Neu-P11对急性高血压大鼠血压的影响

张 瑶，简 武，张星慧，吴建华，尹卫东，何 璐，Moshe Laudon，石金凤*

(1.常德市第一人民医院检验科，湖南 常德 415000；2.衡阳爱尔眼科医院，湖南 衡阳 421001；3.南华大学心血管疾病研究所，湖南 衡阳 421001；4.南华大学附属第一医院神经外科，湖南 衡阳 421001；5.以色列Neurim制药有限公司，以色列 特拉维夫 69710)

高血压病伴心脑血管等多靶器官受损，是诱发脑卒中[1]、心力衰竭[2]、冠心病[3]等多种疾病发生的重要原因。其发病过程中氧化应激反应的过度激活引起血管内皮细胞功能失调，导致活性氧(reactive’ oxygen species,ROS)生成过多，诱发血管壁炎性损伤，影响压力感受器感觉神经末梢的功能，压力感受器的损伤使其对血压的调节功能减弱，推动高血压的进展[4]。褪黑素(melatonin,Mel)是由松果体合成分泌具有调节昼夜节律作用的一种吲哚类神经内分泌激素，可以通过抑制交感神经和兴奋迷走神经、抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴调节醛固酮和肾素等的分泌、抗氧化等作用而降低血压[5]。Neu-P11是新型褪黑素非选择性受体激动剂，与褪黑素有类似的作用，对其受体具有高亲和力[6]。前期研究结果表明，Neu-P11具有降低SD大鼠眼内压的作用[7]，但其对血压的作用尚不明确，本文旨在研究Neu-P11对急性高血压状态下收缩压和舒张压的影响及其相关机制。

1 材料与方法

1.1 动物和材料

选取40只体质量为200～250 g健康8周龄SD大鼠(购自南华大学动物部)，普通饲料喂养，自由饮水与进食。正式实验前常规适应环境饲养一周(通风，温度18～25 ℃，湿度40%，光照与黑暗时间各12 h)。谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)测试盒购自南京建成生物工程研究所；血压检测仪(BL-420)购自成都泰盟软件有限公司。Neu-P11和褪黑素由以色列Moshe Laudon博士惠赠。

1.2 模型建立和分组

将40只SD大鼠分为正常对照组(n=10)和模型组(n=30)。30只模型组大鼠建模成功后均分为高血压组，Mel治疗组，Neu-P11治疗组(n=10)。高血压模型建立采用Trendelenburg卧位(头低脚高80°位置)法，即每天上午(8∶00-9∶00 am)将动物被置于Trendelenburg卧位并采用无创伤的尾套体积描记法测量大鼠尾动脉血压变化，每5 min测一次，共4次，取最大值[8]。建模后高血压组，Mel治疗组，Neu-P11治疗组分别注射生理盐水、10 mg/kg褪黑素、20 mg/kg Neu-P11(腹腔注射注射1 mL药物)，给药后休息2 h，再次置于Trendelenburg卧位45 min后每小时测一次收缩压和舒张压值，共3次。重复实验一周。

1.3 血压测量

每组大鼠血压测量采用无创伤的尾套体积描记法。即每天在Trendelenburg卧位(头低脚高80°位置)倒立且大鼠安静5 min时采用无创伤的尾套体积描记法测量大鼠尾动脉血压，3次测量平均值，重复试验一周。

1.4 血清MDA、GSH-Px和SOD水平测定

每组大鼠注射过量戊巴比妥处死SD大鼠，心脏取血于离心管中，3 000 rpm高速离心5 min，收集血清并分装储存于-20 ℃冰箱，使用相应测试盒分别检测血清MDA、GSH-Px和SOD水平(取样后7天内完成测量)。

1.5 统计分析

用SPSS18.0软件进行统计学分析，数据结果用均数±标准差表示。两组数据的差异比较采用独立样本Studentt检验，多组数据的比较采用one-way ANOVA及Newman-Student-Keuls检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Trendelenburg卧位建立急性高血压大鼠模型

采用Trendelenburg卧位(头低脚高80°位置)来建立急性高血压模型[1]，结果如图1所示，经Trendelenburg卧位诱导后，模型组SD大鼠收缩压升高了约为正常组130%(P<0.05)，舒张压升高约为正常组的150%(P<0.05)，提示SD大鼠急性高血压模型建立成功。

图1 Trendelenburg卧位对大鼠血压的影响与正常组相比，*P<0.05

2.2 Neu-P11对大鼠血压的影响

监测了各组大鼠的收缩压和舒张压，对一周均值进行分析比较。与高血压组比较，Neu-P11和Mel治疗组SD大鼠收缩压和舒张压均显著降低(P<0.05，表1)。

表1 急性高血压大鼠不同时期的收缩压及舒张压比较 (mmHg)

2.3 Neu-P11对血清MDA、SOD和GSH-Px水平的影响

与正常组相比，高血压组血清MDA水平显著升高，而抗氧化酶SOD和GSH-Px水平明显降低(P<0.05)。与高血压组相比，Mel治疗组及Neu-P11治疗组大鼠血清MDA水平明显下降，血清SOD和GSH-Px水平显著升高(P<0.01，表2)。

表2 Neu-P11对急性高血压大鼠血清MDA、SOD和GSH-Px水平的影响

3 讨 论

高血压是全球死亡的主要危险因素，是心脑血管病最主要的危险因素[9]。随着我国人口的老龄化，高血压疾病患病率越来越高，据推算，我国现在心血管疾病患病人数已达2.9亿，其中高血压患者2.7亿[10]。高血压是冠心病、急性心肌梗死等疾病的主要发生原因，与血管内皮功能以及机体氧化应激反应存在相关性[11]。氧化应激参与调节内皮细胞功能，高血压发病过程中存在过度激活的氧化应激反应，影响内皮细胞的功能。Kurlak等[12]研究表明高血压患者的收缩压、舒张压水平与氧化应激标志物呈正相关，与抗氧化水平呈负相关。

褪黑素是一类具有调节昼夜节律和强效抗氧化作用的吲哚类神经激素，具有降低血压的作用[5]。褪黑素受体激动剂Neu-P11与褪黑素有类似功能，笔者前期研究表明Neu-P11具有抗炎抗氧化作用[7-8]，而其是否能降低血压目前尚不明确。因此，本实验旨在研究Neu-P11对急性高血压大鼠血压的影响及其相关机制，这对高血压疾病的防治具有十分重要意义。

本实验采用Trendelenburg卧位构建高血压模型，模型组SD大鼠收缩压升高了约为正常组130%，舒张压升高约为正常组的150%，提示大鼠急性高血压模型建立成功。模型组大鼠与正常组相比，血清脂质过氧化物MDA水平升高，抗氧化物酶SOD和GSH-Px血清水平显著下降，提示机体处于氧化应激状态，而Neu-P11/Mel治疗后大鼠血压明显降低，机体上述氧化应激指标均显著改善。

综上所述，Trendelenburg卧位状态下，机体处于氧化应激状态，大鼠血压升高，处于高血压状态。褪黑素及其受体激动剂Neu-P11治疗可能通过抑制机体氧化应激水平，发挥其降低血压的作用。