RP－HPLC法同时测定冠心丹参胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

罗 镭，唐登峰，祝 明

（浙江省食品药品检验所，浙江 杭州310004）

冠心丹参胶囊是中医临床上常用于活血化瘀、理气止痛的方药，由丹参、三七和降香油三味药材组成，收载于中国药典2010年版一部，用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷刺痛、心悸气短；冠心病心绞痛见上述证候者［1］。2010版药典制定了丹参中丹参酮IIA 的含量测定控制指标，而对方中三七药材无含量测定控制指标。三七丹参均为该方的主要药味，并且近年来随着三七价格的不断上涨，冠心丹参胶囊生产过程中在三七投料方面存在减少投药量和三七药材以次充好的现象，故有必要对冠心丹参胶囊中三七的3个总皂苷的含量制定含量测定控制指标［2－3］。本文建立了RP－HPLC法同时测定冠心丹参胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200 系 列 高 效 液 相 色 谱 仪（G1322A 脱 气 机，G1311A 四元泵，G1313A 自动进样仪，G1316A 柱温箱，Chemstation色谱工作站）。

1.2 试药

三七皂苷R1对照品（批号：110745－200517）、人参皂苷Rg1对照品（批号：110703－200424）和人参皂苷Rb1对照品（批号：110704－200420），对照品由中国药品生物制品检定所提供，为含量测定用。乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂为分析纯。冠心丹参胶囊样品3 批，批号：090603、090607、090609，由国药控股深圳中药有限公司提供，批号090603的样品作为方法学考察的样品。

2 方法与结果

2.1 试液制备

2.1.1 混合对照品溶液

分别取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品和人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL 分别含三七皂苷R1 0.0655mg、人参皂苷Rg1 0.198mg和人参皂苷Rb1 0.1802mg的混合对照品溶液，摇匀，即得。

2.1.2 供试品溶液

取装量差异项下的本品内容物，混匀，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，称定重量，放置过夜，置水浴中加热回流2h，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱Kromasil－C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相乙腈（A）－水（B），梯度洗脱（0～12min 19% A；12～35min 19%A→25%A；35～60min 25%A→40%A）；流速：1.0 mL·min－1；柱温：23℃；检测波长为203nm；进样量：10μL。在此色谱条件下，样品中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1与其他杂质峰可达到较好分离，缺味无干扰。结果见图1。

图1 缺味、对照品及样品的色谱

2.3 方法学验证

2.3.1 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液（三七皂苷R1 0.065 5mg／mL，人 参 皂 苷 Rg1 0.1980mg／mL、人 参 皂 苷 Rb1 0.180 2mg／mL的混合溶液）1、3、5、10μL；（三七皂苷R1 0.109 2mg／mL，人参皂苷Rg1 0.330 0mg／mL、人参皂苷Rb1 0.300 3mg／mL的混合溶液）10μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的峰面积，以峰面积（Y）对进样量（X）进行线性回归，线性方程分别为：三七皂苷R1：Y＝278.81X＋2.656 7，r＝0.999 8；人 参 皂 苷Rg1：Y ＝281.83X ＋8.666 1，r＝0.999 8；人 参 皂 苷Rb1：Y ＝218.09X＋4.641 3，r＝0.999 9。结果表明：三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1 进 样量分别在0.065 5～1.092μg／mL、0.198 0～3.299 7μg／mL、0.180 2～3.003 2μg／mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3.2 精密度试验

取混合对照品溶液（三七皂苷R1 0.0655mg／mL，人参皂苷Rg1 0.1980mg／mL、人参皂苷Rb1 0.1802mg／mL 的混合溶液），按上述色谱条件，重复进样6次，测定峰面积，结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1峰面积的RSD分别为1.1%，0.9%，1.1%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 重复性试验

取同一批供试品（批号：090603）制备6份供试品溶液，按“2.1～2.2”项下方法测定，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的平均值（n＝6）分别为3.44，19.87，17.39mg／g，RSD分别为0.1%，0.2%，0.2%，结果表明该方法重复性良好。

2.3.4 稳定性试验

取供试品溶液，室温下放置，分别于0，1.5，4，7，13，23h进样测定，记录色谱峰面积。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1色谱峰面积的RSD 分别为0.5%、0.8% 、0.2%，表明供试品溶液在23h内稳定。

2.3.5 回收率实验

取已知含量的样品（批号：090603，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量分别为3.44、19.87、17.39mg·g－1）6份，每份取约0.12g精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入0.4094mg·mL－1三七皂苷R1 1mL，1.2828mg·mL－1三七皂苷Rg1 3mL ，1.1262mg·mL－1三七皂苷Rb1 2mL，按“2.1～2.2”项下方法测定，计算回收率。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1 的平均回收率（n＝6）分别为98.8%、100.3%、100.4%；RSD 分 别 为0.9% 、3.1% 、0.5%。

2.4 样品测定

取各批次冠心丹参胶囊样品0.5g，精密测定，按“2.1～2.2”项下方法测定，以外标法计算含量，结果见表1。

表1 冠心丹参胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量测定结果 （mg／粒）

3 讨论

3.1 提取条件的选择

分别考察了加热回流、超声提取法对3种成分的提取效率，结果表明回流提取法提取效率更高；提取溶剂考察了甲醇、70%甲醇、乙醇、70%乙醇，结果表明70%甲醇对3种成分提取效率较高；同时对70%甲醇用量25、50、100倍量进行考察，结果表明50倍量即可提取完全；对回流提取1h、2h、3h进行考察，结果表明回流提取2h即可提取完全。

3.2 柱温的考察

三七中人参皂苷Rg1与其附近的人参皂苷Re色谱峰分离比较困难，通过降低柱温，可使分离度达到1.5以上，故在分离人参皂苷Rg1和人参皂苷Re时，可适当降低柱温，选择23℃为宜。

4 结论

本法操作简便，测定结果正确，重复性好，可用于冠心丹参胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测定。

［1］ 中国药典委员会.中国药典［S］.一部.2010：433.

［2］ WAN XIAOQING，XIA BOHOU.Determination of saponnins in different processed products of Panax Notoginseng［J］.CJTCMP，2011，26（4）：841－843.

［3］ QIU MINGMING.HPLC－ELSD determination of notoginsenoside Rl，ginsenoside Rgl and ginsenoside Rb1in Sanqi Xueshangning Capsules［J］.Chin J Pharm Anal，2010，30（4）：629－631.