氨茶碱片含量测定的不确定度评定

北京市朝阳区食品药品安全监控中心（100124）韩锋 钱钰娟 刘开玉

氨茶碱为茶碱与乙二胺复盐，其药理作用主要来自茶碱，乙二胺使其水溶性增强。本品对呼吸道平滑肌有直接松弛作用。能够增强膈肌收缩力，改善呼吸功能。适用于支气管哮喘、喘息型支气管炎、阻塞性肺气肿等缓解喘息症状；也可用于心源性肺水肿引起的哮喘。茶碱的毒性与常出现在血清浓度为15～20μg/ml，特别是在治疗开始，早期多见的有恶心、呕吐、易激动、失眠等，当血清浓度超过20μg/ml，可出现心动过速、心律失常，血清中茶碱超过40μg/ml，可发生发热、失水、惊厥等症状，严重的甚至呼吸、心跳停止致死[1]。因此在日常监督中，氨茶碱片的含量应在药典标准规定的区间范围内，以保证用药安全。

测量不确定度，简称不确定度，是根据所用到的信息，表征赋予被测量值分散性的非负参数[2]。不确定度可以度量某个结果与其他结果相吻合的程度，从而度量结果的可信度，以此证明结果的适宜性和质量[3]。本文参考国家计量技术规定JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》，并查看相关材料及文献，对氨茶碱片含量测定（无水茶碱和乙二胺）进行不确定度的分析与评定，提高被测量结果的准确性和可信性。

1 材料与方法

1.1 无水茶碱含量测定

1.1.1 仪器与试剂 TU-1901型紫外分光光度计（普析通用公司）；Mettler-XP105DR型电子天平 (瑞士梅特勒-托利多公司，d=0.01mg/0.1mg)；0.01mol·L-1氢氧化钠（分析纯）溶液；水为纯化水。200ml容量瓶，250ml容量瓶及5ml单标移液管(均为A级)。氨茶碱片[规格：0.1g，批号：1704163，山东新华制药股份有限公司]；实验温度：27℃，实验用移液管及容量瓶校正温度：20℃。

1.1.2 样品的处理及测定[4]取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氨茶碱100mg），置200ml容量瓶中，加0.1mol·L-1氢氧化钠溶液20ml与水60ml，振摇10分钟使氨茶碱溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置250ml容量瓶中，加0.01mol·L-1氢氧化钠溶液至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在275nm的波长处测定吸光度，按C7H8N4O2的吸收系数为650计算，即得。

1.2 乙二胺含量测定

1.2.1 仪器与试剂 Mettler-XP105DR型电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司，d=0.01mg/0.1mg)；0.1mol·L-1盐酸滴定液（国家化学试剂质检中心，标定浓度：0.1001mol·L-1）；水为纯化水。25ml滴定管(A级)。氨茶碱片[规格：0.1g，批号：1704163，山东新华制药股份有限公司]；实验温度：26℃，实验用滴定管校正温度：20℃。

1.2.2 样品的处理及测定[4]取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于氨茶碱0.5g），加水50ml，微温使溶解，放冷，加茜素磺酸钠指示液8滴，用盐酸滴定液（0.1mol·L-1）滴定至溶液显黄色。每1ml盐酸滴定液（0.1mol·L-1）相当于3.005mg的C2H8N2。

2 数学模型

2.1 无水茶碱含量测定

式中：A275nm：275nm处的吸光度；m：样品称样量；：吸收系数；m20：20片片重；：稀释倍数；标示量：0.1g。

2.2 乙二胺含量测定

式中：V：消耗盐酸滴定液的体积；T：滴定度；C：盐酸滴定液的浓度；m：样品称样量；m20：20片片重；标示量：0.1g。

3 不确定度的来源和评定

实际实验中采用平行测定法，由于两次测量值接近，故选取第一组测量值计算不确定度。

3.1 无水茶碱含量测定的不确定度

3.1.1 实验数据 本品规格：0.1g；20片片重：m20=2.0409g；样品取样量：m1=0.1043g，m2=0.1028g；吸光度：A275nm(1)=0.529，A275nm(2)=0.523；计算得含无水茶碱为氨茶碱标示量：F1=79.62%，F2=79.87%，F=79.7%。

3.1.2 样品称量（m）引入的不确定度 电子天平校正产生的不确定度，按检定证书提供：最大允许误差为±0.5mg，采用均匀分布将误差转化为标准不确定度：

3.1.2.1 精密称定20片片重引入的不确定度 采用减重法称量，需使用两次：

3.1.2.2 精密称取样品适量（约相当于氨茶碱100mg）引入的不确定度 采用减重法称量，需使用两次：。

3.1.3 玻璃容量器以及温度变化引入的不确定度

3.1.3.1 溶解氨茶碱所用的200ml容量瓶引入的不确定度 使用200mlA级容量瓶，检定证书提供的最大允差：±0.15ml；按三角分布转化为标准不确定度

3.1.3.2 温度变化引入的不确定度 由于液体的体积膨胀明显大于容量瓶的体积膨胀，因此只需考虑前者。实验温度27℃，玻璃容量器校准温度20℃，水的体积膨胀系数为2.1×10-4℃-1；产生的体积变化为±（200×7×2.1×10-4）=±0.294ml。

3.1.3.3 精密量取续滤液5ml所用的5ml单标线吸管引入的不确定度 使用5mlA级单标线吸管，检定证书提供的最大允差：±0.015ml；按三角分布转化为标准不确定度0.015/=0.0061ml。

3.1.3.4 温度变化引入的不确定度 产生的体积变化为±（5×7×2.1×10-4）=±0.0074ml；按均匀分布转化为标准不确定度。

3.1.3.5 定容氨茶碱所用的250ml容量瓶引入的不确定度 使用250mlA级容量瓶，检定证书提供的最大允差：±0.15ml；按三角分布转化为标准不确定度。

3.1.3.6 温度变化引入的不确定度 产生的体积变化为±（250×7×2.1×10-4）=±0.3675ml；按均匀分布转化为标准不确定度。

3.1.4 紫外分光光度计引入的不确定度 检定证书给出的定量测量重现性为0.3%，按均匀分布，。

3.1.5 重复性测定引入的不确定度 采用极差法评定，即F1=79.62%，F2=79.87%，极差系数C＝1.13，n=2；。

3.1.8 扩展不确定度 取包含因子k=2，U=kUC(F)=2×0.46%=0.92%。

本次氨茶碱片中无水茶碱含量测定结果为氨茶碱标示量的(79.7±1.0)%，k=2。

3.2 乙二胺含量测定的不确定度

3.2.1 实验数据：本品规格：0.1g；20片片重：m20=2.0409g；样品取样量：m1=0.5107g，m2=0.5103g；滴定结果：V1=22.60ml，V2=22.55ml。

计算得含乙二胺为氨茶碱标示量：F1=13.584%，F2=13.564%，F=13.57%。

3.2.2 样品称量（m）引入的不确定度 电子天平校正产生的不确定度，按检定证书提供：最大允许误差为±0.5mg，采用均匀分布将误差转化为标准不确定度：。

3.2.2.1 精密称定20片片重引入的不确定度 采用减重法称量，需使用两次：。

3.2.2.2 精密称取样品适量（约相当于氨茶碱0.5g）引入的不确定度 采用减重法称量，需使用两次：。

3.2.3 盐酸滴定液滴定体积引入的不确定度

3.2.3.1 25ml酸式滴定管引入的不确定度使用25ml A级酸式滴定管，检定证书提供的最大允差：±0.04ml。

按三角分布转化为标准不确定度0.04/=0.016ml。

3.2.3.2 温度变化引入的不确定度 由于液体的体积膨胀明显大于容量瓶的体积膨胀，因此只需考虑前者。

实验温度26℃，玻璃容量器校准温度20℃，水的体积膨胀系数为2.1×10-4℃-1，产生的体积变化为±（22.60×6×2.1×10-4）=±0.0285ml。

按均匀分布转化为标准不确定度0.0285/=0.016ml；。

3.2.4 盐酸滴定液（C）引入的不确定度 盐酸滴定液（0.1mol/L），购自国家化学试剂质检中心，标定浓度为0.1001mol·L-1，扩展不确定度0.2%，计算相对标准不确定度：。

3.2.5 重复性测定引入的不确定度 采用极差法评定，即F1=13.584%，F2=13.564%，极差系数C＝1.13，n=2。。

3.2.6 滴定度（T）引入的不确定度 滴定度由药典直接给出，未给出不确定度，忽略不计。

3.2.8 扩展不确定度 取包含因子k=2，U=kUC(F)=2×0.026%=0.052%。本次氨茶碱片中乙二胺含量测定结果为氨茶碱标示量的(13.57±0.06)%，k=2。

4 讨论

在药物质量分析中运用不确定度测量有助于分析各种不确定来源对试验结果的影响，对药物分析结果具有重要意义，同时可以帮助实验室控制数据质量，提高工作水平，分析关键因素，有针对性地进行有效的质量保证和控制措施，以确保过程稳定并受控。本文通过分析及计算氨茶碱片含量测定方法中，各个不确定度的来源及数值，可以看出，对实验结果影响较大的因素包括称量、稀释、仪器及重复性等。在实验中，应尽量避免过小的称样量；应尽量减少稀释步骤，并尽量选择较大体积的容量器；实验室所用仪器应按时检定及校准，以确保仪器灵敏度符合测量精度要求；应尽量增加实验次数，减小重复性引入的不确定度，提高结果质量。