复方511联合电针对小鼠吗啡条件性位置偏爱和行为敏化的影响

张晗 聂登云 江永伟 吕志刚

摘要 目的：研究复方511联合电针对小鼠吗啡条件性位置偏爱（CPP）和行为敏化的影响。方法：实验1，30只雄性C57BL/6J小鼠用随机数字表法随机分为对照组、模型组、复方511低、中、高剂量组，每组6只，采用CPP实验观察低、中、高剂量复方511对小鼠吗啡CPP偏爱分数及总活动度和伴药箱穿梭次数的影响;实验2，30只雄性C57BL/6J小鼠用随机数字表法随机分为对照组、模型组、复方511组、电针组、针药组，每组6只，采用CPP实验观察复方511、电针、复方511联合电针对小鼠吗啡CPP偏爱分数及总活动度和伴药箱穿梭次数的影响。结果：1）实验1，与对照组比较，模型组小鼠的偏爱分数显著升高（P<0.000 1），而低、中、高剂量复方511均能降低小鼠偏爱分数，但仅中剂量的差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组小鼠比较，吗啡给药后小鼠的总活动路程和伴药箱穿梭次数较训练前明显减少（P<0.01），而施用中剂量复方511能显著提高减少的总路程和伴药箱穿梭次数（P<0.05）。2）实验2，与对照组比较，模型组小鼠的偏爱分数显著增加（P<0.000 1），复方511、电针、针药结合均能有效降低偏爱分数（P<0.05，P<0.05，P<0.000 1），且针药结合的作用优于单独使用复方511和电针（P<0.05）。与对照组比较，训练后模型组小鼠的总活动路程和伴药箱穿梭次数较训练前明显减少（P<0.000 1），而复方511、电针、针药结合均能显著提高小鼠吗啡给药后的总活动度和伴药箱穿梭次数（P<0.05）。结论：复方511联合电针能有效改善小鼠吗啡诱导的CPP和行为敏化。

關键词 电针;复方511;阿片成瘾;吗啡;条件性位置偏爱;偏爱分数;行为敏化;总活动度

Abstract Objective：To observe the effects of compound 511 combined with electro-acupuncture on morphine induced-conditioned place preference（CPP）and behavioral sensitization in mice.Methods：A total of 30 male C57BL/6J mice were randomly divided into control group，model group，compound 511 low，medium，and high dose groups by random number table method with 6 mice in each group.The CPP experiment was used to observe the effects of low，medium and high dose of compound 511 in mice on morphine CPP preference score，total movement distance and the number of shuttles in the drug-paired box; 30 male C57BL/6J mice were randomly divided into the control group，the model group，the compound 511 group，the electroacupuncture group，and compound 511 combined electro-acupuncture group by the random number table method with 6 mice in each group.The CPP experiment was used to observe the effects of compound 511，electroacupuncture，compound 511 combined with electroacupuncture in mice on morphine CPP preference score，total movement distance and the number of shuttles in the drug-paired box.Results：1）Compared with the control group，the preference score of mice in the model group increased significantly（P<0.000 1）.Low，medium and high doses of compound 511 could reduce the preference score，but only the difference of middle dose was statistically significant（P<0.05）.Compared with the control group，the total movement distance and the number of shuttles in the drug-paired box in the model group were significantly reduced than pre-training period（P<0.01）.The middle-dose compound 511 could significantly increase the total movement distance and the number of shuttles in the drug-paired box（P<0.05）.2）Compared with the control group，the preference score of mice in the model group increased significantly（P<0.000 1）.Compound 511，electroacupuncture，and compound 511 combined with electroacupuncture could significantly reduce the preference score（P<0.05，P<0.05，P<0.000 1），and the combination of electroacupuncture and compound 511 was better than using compound 511 and electroacupuncture alone（P<0.05）.Compared with the control group，the total movement distance and the number of shuttles in the drug-paired box of the model group after training were significantly reduced compared with pre-training（P<0.000 1）.Compared with the model group，the mice in the compound 511 group，electroacupuncture group，and acupuncture group had significantly more total movements and number of shuttles in the drug-paired box（P<0.05）.Conclusion：Compound 511 combined with electroacupuncture can effectively inhibit morphine-induced CPP and behavioral sensitization in mice.

Keywords Electro-acupuncture; Compound 511; Drug addiction; Morphine; Conditioned place preference; Preference score; Behavioral sensitization; Total movements

中图分类号：R245.31+9;R277.7文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.21.003

阿片类药物滥用和成瘾是一项持续且迅速发展的公共卫生危机。尤其是美国，阿片类药物过量死亡人数急剧增加，2018年，阿片类药物过量导致超过5万人死亡[1]。由于阿片类药物依赖性急剧增加，有必要制定适当的治疗方案。阿片受体拮抗剂盐酸纳曲酮、阿片受体激动剂美沙酮或丁丙诺啡等被用于治疗阿片类药物成瘾[2]。尽管这些治疗取得了一定效果，但在后期巩固和康复中却效果不佳。

近年来研究表明，中医药在阿片成瘾干预方面有独特的优势。复方511是本课题组自主研发的用于阿片类药物成瘾的中药制剂，由人参、黄芪、洋金花、延胡索、五加皮、麦冬、绞股蓝、金牛草等组成。自上世纪70年代以来，针刺也被广泛用于对抗成瘾、防止复吸[3]。本研究观察了复方511联合电针对小鼠吗啡条件性位置偏爱（CPP）和自发活动的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 8～10周龄SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠60只，体质量20～22 g，购于河南斯克贝斯生物科技股份有限公司，许可证号：SCXK（豫）2020-0005。小鼠适应性喂养1周，自由摄食和饮水，12 h光暗周期，环境温度保持在（20±2）℃，湿度50%～70%。

1.1.2 药物 盐酸吗啡注射液（东北制药集团沈阳第一制药有限公司，批号：181102-1）。复方511：人参12 g、黄芪25 g、洋金花15 g、延胡索20 g、五加皮15 g、麦冬15 g、绞股蓝15 g、金牛草20 g（药材购于江苏省中医院）。取各药材适量，加10倍量的水进行煎煮，煎煮时间为30 min，过滤得到滤液和滤渣;加入药渣总质量8倍的水进行2次煎煮，煎煮时间为30 min，再次过滤得到滤液和滤渣;合并滤液，60 ℃减压浓缩;采用真空干燥法（70 ℃、真空度93.3～98.6 kPa，2～4 h）将浓缩液制备成浸膏，并放于-20 ℃冰箱保存备用。

1.1.3 试剂与仪器 VisuTrack动物高端行为分析软件（上海欣软信息科技有限公司，版本：2020），韩氏穴位神经刺激仪（南京济生医疗科技有限公司，型号：HANS-200），无菌针灸针（北京中研太和医疗器械有限公司，规格：0.18 mm×10 mm）。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备

1.2.1.1 分组 在复方511对小鼠吗啡CPP和行为敏化的影响的实验中，采用随机数字表法将30只小鼠随机分为5组，每组6只，分别为对照组、模型组、复方511低、中、高剂量组;在复方511联合电针对小鼠吗啡CPP和行为敏化的影响，采用随机数字表法将30只小鼠随机分5组，每组6只，分别为对照组、模型组、复方511组、电针组、针药组。

1.2.1.2 模型制备 三室CPP装置参照文献[4]制作，左右两箱内径均为15 cm×18 cm×20 cm，一侧为黑色，箱底为颗粒，一侧为白色，箱底为木屑，中间箱位于黑白箱之间，内径为15 cm×8 cm×20 cm，箱与箱之间的通道由可提插的闸门控制开或关;实验分为预测试期、训练期、测试期3个阶段。预测试期：打开隔板，将小鼠放入中间箱，让其自由跑动20 min，1次/d，连续3 d。第3天记录小鼠在黑白箱中的停留时间，确定小鼠的天然偏爱倾向，以非天然偏爱箱为伴药箱训练小鼠。训练期：关闭隔板，各组小鼠注射2次/d，对照组2次均注射生理盐水，其余各组上午注射生理盐水，下午注射吗啡（10 mg/kg），间隔6 h。经吗啡或生理盐水腹腔注射后，立即放入伴药箱或非伴药箱停留30 min。测试期：打开隔板，不予任何注射，将小鼠置于中间箱中，记录其20 min内在各箱中的停留时间、伴药箱穿梭次数、总活动路程等。

1.2.2 干预方法

1.2.2.1 复方511对小鼠吗啡CPP和行为敏化的影响 取出复方511浸膏，分别加入水得到0.15、0.30、0.60 g/mL的复方511溶液，训练期间，各组均按体质量灌胃给药，复方511低、中、高剂量组于吗啡前2 h分别灌胃复方511 3、6、12 g/kg，对照组和模型组均给予20 mL/kg的生理盐水。

1.2.2.2 复方511联合电针对小鼠吗啡CPP和行為敏化的影响 参照文献[5]进行腧穴定位，电针组和针药组予电针“足三里”“三阴交”穴。将小鼠固定于自制的塑料套筒中，后肢及尾巴自然暴露于筒外。将针灸针分别插入小鼠双侧足三里和三阴交穴，同侧穴连接穴位神经刺激仪进行电针刺激，频率为2 Hz/100 Hz，刺激强度以小鼠下肢轻微抖动为度，留针30 min，训练期1次/d。复方511组、针药组选择复方511对吗啡CPP干预效果最好的剂量进行给药。针药组先行中药灌胃，再行电针治疗。除对照组外，各组均同电针组和针药组一样束缚30 min，对照组、模型组、电针组均给予20 mL/kg的生理盐水。

1.2.3 检测指标与方法 运用VisuTrack动物高行为分析软件记录预测试期和测试期小鼠在伴药箱和非伴药箱中的停留时间、伴药箱穿梭次数及总活动路程。

参考文献

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（2020-09-10收稿 责任编辑：王明）