TMEM158、CTEN在乳腺癌组织表达水平及意义

朱雪峰，刘彦魁，张 亚*

(1.无锡市第九人民医院普外科，江苏 无锡 214000；2.江南大学附属医院病理科，江苏 无锡 214000)

乳腺癌的发生占据了女性群体恶性肿瘤的前三位，乳腺癌的高死亡率仍然是导致临床上女性恶性肿瘤患者不良临床结局的主要因素[1-2]。越来越多的临床或者基础方面的研究证实，分子蛋白或者基础生物学领域相关机制的改变，通过影响乳腺癌上皮细胞的异常分裂，促进导管上皮细胞生物学行为的恶化，最终参与乳腺癌的进程。跨膜蛋白158(transmembrane protein 158,TMEM158)是跨膜蛋白家族成员，其通过诱导癌细胞外壳蛋白受体的激活，促进癌细胞信号通路的交叉激活，最终影响肿瘤基因的转录和翻译过程[3]；羟基张力蛋白素(hydroxytensin,CTEN)是细胞间质蛋白成分，其不仅影响癌细胞间结构的稳定性，同时还能够通过影响癌细胞浸润和侵袭能力，干预到恶性肿瘤细胞的转移过程[4-5]。为了揭示TMEM158、CTEN蛋白与乳腺癌发生发展机制，本文探讨了乳腺癌组织TMEM158、CTE与临床病理特征的关系，旨在为临床上乳腺癌的诊疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月至2020年5月本院和江南大学附属医院保存的乳腺癌组织标本110例作为研究对象，同时选取癌旁组织(距癌边缘≥5 cm)作为对照，纳入标准：(1)均经病理学确诊；(2)女性患者；(3)临床资料保存完整。排除标准：(1)术前有放疗、化疗等抗肿瘤治疗史；(2)合并有其它系统恶性肿瘤。

1.2 实验方法

石蜡切片进行脱水操作后用3%H2O2在室温条件下孵育20 min，再用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗3次，每次清洗5 min，PBS稀释后的山羊血清封闭抗体5 min，加入一抗(购自赛默飞世尔中国浓度：1∶1 000)5 mL，在37 ℃条件下孵育2 h，或者放置4 ℃冰箱过夜孵育，再用PBS清洗3次，每次5 min，加入生物素荧光标记的二抗(购自赛默飞世尔中国浓度：1∶2 000)3 mL，37 ℃孵育30 min，再用PBS清洗3次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP辣根酶标记链霉卵白素，37 ℃孵育30 min，再用PBS清洗3次，每次5 min，采用增强型HRP-DAB底物显色试剂盒(PA110)显色，自来水冲洗，复染，封片。

1.3 结果判断

TMEM158、CTEN主要表达于细胞胞质；采用双盲法由3名病理科医师进行判断，染色强度判断：无色、淡黄色、棕黄色和棕褐色分别记为0分、1分、2分和3分；阳性细胞比例判断：≤10%，11%～25%，26%～50%，51%～75%，>75%分别记为0分、1分、2分、3分和4分。染色强度与阳性细胞比例得分之积，≥4分为阳性表达。

1.4 统计学处理

数据分析采用SPSS22.0软件，计数资料用百分率(%)表示，用χ2检验，采用Spearman秩和检验分析两种变量之间的相关性，检验水准：双侧α=0.05。

2 结 果

2.1 乳腺癌和癌旁组织TMEM158、CTEN表达

乳癌癌组织TMEM158、CTEN免疫组化染色见图1，表1可见乳癌癌组织TMEM158、CTEN阳性表达率显著高于癌旁组织。

图1 免疫组化染色图(200×)A：癌旁组织TMEM158表达；B：乳腺癌TMEM158表达；C：癌旁组织CTEN表达；D：乳腺癌CTEN表达

表1 乳腺癌和癌旁组织TMEM158、CTEN阳性表达率 (例，%)

2.2 TMEM158与乳腺癌临床病理关系

肿瘤直径≥2 cm、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、PR阴性、ER阴性、Ki-67阴性组织TMEM158阳性表达率显著高于肿瘤直径<2 cm、Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、PR阳性、ER阳性和Ki-67阳性组织。具体数据见表2。

2.3 CTEN与乳腺癌临床病理关系

肿瘤直径≥2 cm、组织学分级3级、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、PR阴性组织CTEN阳性表达率明显高于肿瘤直径<2 cm、1级、Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、PR阳性组织。具体见表3。

2.4 相关性分析

乳腺癌组织TMEM158与CTEN蛋白表达呈显著正相关，见表4。

表2 TMEM158与乳腺癌患者病理关系

表3 CTEN与乳腺癌患者病理关系

表4 相关性分析

3 讨 论

乳腺系统恶性肿瘤的发生，能够在患者生存预后、短期内生活质量方面产生显著的影响，进而导致乳腺癌患者整体临床结局的恶化[6-7]。在雌激素受体密度异常、长期高精神压力或者快生活节奏的群体中，乳腺导管或者小叶上皮细胞恶性病变的风险可持续上升[8]。乳腺癌临床病理学评价对乳腺癌早期筛查和乳腺癌化疗及随访提供参考。分子标记物包括乳腺癌胚抗原或者甲胎蛋白等在内的相关肿瘤标志物，对于乳腺癌临床病理特征评估的可靠性较低，与乳腺癌发生发展的内在联系并不密切。肿瘤信号通路调控相关蛋白和肿瘤细胞间质蛋白，对细胞的癌变起着重要作用。本次研究提示乳腺癌患者病灶组织中TMEM158、CTEN的表达上调，可能为乳腺癌的诊断和治疗提供重要参考。

TMEM是跨膜蛋白家族成员，其对于肿瘤细胞膜上糖蛋白配体的激活，能够影响到双层脂质膜结构的改变，导致癌细胞膜内侧G蛋白偶联通路的激活，进而激活第二信使，导致肿瘤细胞核转录基因的异常激活[9]；CTEN为羧基张力蛋白家族的一员，通过对癌细胞骨架结构的影响，降低癌细胞的黏附力，促进癌细胞的侵袭和转移[10-11]。有文献报道，在乳腺癌患者中，CTEN蛋白的表达浓度水平可随着乳腺癌病情的恶化而上升[12-13]，但对于TMEM158的探讨较少。

雌激素受体(ER)，孕激素受体(PR)是性激素受体，存在于正常乳腺上皮细胞中，ER，PR可以调节乳腺细胞的增殖和乳腺的生长发育。当细胞癌变时，ER，PR或存在或消失，因此将乳腺癌分为两类：一类为非激素依赖性乳腺癌，表现为雌激素和孕酮在乳腺癌细胞中不表达，ER和PR消失，内分泌激素不再调节乳腺癌的生长和增殖，这种类型肿瘤分化差，预后差。另一类为激素依赖性乳腺癌，表现为ER和PR在乳腺癌细胞中正常表达，ER、PR甚至存在内分泌激素，影响乳腺癌的生长和增殖，这种类型肿瘤分化程度高，预后良好。Ki-67是一种与细胞周期相关的蛋白，它只在人增殖细胞的G1、S、G2、M期表达，但在G0期无表达。乳腺癌患者ER、PR、Ki-67和年龄无显著性差异，但PR的表达与乳腺癌的临床分期有关。

本次研究发现，乳腺癌患者病灶组织的TMEM158、CTEN蛋白的表达阳性率显著高于乳腺癌旁组织，表明TMEM158、CTEN在乳腺癌患者中存在较高的表达。其机制主要是TMEM158能够在肿瘤信号通路MAPK的激活、癌细胞伪足形成、细胞间质分解等方面发挥作用，进而整体性影响乳腺癌细胞的生物学行为；CTEN能够促进癌细胞上皮-间质转换过程，促进肿瘤细胞对于乳腺基底膜组织的浸润，从而影响到了乳腺癌的发生过程[14]。免疫组化染色发现，在乳腺癌细胞异型性明显或者癌细胞分化不佳的区域，TMEM158、CTEN的染色强度较深。肿瘤≥2 cm、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、PR阴性、ER阴性、Ki-67阴性组织中，TMEM156蛋白的表达阳性率较高，表明TMEM158能够显著促进乳腺癌临床病理特征的进展。这主要由于TMEM158能够提高跨膜受体的激活程度，促进癌细胞内钙离子调控的信号通路的激活，最终促进肿瘤细胞浸润深度的增加和淋巴结转移的发生。在PR阴性、ER阴性、Ki-67阴性的患者中，TMEM158蛋白的阳性率较高，主要由于乳腺癌相关受体阴性能够通过负反馈调节机制，进而影响到跨膜内外侧蛋白的活性；在组织学分级3级、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、PR阴性组织的患者中，CTEN蛋白的表达阳性率较高，提示了CTEN蛋白的高表达同样能够显著影响到乳腺癌患者的病情。这主要由于CTEN的高表达，能够通过加剧癌细胞间层粘蛋白的分解速度，提高肿瘤细胞肌动蛋白的密度，进而影响到乳腺癌细胞的浸润过程，影响到癌细胞对于淋巴结组织的侵袭[15]。相关关系分析发现，TMEM158与CTEN蛋白的表达具有一定的内在相关关系，表明TMEM158与CTEN蛋白在影响乳腺癌病情进展的过程中可能发挥了重要的协调作用。

综上所述，乳腺癌组织TMEM158、CTEN表达明显上调，与临床病理特征有一定关系，两者表达呈正相关。