七清败毒散的药效学试验

王 飞,王 军，侯会霞，王雅倩，边小利，王虹雅，陈胡羚，李引乾*

(1.西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌 712100；2.府谷县动物疫病预防控制中心，陕西府谷 719400；3.陕西省汉中市动物疾病预防控制中心，陕西汉中 723000；4.陕西省府谷县麻镇畜牧兽医工作站，陕西府谷 719400)

细菌性疾病的治疗多采用抗菌药和解热药，尤其是抗菌药，然而抗菌药的使用不当常常会导致细菌耐药性的产生，在长期的使用中，不但会降低疗效，影响动物自身免疫系统和身体健康，此外还可引起食品动物药物残留等问题[1-3]。不安全的动物性食品对人类健康会造成严重威胁，引起各种疾病，因此需要寻求更为科学、安全、绿色、高效的动物疫病防治手段。中药源于天然物，用其治疗细菌性疾病不会产生耐药性，亦无药物残留，对于动物疾病的防治具有极大优势[4]。中药的使用常常在不破坏动物组织器官的情况下，改善动物机体的内部生理环境，有利于提高动物的自身免疫力和健康水平，合理使用本身就具备预防许多疫病的功效。同时中药作为治疗药使用，也可以降低成本，疗效温和，更加贴近动物福利法。七清败毒散由生石膏、金银花、鱼腥、板蓝根、忍冬和贯众等中药组成，具有清热解毒，清温凉血，败毒燥湿等功效。为了评价七清败毒散的药效学，研究了七清败毒散的解热作用、抗炎作用和体外抑菌，对其药效学进行研究，旨在为临床应用提供参考和理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品与试剂 七清败毒散(1 000 g/袋)，内蒙古润龙生物科技有限公司产品，批号：20180602；二甲苯，广东省化学试剂工程技术研究工发有限公司产品，批号：20180831；巴米尔阿司匹林泡腾片，阿斯利康制药有限公司产品，批号：H32026200；牛肉膏，北京奥博兴生物技术有限责任公司产品，批号：20180502；蛋白胨，北京奥博兴生物技术有限责任公司产品，批号20170902；琼脂，珠海迪尔生物工程有限公司产品，批号：2018第1400037；扶正解毒散，南京楠枫动物药业有限公司产品，批号：20171201；胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司产品，批号：180817。

1.1.2 主要仪器 BS-210S型电子分析天平，德国赛多利斯(Sartorius)股份公司产品；真空烘箱、离心机，上海手术器械厂产品；QL-901型漩涡振荡器，其林贝尔仪器制造公司产品；RE 52-98旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂产品；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司产品；KQ5200超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司产品；超净工作台、立式压力蒸汽灭菌器，上海博迅实业有限公司产品。

1.1.3 实验动物 昆明小鼠，体重18 g～22 g，购自西安交通大学实验动物中心；家兔，体重2.0 kg～2.5 kg，西北农林科技大学科技大学实验动物中心提供。所有实验动物试验前均观察7 d，临床检查健康者即用于试验。

1.1.4 受试菌株 大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌，由本实验室分离并保存。

1.2 方法

1.2.1 解热作用 试验开始前，测量4次体温，间隔1 h 1次，并挑选4次测量体温均保持为38.0 ℃～39.6 ℃范围内的家兔，且满足4次测量中最高体温和最低体温之差小于0.4 ℃，供试验用。采用蛋白胨发热模型法观察七清败毒散的解热作用，通过李宗铎等[5]的研究方法观察体温变化。

将注射蛋白胨生理盐水溶液1 h 后，其体温上升超过0.5 ℃的家兔随机分成5组，每组6只。5组分别为试验组A1、试验组A2、试验组A3、阳性对照组B、阴性对照组C。使用兔灌胃导管给兔灌服，A1组灌服剂量8 g/kg的七清败毒散水煎液(2 g生药/mL)，A2组灌服剂量4 g/kg的七清败毒散水煎液(1 g生药/mL)，A3组灌服剂量2 g/kg的七清败毒散水煎液(0.5 g生药/mL)，B组以剂量为100 mg/kg的阿司匹林(浓度为25 mg/mL)作阳性对照[6]，C组以生理盐水作为空白对照。给药后5 h内每个1 h测量1次体温，共5次。再对各测定点体温变化Δ℃作方差分析[7]。

1.2.2 抗炎作用 将昆明小鼠，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。分别以60、30、15 g/kg七清败毒散水煎液及200 mg/kg的阿司匹林水溶液、30 mL/kg的生理盐水浓度给药[8]。采用岳兴如等[9]的方法，观察对二甲苯致小鼠耳廓炎症水肿的抑制作用。

1.2.3 体外抑菌作用

1.2.3.1 牛肉膏汤液体培养基的制备 制备pH为7.2～7.6的牛肉膏汤液体培养基[10]。

1.2.3.2 药液的制备 将8只试管编号后高压灭菌处理，在超净工作台中，每管加入2 mL无菌生理盐水，1号管加入2 mL七清败毒散水煎液(2 g生药/mL)，并混匀；吸取1号管中的2 mL溶液加入2号管，并混匀；再次吸取2号管中的2 mL溶液加入3号管。逐次加入至7号管，吸取7号管中的2 mL溶液，并弃去，8号管保持不变，为对照组。按此法，1号至7号试管，药液稀释倍数为21、22、23、24、25、26、27。1号管至7号管浓度依次为1、0.50、0.25、0.125、0.063、0.032、0.016 g/mL[11]。

1.2.3.3 菌株的接种与培养 采用李蔼文等[12]的抑菌试验方法，分组接种大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌，观察不同浓度试管，使细菌不生长的最低药物浓度即为药物对该菌株的最小抑菌浓度(MIC)。

2 结果

2.1 解热作用观察

七清败毒散对蛋白胨所致家兔发热的影响结果见表1和图1。

表1 七清败毒散对家兔的解热效果

图1 七清败毒散对致热家兔体温的影响

由表1和图1可知，阿司匹林作为阳性对照组能显著对抗蛋白胨的升温作用，与生理盐水组比较，差异极显著(P<0.01)。七清败毒散各试验组也可明显抑制蛋白胨的升温作用，与生理盐水组比较，2 g/kg剂量组差异显著(P<0.05)、其余两组差异极显著(P<0.01)；与阿司匹林组比较，各剂量组均无显著差异(P>0.05)；2 g/kg剂量组与4 g/kg剂量组差异显著(P<0.05)，2 g/kg剂量组与8 g/kg剂量组差异极显著(P<0.01)，但是4 g/kg剂量组与8 g/kg剂量组无显著差异(P>0.05)。以上结果表明七清败毒散具有明显的解热作用，且呈一定的剂量关系。

2.2 抗炎作用观察

七清败毒散的抗炎作用结果见表2。

表2 七清败毒散对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响

由表2可以看出，七清败毒散和阿司匹林对二甲苯所致小鼠耳肿胀均有显著的抑制作用。阿司匹林作为阳性对照组，与生理盐水组比较，对抗二甲苯引起的小鼠耳肿胀具有极显著(P<0.01)的抑制作用；七清败毒散各试验组也可明显抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀，与生理盐水组比较，低剂量组差异不显著(P>0.05)、中剂量组差异显著(P<0.05)、高剂量组差异极显著(P<0.01)；低剂量组与中剂量组差异不显著(P>0.05)，低剂量组与高剂量组差异极显著(P<0.01)，中剂量组与高剂量组为差异显著(P<0.05)。以上结果表明七清败毒散具有明显的抗炎作用，且呈一定的剂量关系。

2.3 体外抑菌作用观察

七清败毒散对大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌3种菌的MIC结果见表3。

表3 七清败毒散对3种病原菌的MIC

表3结果显示，七清败毒散对沙门氏菌的最小抑菌浓度最高，大肠埃希氏菌的最小抑菌浓度次之，金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度最小。即七清败毒散对金黄色葡萄球菌的作用最强。

3 讨论

七清败毒散是以主要成分为生石膏、金银花、鱼腥草、板蓝根、忍冬藤、贯众、甘草等中药制得的中药复方散剂，其主要功效有清热解毒，清温凉血，败毒燥湿。临床上适应高热神昏，大热躁动，口渴、昏狂、发斑、舌降、脉数等，凡温病所致的热性病症、时疫等。可用于猪高热综合征、口蹄疫、家畜流感(正黏病毒，RNA病毒)、湿热泻(猪传染性胃肠炎病毒)、猪瘟等传染性疾病。使用方法主要采用预防添加法，也叫三五式添加或添加法，即添加用药3 d停止2 d，添加用药5 d停止3 d。

本试验以阿司匹林作为阳性对照组对七清败毒散的解热作用进行考察。结果显示，七清败毒散可明显抑制蛋白胨的升温作用，表明七清败毒散具有一定的解热作用。七清败毒散的抗炎试验研究是利用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型，通过测定小鼠耳廓肿胀抑制率来评价抗炎效果。试验结果表明，七清败毒散和阿司匹林对二甲苯所致小鼠耳肿胀均有显著的抑制作用，且七清败毒散的抗炎作用呈一定的剂量关系。七清败毒散抑菌试验结果表明，七清败毒散对大肠埃希氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有抑制作用，且对金黄色葡萄球菌的抑制效果较强。

七清败毒散是一种中药复方制剂，其成分无毒，且配方合理，具有良好的解热、抗炎和抑菌效果。中医中药是我国在世界上具有重要影响的学科，研发中药新剂型具有重要意义[13]。中药制剂由于其独特的抑菌特点，已有研究证明中药抗菌作用良好[14-16]。因此，在当今抗生素应用泛滥、耐药性越来越严重的时代[17]，抗菌中药复方制剂值得推广应用。