄柏）。纤维束淡黄色或近无色，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维（甘草）。草酸钙簇晶大，直径60～140 μm（酒大黄）。韧皮纤维鲜黄色，多成束，呈纺锤形或长梭形，壁厚，纹孔较稀，孔沟较粗（黄连）。种皮石细胞黄色或淡棕色，长多角形、长方形或形状不规则，壁厚，纹孔甚大，胞腔棕黄色［栀子（姜制）］。冠毛为多列性非腺毛，边缘细胞稍向外突出（旋覆花）。韧皮纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细（黄芩）。晶体半透明，断面具绢丝样光泽（石膏）。淀粉粒复粒由2～12 分粒组成（白芷）。粉末特征见图1。

图1 黄连上清丸粉末特征图

黄连上清丸（浓缩丸）工艺中菊花、蔓荆子、黄芩、甘草均煎煮后浸膏入药，故不考虑黄芩、甘草的粉末特征作为显微鉴别依据。

2.4 样品筛查

按照拟定的显微鉴别标准共筛查67 批次黄连上清丸，样品均来自国家抽检项目，覆盖32 个生产企业，结果在不同的生产企业样品中均可见标准中的粉末显微特征，说明样品质量在显微鉴别结果上无明显差异。

3 讨论

3.1 黄连上清丸粉末特征的筛选

黄连上清丸（大蜜丸、水蜜丸、水丸）工艺中黄连生粉入药，黄连药典来源有味连、雅连、云连三种，其中味连、雅连含有石细胞，云连不含石细胞，故最后黄连的石细胞特征不作为显微鉴别依据。粉末特征非腺毛、淀粉粒单粒、花粉粒、木纤维，均存在药材间的干扰，不宜列入质量标准。

3.2 小结

本研究中黄连上清丸共十七味处方，其中大蜜丸、水蜜丸、水丸标准确定九味药材的专属性粉末显微特征，浓缩丸确定七味药材的专属性粉末显微特征。

为进一步控制本品的质量，本课题正在同步进行其他理化鉴别及含量测定研究，完善质量标准，为黄连上清丸质量控制提供依据。