丹参酮抗紫外线损伤的保护作用的研究

林莺

（四川省科学城医院 药剂科，四川 绵阳）

0 引言

丹参为唇形科植物丹参（Salviamiltiorrhiza Bge）的干燥根及根茎，具有活血祛瘀、通经止痛、凉血消痈、清心除烦的作用。丹参中有效成分主要是丹参酮，然而对丹参酮的研究目前只局限于其扩张血管、活血、抗炎等方面，我们曾在一些文献中看到过有关体外实验证实丹参酮具有一定的体外抗氧化作用[1]，以及丹参配伍人参有抗氧化作用，但是其单独使用在体内的抗氧化活性怎样亦或使用时抗氧化作用是其本身所致还是激发细胞使机体产生有抗氧化活性物质不得而知，紫外线会使机体产生氧自由基，而过量的氧自由基会伤害机体[2]。本研究是针对丹参酮对体内肝脏谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）活力及NO 含量的影响，从而探索其清除氧自由基的程度，以期为临床开发有效且副作用少的抗紫外线药物提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

SPF 级BALB/c 小鼠（成都达硕实验动物有限公司）30只，年龄12～16 周，体质量（20±2）g，随机分为Ⅰ组为正常对照组（生理盐水对照组）、Ⅱ组为模型对照组、Ⅲ组为维生素C（5 mg/mL）组，Ⅳ～Ⅵ组为3 个剂量丹参酮组（2.5、5、10 mg/mL），每组5 只。

1.2 主要试剂与仪器

98%丹参酮ⅡA 提取物（西安开来生物工程有限公司，批号：K176845）；VC（分析纯）（批号：2017041301，成都麦卡希化工有限公司）；薇婷脱毛膏；谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）试剂盒；一氧化氮（NO）试剂盒等。

仪器：紫外分光光度计、低温离心机、0.22 μm 孔径滤器、紫外灯等。

1.3 实验方法

取小鼠肝脏0.5 g 用生理盐水洗净、滤纸拭干，再用量筒取相当于肝脏9 倍的生理盐水与肝脏制成组织匀浆，再离心取上清液进行各种测定。

1.3.1 肝脏谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）活力的测定

按照谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）试剂盒的要求进行操作：①酶促反应（试剂：应用液提前在37 ℃预温）：取肝脏匀浆的上清液0.2 mL 加入GSH-PX 试剂盒中试剂混匀反应后离心10 min 取上清液1 mL 作显色反应；②显色反应：酶促反应后1 mL 的上清液加入试剂混匀反应，在室温静置15 min 后，在波长412 nm，1 cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值；③计算各组小鼠肝脏中GSH-PX 的活力。

1.3.2 肝脏中NO 浓度的测定（硝酸还原酶法）

按照NO 试剂盒要求进行操作：取肝脏匀浆的上清液0.5 mL 加入试剂盒中试剂混匀反应后，在室温静置10 min后，在波长550 nm，0.5 cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

2 结果

2.1 丹参酮对紫外线照射小鼠肝脏谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）的影响

结果显示由于紫外线的照射（模型组）使小鼠肝脏中GSH-PX 的活力比不照射紫外线（对照组）的小鼠显著降低，而服用了丹参酮的小鼠在紫外线照射后肝脏中的GSH-PX有明显增加且随着丹参酮的浓度的增加而增加，见表1。

2.2 丹参酮对紫外线照射小鼠肝脏中一氧化氮（NO）浓度的影响

结果显示由于紫外线的照射（模型组）使小鼠肝脏中NO的浓度比不照射紫外线（对照组）的小鼠显著降低，而服用了丹参酮的小鼠在紫外线照射后肝脏中的NO 浓度有明显增加且高浓度优于低浓度，见表2。

表1 丹参酮对各组紫外线照射小鼠肝脏GSH-PX 的影响（±s）

表1 丹参酮对各组紫外线照射小鼠肝脏GSH-PX 的影响（±s）

注：与生理盐水组对照：*P＜0.05，有显著差异，与模型组对照：**P＜0.05，有显著差异。

组别 GSH-PX生理盐水（NS）组 41.40±4.31模型对照组 11.12±4.28*维生素C（5 mg/mL）组 29.81±5.43丹参酮（2.5 mg/mL）组 23.55±7.11**丹参酮（5 mg/mL）组 32.34±3.87**丹参酮（10 mg/mL）组 39.63±2.81**

表2 丹参酮对各组紫外线照射小鼠肝脏中NO 的影响（±s）

表2 丹参酮对各组紫外线照射小鼠肝脏中NO 的影响（±s）

注：与生理盐水组对照：*P＜0.05，有显著差异，与模型组对照：**P＜0.05，有显著差异。

组别 NO生理盐水（NS）组 8.49±1.93模型对照组 3.90±0.50*维生素C（5 mg/mL）组 5.50±0.82丹参酮（2.5 mg/mL）组 5.12±1.08**丹参酮（5 mg/mL）组 6.21±0.90**丹参酮（10 mg/mL）组 7.29±1.13**

3 讨论

紫外线对生物体有伤害，其原因是紫外线会使机体产生氧自由基，氧自由基攻击细胞膜、线粒体膜中的不饱和脂肪酸造成脂质过氧化物增强，这些物质又可分解为更多的自由基，引起自由基的连锁反应，这样膜结构的完整性受到破坏[3]，引起机体的一系列反应：①削弱细胞的抵抗力，使身体易受细菌和病菌感染；②产生破坏细胞的化学物质，形成致癌物质；③阻碍细胞的正常发展，干扰其复原功能，使细胞更新率低于枯萎率；④破坏体内的遗传基因（DNA）组织，扰乱细胞的运作及再生功能，造成基因突变，演变成癌症；⑤破坏细胞内的线粒体，造成氧化性疲劳；⑥破坏细胞膜，干扰细胞的新陈代谢，使细胞膜丧失保护细胞的功能；⑦破坏蛋白质，破坏体内的酶，导致炎症和衰老；⑧破坏脂肪，使脂质过氧化，导致动脉粥样硬化，发生心脑血管疾病等[4]。所以为了抗辐射，达到保护特殊岗位工作人员的目的，则必须要重视氧自由基的清除[5-7]。所以，来寻找一些具有抗氧化活性的天然产物是很有必要的[8]。

本研究结果表明，丹参中丹参酮能够提高小鼠肝脏中谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）活力及一氧化氮（NO）的含量，甘肽过氧化酶（GSH-PX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶，它能催化GSH 变为GSSG，使有毒的过氧化物还原成无毒的羟基化合物从而保护细胞膜的结构及功能不收过氧化物的干扰和损害，达到保护机体的作用。此研究还显示丹参酮抗氧化活性有剂量效应即丹参酮抗氧化活性随着其浓度的增加而增加。有文献[9-10]报道丹参酮在体外利用AP-TEMED 产生O2-自由基，无酶体系存在，依靠药物成分抑制自由基的产生或促进自由基的清除，这说明丹参酮在体内外均有抗氧化活性（直接化学反应和通过激活酶促反应达到清除氧自由基目的）。故可将其用于抗紫外线损伤的治疗。