骨髓细胞形态学检验联合免疫分型及细胞遗传学在急性早幼粒细胞白血病中的诊断价值

陈国军

广东省台山市中医院(广东 台山 529200)

血液病指的是原发于骨髓造血系统的疾病，具有发热、出血、贫血、肝脾和/或淋巴结肿大等临床表现[1]。白血病是由于患者骨髓造血功能紊乱导致白血病细胞恶性增殖的一种血液病。按照细胞的自然病程及分化程度进行划分，白血病具有两种不同类型，一是慢性白血病；二是急性白血病。第二种白血病包括急性髓细胞白血病(AML)及急性淋巴结细胞白血病(ALL)。急性早幼粒细胞白血病(APL)是急性髓细胞白血病(AML)的一种特殊类型，被法美英(FAB)协作组定义为急性髓细胞白血病M3型(简称AML-M3)。随着工业经济的迅猛发展，我国环境遭遇严重污染，加上饮食结构不合理，急性早幼粒细胞白血病发生率呈上升趋势[2]。现阶段，临床诊断血液病的方法包括细胞遗传学检查、免疫分型、骨髓活检、血液形态学检验等[3]，然而单一检查往往极易漏诊、误诊。为探究骨髓细胞形态学检验联合免疫分型及细胞遗传学在血液病中的诊断价值，本次研究选取2013年1月-2017年12月期间我院收治的82例白血病患者作为研究对象，详细报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2013年1月-2017年12月期间我院收治的82例疑似白血病患者作为研究对象。男性49例，女性33例；年龄范围15～78岁，均值(42.69±8.98)岁。初诊WBC中位数27.98×109/L，范围2.0～221.65(109/L)；初诊Hb中位数74g/L，范围(24～92)g/L。

1.2方法 由两名资深骨髓细胞形态学专家对本研究中82例白血病患者的骨髓涂片标本重新进行阅片。在诊断出现分歧情况下，则要邀请第三位骨髓细胞形态学专家对其进行阅诊，将患者的临床表现、血液学专家意见、相关实验室检查结果、预后相结合，最终做出诊断[4]。

采集骨髓标本2～3mL于抗凝管，置于15～25℃保存，制备样本待测，所有样本在获取6h内处理。检查方法：1)骨髓细胞形态学检查常规使用瑞氏过氧化物酶(POx)染色，光学显微镜下对血细胞进行细胞形态学分型诊断。2)细胞免疫学检查取抗凝骨髓液2而，常规分离单个骨髓核细胞，采用荧光显微镜间接免疫荧光法测定，单克隆抗体购自美国贝克曼公司和BD公司，流式细胞仪由BD公司生产，严格按说明书操作。判断标准:淋系抗阳性细胞>30%，髓系及干组系抗原>20%，非系列特异性抗原及其干组抗原>20%为阳性，分型判断标准根据国际白血病欧洲协作组(EGI)L标准。3)单一细胞遗传学——染色体检查。选择肝素抗凝骨髓液，直接法以及24h 培养法来制备染色体标本，然后再用反带技术显带，按照1995 年制定的《人类细胞遗传学国标命名体制》(ISCN))核型描述。

1.3观察指标 统计单一形态学、单一免疫学分型、单一细胞遗传学、三者联合诊断的诊断诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。其中，A真阳性，B假阳性，C假阴性，D真阴性。灵敏度=A/(A+C)；特异度=D/(B+D)；阳性预测值=A/(A+B)×100%，阴性预测值=D/(C+D)×100%；3个指标联合诊断过程中，在进行结果评估的时候，至少两个指标结果为阳性，才能判断为阳性[5-6]。诊断符合率=(真阳性+真阴性)/总例数×100%。

2 结果

2.1不同检查的诊断结果

2.1.1 形态学分型

经过病理学检查，APL阳性、阴性分别为71例、11例。通过形态学分型而诊断阳性为69例，阴性为13例。诊断符合率=(真阳性+真阴性)/总例数×100%=69/82×100%=84.15%。69正确诊断，63例正确诊断为APL，5例正确诊断为非APL。63例中，其中诊断为M3a者30例，M3b者28例，M3v者5例。

2.1.2 免疫学分型

免疫学分型检查诊断为阳性为68例，阴性为14例。诊断符合率=(真阳性+真阴性)/总例数×100%=68/82×100%=82.83%。68例正确诊断，60例正确诊断为APL，8例正确诊断为非APL。其中，60例中，58例患者表现为CD33+和CD13+阳性共表达，共表达率达96.67%；而CD33+或CD13+单阳性表达者仅各为1例。

2.1.3 遗传学检查

遗传学检查诊断为阳性为68例，阴性为14例。诊断符合率=(真阳性+真阴性)/总例数×100%=67/82×100%=81.71%。67例正确诊断，60例正确诊断为APL，7例正确诊断为非APL。遗传学检查诊断为阳性为68例，有60例出现APL特征性染色体核型异常，占88.24%，其中55例染色体核型为t(15；17)(q22；q21)100%易位(单纯型)；5例中除见到t(15；17)染色体核型改变外，还伴有其它核型异常(复杂型)，受累染色体包括1，9，11，12和21号。

2.2对比不同检查诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值 三者联合诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于单独检查的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值，对比差异具有统计学意义(P<0.05)。其中，单一形态学检查灵敏度为88.73%，特异度为45.45%，阳性预测值为91.30%，阴性预测值为38.46%，骨髓细胞形态学检验联合免疫分型及细胞遗传学联合诊断的灵敏度为98.55%，特异度为84.62%，阳性预测值为97.14%，阴性预测值为91.67%，详见表1。

表1 统计不同检查的诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值

3 讨论

血液疾病病因比较复杂，目前可能病因包括以下几方面：一是化学因素，包括接受烷化剂治疗、苯及含苯的有机溶剂[7]；二是物理因素[8]，包括γ射线及X射线。血液疾病中，最为常见的是白血病[9]。与其他类型白血病对比，APL主要是由于烷化剂治疗、含苯有机溶剂等化学因素所引起的；在遗传因素方面，同卵双胎中，倘若其中一个诊断白血病，则另外一个白血病发生率高达20%，明显高于双卵孪生者[10]。

对于血液疾病，现阶段实验室检测为其确诊方法及疗效观察的最重要手段，其方法多种多样，包括细胞遗传学、分子生物学、免疫学以及形态学等检查，其中诊断血液病的基础为形态学检查。对血液病进行诊断的第一道程序为血常规检查，这也是分析、诊断血液病的起点[11]。临床上通常会通过血常规检查来对血液疾病进行初筛诊断，可以将其粗分为外周血涂片和血常规两种方式。而骨髓穿刺涂片作细胞形态学检验联合血涂片检验是确诊血液系统疾病的最主要手段。

免疫学分型也就是流式细胞术(FCM)。FCM是将单克隆抗体、流体力学、免疫荧光、计算机等技术相结合，在单细胞水平上测量细胞形态、大小和荧光等特征，其检测快速、简便，特异性好、敏感度高，能对大量细胞进行定量分析，使用的单克隆抗体容易购买，价格相对便宜，便于临床推广[12]。但在FCM分析时特别注意：细胞的分化成熟、细胞内部结构及其分化抗原的逐渐增减是渐进过程、非突变，故同时获知一个细胞的多种参数方能正确判断细胞属性。细胞免疫学分型可供的标本种类有骨髓、外周血、脑脊液及其他体液，既克服了形态学分型方法的繁琐、个人直观等缺点，又具有简单、快速，计数细胞量大且灵敏度高及准确度高等优点，对血液疾病的诊断及分型起到极大的作用[13]。

很多血液系统疾病特别是白血病都会发生基因或染色体结构的改变，其中很多还是特征性的改变。细胞遗传学检查在血液系统疾病的诊断、治疗中发挥着举足轻重的作用，尤其针对骨髓形态学检查不典型的血液病，通过对疾病特征性染色体变化的高检出率，大大提高了疾病的诊断率。

本次研究中，三者联合诊断灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于单一形态学、单一免疫分型、单一细胞遗传学，对比具有统计学差异(P<0.05)。其中，单一形态学检查灵敏度为88.73%，特异度为45.45%，阳性预测值为91.30%，阴性预测值为38.46%，骨髓细胞形态学检验联合免疫分型及细胞遗传学联合诊断的灵敏度为98.55%，特异度为84.62%，阳性预测值为97.14%，阴性预测值为91.67%。

综上所述，临床上血液疾病的诊断治疗应以细胞形态学为基础，再结合免疫学分析、细胞遗传学、骨髓活检等联合检测，可以提高诊断准确率及疗效观察。骨髓细胞形态学检验联合免疫分型及细胞遗传学在血液病中，具有较高的诊断效能，值得推广。