丁香提取物微乳对兔痒螨病的治疗效果观察

梁 悦，穆海龙，贺涛涛，张凯睿，李园园，范云鹏，麻武仁，刘迎秋，宋晓平

(西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100)

螨病(Acariasis)是由疥螨科和痒螨科的螨类寄生于动物体表或表皮内引起的外寄生虫病，以接触感染、皮肤剧痒和炎症为特征，普遍存在于世界各地，可见于各年龄段的多种动物，易造成患病动物生产性能下降，消化吸收机能降低，消瘦，甚至造成动物个体或大批死亡，同时也威胁人类健康[1-3]。兔痒螨(Psoroptescuniculi)主要侵害兔耳部，引起外耳道炎，渗出物干燥结痂堵塞耳道，病兔耳朵下垂，摇头搔痒，严重时蔓延至筛骨或脑部，引起癫痫[4-5]。目前，我国家兔饲养量已达7亿只，占世界饲养量的40%，兔痒螨病在我国23个省中流行，病死率高达70%，给养兔业造成巨大损失[6]。研究表明，丁香及其提取物具有显著杀螨活性，并进行了微乳剂研制[1,7]。本试验依据宠物用抗体外寄生虫药物药效评价试验指导原则[8]，进行丁香提取物微乳对自然感染兔痒螨病的实验性临床试验，旨在为进一步研发应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验用动物 自然感染痒螨病兔50只(其中伊高乐兔16只，加利福尼亚兔16只，伊拉兔8只，獭兔6只，青紫蓝兔4只)，健康兔10只(其中伊高乐兔5只、加利福尼亚兔2只、伊拉兔3只)，3月龄～8月龄，体重1.6 kg～3.6 kg，均购自陕西省武功县和周至县等养殖场。

1.1.2 试验药物 丁香提取物微乳(丁香提取物1%，聚氧乙烯氢化蓖麻油26.3%，丙二醇8.8%，油酸乙酯3.9%，水60%，其中丁香酚含量0.05%)，西北农林科技大学动物医学院中兽医实验室自制；伊维菌素溶液(含量0.3%，批号20180601)，北流市铜州药业有限公司。

1.1.3 主要试剂 丙氨酸氨基转移酶试剂盒(批号181201)、天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒(批号181201)、总蛋白试剂盒(批号181201)、白蛋白试剂盒(批号181201)、肌酸激酶试剂盒(批号181201)、尿素氮试剂盒(批号190101)、肌酐试剂盒(批号181201)，湖南永和阳光生物科技股份有限公司产品。

1.1.4 主要仪器 PH50系列生物显微镜，凤凰光学科技有限公司产品；PL2002型电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产品；隔水式培养箱，北京科伟永兴仪器有限公司产品；TEK-II mini全自动三分群血液分析仪，江西特康科技有限公司产品；日立7180型全自动生化分析仪，日本株式会社日立高新技术产品；EDTA-K2抗凝管(批号20180701)，江苏康捷医疗器械有限公司产品；真空采血管(批号20180301)，湖南平安医械有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 病例选择

1.2.1.1 诊断标准 外耳道有炎症渗出物，干固形成黄色痂皮，嵌在耳道内，甚至堵塞耳道如纸卷样，病兔耳朵下垂，不时摇头，抓挠耳朵，刮取痂皮显微镜下观察有兔痒螨(P.cuniculi)存在[9]。

1.2.1.2 纳入标准 符合临床相关诊断标准。

1.2.1.3 排除标准 患有其他皮肤病和已用药物治疗。

1.2.2 分组及处理 符合纳入标准的痒螨病兔50只，依照就诊顺序编号，利用随机数表法分为5组，每组10只。其中丁香提取物微乳高、中、低剂量组，涂擦给药，分别每天4、2、1次，连用3 d；药物对照组，涂擦伊维菌素溶液，每天2次，连用3 d；疾病对照组，不用任何药物；另选健康兔10只作为健康对照组，试验周期为14 d。

1.2.3 检测指标

1.2.3.1 感染程度及评分 试验第0天、第7天和第14天时，检查耳部炎症渗出物及结痂情况，镜检有无螨虫，并对感染程度进行评分：无渗出物或螨虫0分；耳道渗出物但未见螨虫0.5分；耳道有少量痂皮有螨虫1分；外耳道充满痂皮有螨虫2分；耳道和耳廓近端1/4有痂皮有螨虫3分；耳廓1/2充满痂皮有螨虫4分；耳廓3/4充满痂皮有螨虫5分；整个耳廓内充满痂皮有螨虫6分[10]。计算不同试验组的平均分值，并进行统计学分析。

1.2.3.2 虫体减少率和虫体转阴率检查 试验第0天、第7天和第14天时，采集患部结痂，置于干净平皿中用摄子捣碎混匀，挑取约0.1 g置35℃培养箱中0.5 h～1 h，收集螨虫并计数，按以下公式分别计算每只试验兔的虫体减少率和不同试验组的虫体转阴率[11-12]。

1.2.3.3 血常规指标检测 试验第0天和第4天，耳缘静脉采血2 mL，置于EDTA-K2抗凝管，进行血液学指标检测，主要包括白细胞(WBC)、淋巴细胞(Lym)、中间细胞(Mid)、粒细胞(Gra)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)和血小板(PLT)等。

1.2.3.4 血液生化指标检测 试验第0天和第4天，耳缘静脉采血4 mL，置于非抗凝管，室温静置0.5 h～2 h，3 000 r/min离心10 min，分离血清，进行血液生化指标检测，主要包括谷氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酸激酶(CK)、尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)等。

1.2.3.5 病理剖检 试验结束时对各组兔进行剖检，肉眼观察病变，取心、肝、脾、肺、肾、胃、肠、子宫、睾丸等，剔除多余组织称重，计算脏器系数。

1.2.4 疗效判定标准 试验第14天时，检查每只兔耳部螨虫数量，计算虫体减少率，并结合临床症状综合判定疗效。有效：耳部螨虫数量平均减少率≥90%，患部无瘙痒，无渗出物，无痂皮或有少量痂皮；无效：耳部螨虫数量平均减少率<90%，患部仍有瘙痒、有渗出物、有痂皮[8]。

有效率=(各组有效试验动物数/各组试验动物数)×100%

无效率=(各组无效试验动物数/各组试验动物数)×100%

1.2.5 数据统计分析 试验统计结果用平均值±标准差表示，计数数据用百分比(%)表示，应用SPSS19.0进行单因素或卡方检验，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。

2 结果

2.1 治疗效果

使用丁香提取物微乳不同剂量治疗后，病兔耳部症状均有所改善，结痂脱落(图1)，螨虫数量明显减少。在治疗后7 d时，高、中剂量组的感染程度及评分均极显著降低，与低剂量组比较差异极显著(P<0.01)，与药物对照组相当(P>0.05)；高、中剂量组的虫体减少率与低剂量组比较差异极显著(P<0.01)。试验14 d时，不同剂量组的虫体转阴率达70%～100%，高、中剂量组的虫体减少率与低剂量组、药物对照组比较差异极显著(P<0.01)，且高、中剂量组间效果相当(P>0.05)(表1～表3)。说明丁香提取物微乳喷涂给药，每天4次，或2次，连用3 d，对兔痒螨病具有显著治疗效果。

2.2 丁香提取物微乳对血常规的影响

结果见表4。由表4可知，试验第4天，丁香提取微乳不同剂量组的WBC、Lym、Gra、RBC、HGB、PLT等血液学指标，与药物对照组和疾病对照组均差异不显著(P>0.05)，说明丁香提取物微乳对血液学指标无明显异常影响。

2.3 丁香提取物微乳对血液生化指标的影响

试验第4天时，丁香提取物微乳不同剂量组的ALT、AST、TP、ALB、CK、CRE等血液学指标，与疾病对照组比较差异不显著(P>0.05)；与健康对照组比较，ALT、TP、CK、BUN、CRE差异不显著(P>0.05)，ALB极显著低于健康对照组(P<0.01)，且高剂量组的AST极显著低于健康对照组(P<0.01)，BUN变化无规律(表5)。说明丁香提取物微乳对兔血液生化指标无明显异常影响。

A～C.分别为丁香提取物微乳高、中、低剂量组；D.药物对照组；1～3.分别为第0、7、14天时的耳部症状

表1 兔痒螨感染程度及评分

表2 丁香提取物微乳对虫体减少率和转阴率的影响

表3 丁香提取物微乳对兔痒螨的临床治疗效果Table 3 Effects of Eugenie caryophyllata extract microemulsion on the treatment of Psoroptes cuniculi infection in rabbits

表4 丁香提取物微乳对试验兔血常规的影响

2.4 丁香提取物微乳对兔脏器的影响

丁香提取物不同剂量组家兔解剖未见明显异常变化，心、肝、脾、肺、肾、胃、肠等脏器系数与疾病对照组比较差异不显著(P>0.05)；不同剂量组的心脏系数、高剂量组的胃系数极显著高于健康对照组(P<0.01)(表6)。说明丁香提取物微乳对兔脏器形态无明显异常影响。

表5 丁香提取物微乳对试验兔血液生化指标的影响

表6 丁香提取物微乳对兔脏器系数的影响

3 讨论

丁香为桃金娘科植物丁香(EugeniacaryophyllataThunb)的干燥花蕾，性味辛温，主要含有挥发油，丁香酚为其主要成分，具有显著杀螨活性[1]，丁香酚可通过影响螨虫谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、单胺氧化酶(MAO)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、Ca2+-ATP酶活性，引起细胞功能紊乱，促进螨虫死亡[13]；丁香酚还可通过调控儿茶酚酸(Ca)、硫氧还蛋白(Trx)的mRNA表达，抑制螨虫细胞色素P450活性，对兔痒螨产生杀灭作用[14-15]。郭超[7]对丁香提取物及其微乳剂的制备工艺进行了优化试验，并证明丁香提取物微乳对离体兔痒螨具有显著杀灭作用，且该微乳剂室温避光保存时稳定[16]。本试验结果表明，丁香提取物微乳涂擦给药，每天2次或4次，连用3 d，第7天时病兔耳道结痂脱落，症状明显减轻，第14天时虫体转阴率达100%，有效率达100%；血液学指标、血液生化指标及组织器官无明显异常变化，说明使用安全，临床推荐用法用量为涂擦给药，每天2次，连用3 d。