液质联用法测定鸡肉中9种激素类药物残留

李卿沛，马雪琴，代春梅，焦绍明

（金昌市农产品质量安全检测中心，甘肃 金昌 737100）

激素是生物体内产生的一类调节机体代谢及生理功能的微量物质，是动物生长发育过程中的重要物质之一[1-2]。人工合成具有类似结果的类固醇激素，主要有糖皮质激素（如可的松、地塞米松、甲基泼尼松龙）、孕激素（如乙酸甲地孕酮、乙酸氯地孕酮、诀诺酮、孕酮）、雄性激素（如乙酸甲地孕酮、乙酸氯地孕酮、诀诺酮、孕酮）等。激素类药物常用于提高畜禽的饲料转化率，达到增重的目的，但其在体内残留会导致早熟、致癌等一系列的问题[3-5]。目前，激素类药物已被大部分国家限制或禁止在养殖业中使用。本实验通过对检测条件和前处理方法的优化，建立了一种液质联用法测定鸡肉中的9种激素残留的分析方法。

1 检测方法

1.1 仪器与试剂

Agilent1290-6460液质联用仪（美国Agilent公司）；力康23R高速冷冻离心机（力康公司）；IKA RV10旋转蒸发仪（艾卡公司）；IKA VXR涡旋振荡器（艾卡公司）；力康Smart-N30VF超纯水机（力康公司）；Agilent Bond Elut C18固相萃取柱（500 mg/3 ml，美国Agilent公司）。

9种激素类药物标准品：地塞米松（100μg/ml），农业农村部环境保护科研监测所；乙酸甲地孕酮（1000μg/ml）；天津阿尔塔科技有限公司；甲基睾酮（50 mg）、乙酸氯地孕酮（50 mg）、可的松（250 mg）、甲基泼尼松龙（250 mg）、诺龙（100 mg）、诀诺酮（100 mg）、孕酮（50 mg），Stanford Chemicals。甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯），美国Fisher公司。其他试剂为分析纯。

1.2 实验方法

1.2.1 标准品的配制 准确称取或量取9种激素类药物标准品，用甲醇配制成10 mg/L的混合标准贮备液，置于-18℃冰箱中保存。取1 ml标准储备液用甲醇定容至10 ml，配制成浓度为1 mg/L的标准中间液。

1.2.2 前处理方法 准确称取鸡肉样品2 g于50 ml离心管中，加入10 ml乙腈，涡旋振荡5 min，超声提取10 min，1 0000 r/min离心10 min，取上清液至鸡心瓶，残渣重复提取一次，合并上清液于鸡心瓶中，40℃减压旋蒸至干，加入5 ml 30%甲醇水溶液溶解残余物，待净化。

C18固相萃取柱依次使用3 ml甲醇、3ml水活化，上述待净化溶液全部过柱，用2 ml 30%甲醇水溶液淋洗小柱，抽干后使用3 ml 90%甲醇水溶液洗脱，收集洗脱液于40℃下氮气吹干，加入1 ml 50%甲醇水溶液溶解，过0.22μm微孔有机滤膜后待检测。

1.2.3 基质匹配混合标准溶液的配置 去空白糜状鸡肉样品作为基质，按前处理步骤处理制备基质溶液。取激素类药物标准中间液，用空白基质溶液配置成200 ug/L的基质标准工作液，然后用空白基质溶液逐级稀释得到100μg/L、50μg/L、20μg/L、10μg/L、5μg/L的基质匹配标准系列溶液。基质匹配标准溶液现用现配。

1.2.4 色谱条件 色谱柱为Agilent SB-C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.8μm）；流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液（梯度洗脱程序见表1）。

1.2.5 质谱条件 采用电喷雾正离子模式多反应监测，9种激素类药物的保留时间、传输电压、定性离子对、定量离子对、碰撞电压等质谱条件参数见表2，鸡肉中9种激素类药物混标溶液总离子流色谱图（50μg/L）见图1。

表1 液相色谱梯度洗脱程序

图1 鸡肉中9种激素类药物混标溶液（50μg/L）总离子流色谱图

2 结果与分析

2.1 样品提取

激素类药物一般采用甲醇、乙腈、酸化乙腈、乙酸乙酯等作为激素类药物提取剂，本试验比较了甲醇、乙腈、1%乙酸乙腈、乙酸乙酯的提取效果，结果显示乙腈提取9种激素类药物回收率较高，故采用乙腈作为提取溶剂。

表2 9种激素类药物质谱条件参数

2.2 基质效应的影响

考虑到鸡肉基质产生的基质效应对检测结果的影响，本方法采用基质匹配标准溶液的方法降低基质效应对检测结果的影响[6]。

2.3 线性范围和检出限、定量限

取基质匹配标准系列溶液上机测试，以各化合物测得的峰面积和相应浓度建立标准曲线，线性范围为5～200μg/L；根据9种药物的响应值，以3倍信噪比（S/N=3）计算检出限，以10倍信噪比（S/N=10）计算定量限。9种药物的回归方程、相关系数、检出限（LOD）和定量限（LOQ）见表3。

2.4 回收率和精密度

在鸡肉中添加9种激素类药物混标进行加标回收实验，添加浓度分别为10、20、50μg/kg，重复检测6次，检测结果见表4。其平均回收率范围为73.98%～116.42%，相对标准偏差（RSD）小于6%，符合实际分析需求。

3 结论

本试验建立了鸡肉样品中9种激素类药物残留的液质联用检测方法，本分析方法检出限、定量限、回收率等均符合实际检测要求，适用于实际样品中药物残留的检测。

表3 9种农药的标准曲线、相关系数、检出限和定量限

表4 9种药物的加标回收率及相对标准偏差（n=6）