不同水平的苜蓿皂苷对肉鸡生长性能、肠道微生物菌群结构及免疫功能影响

杜 敏

（青海畜牧兽医职业技术学院，青海西宁 812100）

近几年，随着我国畜牧业经济的发展，肉用动物养殖数量呈现逐年升高，尤其是肉鸡的养殖，成为畜牧业主要的组成结构之一，但在肉鸡的养殖过程中不合理的使用抗生素，导致肉鸡肠道内微生物菌群失衡及免疫功能降低，同时造成鸡肉中的药物残留，成为人们生活中食品公共卫生问题（胡斌，2019；付丽，2015）。苜蓿是我国重要的优质牧草之一，苜蓿中富含皂苷、类黄酮、叶蛋白、多糖和膳食纤维等多种生物活性成分，且营养丰富、消化率高，被称为 “牧草之王”（孙娟娟，2019；李刚，2019）。苜蓿皂苷是苜蓿中重要的活性物质之一，该物质具调节脂类代谢、降低胆固醇、抗癌、抗氧化和提高机体免疫力等多种作用及功能 （陈培英，2015）。许多研究表明，苜蓿皂苷具有提高免疫力、抗氧化及促进生长作用，被广泛应用于畜禽养殖业中（陈燕绘，2014）。本试验在21日龄的白羽肉鸡基础日粮中添加不同水平的苜蓿皂苷提取物，研究其对白羽肉鸡生长性能、肠道微生物菌群结构及免疫功能影响，为进一步苜蓿皂苷提取物在临床中推广应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 苜蓿皂苷（纯度≥65%）购自宁夏凯源生物技术有限公司；大肠杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌鉴别培养基均购自北京陆桥技术股份有限公司；禽流感H9抗原、新城疫抗原、AI、ND阳性血清均购自中国药品食品监察所。

1.2 基础日粮配比 参照NRC（2008）肉鸡饲养标准配制基础日粮，采用玉米-豆粕型基础日粮饲喂，其日粮组成及营养水平见表1。

1.3 试验设计与管理 采用单因素设计试验，试验选择体重相近的21日龄白羽肉鸡360只随机分成4组，每组3个重复，每个重复30只，1组为空白对照组饲喂基础日粮，试验2、3、4组在基础日粮中分别添加0.5%、1.0%、1.5%的苜蓿皂苷，试验期为21 d。每个重复组单独饲养，自由采食和饮水。按常规的饲养管理方式进行饲养与管理、疫苗免疫及环境消毒。

表1 日粮组成与营养水平

1.4 指标测定及方法

1.4.1 生长性能 记录每个重复组在试验开始与结束的体重及试验期间的采食料量和耗料量，测定生长性能指标平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。

1.4.2 肠道微生物菌群 参照王显峰 （2019）报道方法，试验结束前5 d，每个重复组采集新鲜粪便大约50 g，用鉴别培养基检测粪便中乳酸杆菌、双歧杆菌和大肠杆菌的数量，其中大肠杆菌在37℃下恒温需氧培养12～24 h后计数，乳酸杆菌和双歧杆菌37℃培养箱厌氧培养24～48 h后计数，记录每克粪便中菌群总数，用对数（lg cfu/g）表示。

1.4.3 免疫指标 试验结束，每个组随机抽取10只试验肉鸡翅下静脉采血，37℃孵育30 min，离心分离血清，-20℃保存。参照仇薪鑫（2019）报道方法，用血凝抑制试验测定其试验肉鸡新城疫、禽流感抗体效价水平。

1.5 数据分析 试验结果以“平均值±标准差”表示，试验数据采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析，采用Duncan’s法进行差异显著性分析，以P＜0.05表示差异显著性。

2 结果与分析

2.1 苜蓿皂苷对肉鸡生长性能的影响 由表2可知，在试验期间，试验2、3、4组的ADFI均高于1组，差异性不显著 （P＞0.05）；试验3、4组的ADG较1组相比分别提高9.9%、14.2%，差异性显著 （P＜0.05），试验2组高于1组，差异性不显著（P＞ 0.05），试验 2、3、4 组之间相比，差异性不显著 （P＞0.05）；试验3、4组的F/G较 1组相比分别降低17.1%、18.5%，差异性显著 （P＜0.05），试验2组低于1组，差异性不显著（P＞0.05），试验 2、3、4 组之间相比，差异性不显著（P＞ 0.05）。

表2 苜蓿皂苷对肉鸡生长性能测定结果

2.2 苜蓿皂苷对肉鸡肠道微生物菌群结构的影响由表3可知，试验期间，试验3、4组粪便中大肠杆菌的含量较1组相比分别降低21.6%、22.5%，差异性显著 （P＜0.05），试验2组低于1组，差异性不显著（P＞ 0.05），试验 2、3、4 组之间相比，差异性不显著（P＞ 0.05）；试验 3、4组粪便中乳酸杆菌、双歧杆菌的含量较1组相比分别提高28.5%、38.1%、25.1%、25.4%，差异性显著 （P＜ 0.05），试验 2组高于 1 组，差异性不显著（P＞ 0.05），试验 2、3、4 组之间相比，差异性不显著（P＞0.05）。

表3 苜蓿皂苷对肉鸡肠道微生物结构测定结果lg cfu/g

2.3 苜蓿皂苷对肉鸡免疫指标的影响 由表4可知，试验3、4组试验肉鸡血清中AI、ND抗体效价水平较1组相比分别提高25.7%、26.8%、30.1%、31.1%，差异性显著 （P＜ 0.05），试验 2组高于 1 组，差异性不显著（P＜ 0.05），试验 2、3、4组之间相比，差异性不显著（P＞0.05）。

表4 苜蓿皂苷对肉鸡免疫指标检测结果log2

3 讨论

苜蓿皂苷是由苜蓿中提取的生物活性物质，该物质具调节脂类代谢、提高机体免疫力、促进生长等多种作用及功能，被广泛应用（陈培英，2014）。本试验研究表明，试验2、3、4组的ADFI均高于1组（P＞0.05），试验3、4组的ADG较1组相比分别提高9.9%、14.2%（P＜0.05），试验3、4组的 F/G较 1组相比分别降低 17.1%、18.5%（P＜0.05），说明不同水平的苜蓿皂苷添加，可以有效提高白羽肉鸡的平均日增重、降低料肉比。苜蓿皂苷为生物活性物质，可以调节白羽肉鸡肠道消化酶合成与分泌，促进白羽肉鸡对饲料中营养物质消化与吸收，提高其饲料中营养物质在体内的利用率，因而提高平均日增重、降低料肉比，进而提高其生长性能。

相关研究表明，动物肠道菌群主要包含多种致病菌和非致病菌群，大肠杆菌是存在动物肠道中的正常菌群，当外界条件改变时，肠道中大肠杆菌可以转化为致病菌，破坏肠道菌群平衡，引起动物的腹泻、败血症等，严重者可导致死亡，因此肠道中菌群结构的平衡，对动物健康具有重要意义（王显峰，2019）。本试验研究表明，试验3、4组粪便中乳酸杆菌、双歧杆菌的含量较 1组相比分别提高 28.5%、38.1%、25.1%、25.4% （P＜0.05），试验3、4组粪便中大肠杆菌的含量较1组相比分别降低21.6%、22.5% （P＜0.05），说明不同水平的苜蓿皂苷添加，可以降低肉鸡肠道内大肠杆菌等有害微生物生长，提高乳酸菌和双歧杆菌等益生菌的生长，改善肠道菌群结构平衡，维持白羽肉鸡肠道健康。苜蓿皂苷调节肠道菌群平衡的机理尚未明确，有待进一步研究。

禽流感（AI）、新城疫（ND）等病毒性疾病是危害养鸡业主要传染性疾病之一，AI、ND可以感染不同日龄的鸡，其感染率和死亡率均较高，可造成巨大的经济损失，本病目前无有效的药物可以预防，主要通过疫苗进行预防，AI、ND抗体水平的变化是反映机体体液免疫的状态指标之一（仇薪鑫，2019；蔡艳，2018）。 本试验结果显示，试验3、4组试验肉鸡血清中AI、ND抗体效价水平较1组相比分别提高 25.7%、26.8%、30.1%、31.1%（P＜0.05）。说明不同水平的苜蓿皂苷添加可以提高肉鸡血清中AI、ND抗体效价水平，能有效的降低禽流感（AI）、新城疫病的发生。可能由于苜蓿皂苷添加可以激活肉鸡体内的免疫系统，促进体内的抗体分泌，提高禽流感（AI）、新城疫（ND）抗体水平，因而提高其机体的免疫机能。

4 结论

日粮中添加不同水平的苜蓿皂苷可以提高白羽肉鸡的生长性能和免疫机能、改善其肠道菌群结构，本试验条件下，以添加1.5%为适宜。