液相串联质谱法测定婴幼儿护肤品中28 种抗组胺药物

虞雪军，杨婷婷，吴珍，占翌领，易路遥

江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029

化妆品中基质复杂、辅料较多，又与人体皮肤直接接触，常引起皮肤疾病，皮肤过敏是其中极常见的一种。为避免皮肤过敏反应的发生，不法厂商可能会添加一些抗过敏药物。抗组胺类药物是皮肤科常用的抗过敏药，应用于湿疹、药疹、接触性皮炎及皮肤瘙痒症等发痒性皮肤病［1］。长期使用含有抗组胺药物的化妆品会导致药物依赖性皮炎，停用后，过敏症状就会加重，造成毛细血管扩张、萎缩，出现皮肤变薄、色素沉着、皮炎等症状。同时，还可能引起人体内激素水平变化，造成内分泌混乱，引起内分泌疾病［2-4］。

目前，化妆品中抗组胺类物质常用的分析测定方法主要有高效液相色谱法（HPLC）［5］、高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS）［6］、高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）［7］、超高液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）［8-9］。《化妆品安全技术规范》（2015 年版）“2.18 地氯雷他定等15 种组分”［10］和《化妆品中多西拉敏等9 种抗过敏药物的测定液相色谱-串联质谱法》（GB/T32986-2016）两个检验方法总共可测定20 种抗组胺药物，文献报道中最多同时测定21 种抗组胺物质。据统计2010 年至2020 年期间全国1 429 个不合格项目中，检出46 批次含有抗组胺药物样品，占比为3.22%，抗组胺药物主要为非法添加，已检测到添加成分有氯苯那敏、苯海拉明、赛庚啶等［11］。而随着科学技术的发展，抗组胺药物不断在更新，因此有必要增加筛选组分，扩大筛查范围，完善检验方法。

本研究在整合现有检验标准的基础上，结合国家标准、进出口行业标准、已有研究基础，增加抗组胺药物种类，形成一套涵盖28 种抗组胺成分的LC-MS/MS 方法。该方法简单快捷易操作，可行性强，为后期开展相关的风险物质监测提供科学的依据，为全面监管积累更多的科学数据及技术支撑方法，以期能更好地保障化妆品使用安全。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Xevo 7Q-S 液相串联质谱仪、VORTEX WX 涡旋混合器、ST16R 离心机（美国ThermoFisher）、超声波清洗器、XS205DU 电子天平、ML204 电子天平。

28 种抗过敏标准品马来酸氯苯那敏、阿司咪唑、地氯雷他定、盐酸曲吡那敏、盐酸羟嗪、奋乃静、盐酸氟奋乃静、盐酸氯丙嗪、氯雷他定、特非那定、盐酸赛庚啶、琥珀酸多西拉敏、盐酸美沙吡林、盐酸赛克利嗪、马来酸溴苯那敏、盐酸二苯拉林、盐酸氯苯沙明、盐酸苯海拉明、盐酸去氯羟嗪、非索非那定、盐酸异丙嗪、依巴斯汀、左卡巴斯汀盐酸盐、盐酸西替利嗪、阿伐斯汀、富马酸依美斯汀、盐酸氮斯汀、咪唑斯汀，纯度均大于98%。甲醇为色谱纯；甲酸铵为色谱纯；水为二次蒸馏水。68 批次婴幼儿护肤类化妆品均来自流通环节。

1.2 标准溶液配制

取28 种标准品约10 mg，精密称定，分别置于50 mL 容量瓶中，用甲醇溶解稀释后，定容至刻度，摇匀作为单标储备液；吸取单标储备液适量，用甲醇稀释成浓度为100 ng/mL 混合标准储备溶液。用甲醇配制成浓度为1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 和15.0 ng/mL 的系列混合标准曲线溶液，于4 ℃条件下储存备用。

1.3 样品前处理

称取0.20 g 样品于50 mL 具塞比色管中，加入甲醇40 mL，涡旋振荡30 s，使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取20 min，用甲醇定容至50 mL，摇匀，以10 000 r/min 离心5 min。取上清液经0.22 μm 滤膜过滤，进行LC-MS/MS 分析。

1.4 仪器条件

1.4.1 液相色谱条件 色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；柱温：30 ℃；流速：0.15 mL/min；进样量：2 μL；流动相：A（甲醇），B（20.0 mmol/L 甲酸铵溶液）；梯度洗脱程序：0～1.0 min，55% B；1.0～4.0 min，55% B～20% B；4.0～7.0 min，20% B；7.0～7.1 min，20% B～55% B；7.1～11.0 min，55% B。

1.4.2 质谱条件 离子源：ESI 源；扫描方式：正离子模式扫描；扫描范围：100～1 000 m/z；离子源温度：450 ℃；喷雾电压：3 000 V；干燥气流速：800 L/h；锥孔电压：30 V；锥孔气流速：150 L/h；碰撞气流速：0.15 mL/min；质谱采集参数见表1。

表1 28种抗过敏药物的质谱条件

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

参照《化妆品安全技术规范》（2015 年版）“2.18 地氯雷他定等15 种组分”和《化妆品中多西拉敏等9 种抗过敏药物的测定 液相色谱-串联质谱法》（GB/T32986-2016），对比0、5、10、20 mmol/L 甲酸铵溶液，确定流动相为甲醇和20.0 mmol/L 甲酸铵溶液，28 种组分有较好的峰形及响应。为提高分析效率，选用ACQUITY UPLC BEH C18 柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）填料粒度较小的色谱柱，在被测物有较好的分离效果的前提下，控制方法分析时间为11 min，缩短检测时间。

2.2 特异性

照上述方法测定阴性样品溶液、混合标准溶液和加标样品溶液（10 μg/L），记录总离子流图，见图1。

图1 阴性样品溶液（A）、混合标准溶液（B）和混合加标溶液（C）的总离子流图

阴性样品溶液的图谱中基本无杂峰，表明该方法的干扰较少，混合标准溶液和加标样品溶液的图谱基本一致，特异性较好；28 种目标化合物色谱分离较好，峰形尖锐对称，11 min 内全部出峰，满足试验分析要求。

2.3 标准曲线和检出限

取“1.2”项下系列混合标准曲线溶液，分别以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制28 种组分标准溶液工作曲线，计算回归方程和相关系数。结果表明，线性范围为1～15 μg/L 时，各目标化合物均有良好的线性关系，相关系数（r）为0.994 3～ 0.999 6。在基质空白样品中添加标准溶液，分别以目标化合物的3 倍信噪比确定方法检出限，28 种组分检出限结果为15～54 μg/kg，以目标化合物的10倍信噪比确定方法定量限，28 种组分定量限结果为60～180 μg/kg。

表2 28种组分标准曲线、检出限和定量限

2.4 方法的回收率和精密度

以水剂、乳剂、霜剂阴性样品做回收率试验，分别添加3 个不同浓度水平（分别为250、500 和1 250 μg/kg），设置6 份平行。照上述试验方法进行样品处理，上机，记录结果，得到3 种基质的回收率。3 种基质结果显示，28 种组分平均回收率在75.2%～125.3%，相对标准偏差在1.0%～10.0%。方法准确度及精密度良好，能满足痕量测定的要求。

2.5 稳定性试验

以水剂、乳剂、霜剂阴性样品，分别添加3 个不同浓度水平（分别为250、500 和1 250 μg/kg），于0、2、4、8、12、24 h 分别进样测定，记录各组分测定值，计算各组分3 个添加水平的相对标准偏差。结果显示28 种抗组胺类药物测定值的相对标准偏差均小于8%，表明方法稳定性良好。

2.6 样品测定

采用本方法测定了68 批次流通环节婴幼儿护肤类化妆品，均未检出28 种抗组胶药物，仍需持续扩充抗组胺类药物的筛查成分及测定样品的数量。

3 讨论

由于婴幼儿皮肤比较娇嫩，抗摩擦力和抗病力差，易受刺激；皮肤角层较薄，防止有害物质入侵的能力弱［12］；婴幼儿碱性皮肤更容易受到细菌感染，加之皮肤结构不完整，角质层和皮脂膜发育不成熟，对接触到皮肤外来物质吸收较快，抵抗能力较差，很容易引起皮肤过敏反应，不法商家可能针对上述原因，非法添加抗组胺类物质。因此有必要对婴幼儿护肤品中非法添加抗组胺药物进行风险评估。

本研究采用直接提取法，快速、简单、可靠，经过方法学验证，线性关系、回收率、精密度及重复性均良好，目标物干扰少，适用于婴幼儿护肤品中28 种抗组胺类药物的快速检测分析。