血清LncRNA MIAT、MMP-2、MMP-9在胃癌诊断及预后评估中的价值

吴 波，刘伶俐△，聂丹文

(1.湖北省随州市中医医院检验科，湖北随州 441300；2.湖北省随州市疾病预防控制中心检验科， 湖北随州 441300)

胃癌是对全球公共卫生造成巨大负担的恶性肿瘤之一。据报道，2018年全球新发胃癌病例约为1 033 701例，死亡病例约为782 685例[1]。有研究发现，长链非编码RNA心肌梗死转录本 (LncRNA MIAT) 在多种消化系统肿瘤，如结直肠癌、肝癌等的发生、发展过程中具有重要作用[2-3]。基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9均属于蛋白水解酶，在肿瘤侵袭、转移中发挥着重要作用[4-5]。目前，关于LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9在胃癌中的研究较少，故本研究通过探讨LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9水平在胃癌诊断和预后评估中的应用价值，旨在为临床工作提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2014年4月至2016年9月于随州市中医医院确诊的胃癌患者120例为胃癌组，其中男85例，女35例；年龄42～76岁，平均(54.2±8.4)岁；有吸烟史者73例；有饮酒史者94例；体质量指数(BMI)为(25.3±2.1)kg/m2；TNM[6]分期：Ⅰ～Ⅱ期74例，Ⅲ～Ⅳ期46例；肿瘤部位：胃窦部71例，胃体部37例，胃底部12例；组织学类型：管状腺癌41例，乳头状腺癌36例，黏液腺癌27例，印戒细胞癌16例。选取同期住院治疗的130例胃良性疾病患者为良性病变组，其中男92例，女性38例；年龄40～77岁，平均(55.2±9.1)岁；有吸烟史者69例；有饮酒史者101例；BMI为(24.2±1.3)kg/m2；其中胃平滑肌瘤58例，胃腺肌瘤40例，胃纤维瘤21例，胃神经纤维瘤11例。选取同期体检健康者120例为对照组，其中男82例，女38例；年龄45～71岁，平均(54.8±8.8)岁；有吸烟史者59例；有饮酒史者98例；BMI为(24.8±1.5)kg/m2。3组年龄、性别、吸烟史、饮酒史、BMI等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。对120例胃癌患者进行为期50个月的随访。

1.2血清MMP-2与MMP-9水平检测 采用酶联免疫吸附试验检测各组血清MMP-2、MMP-9水平，采用美国赛默飞世尔公司Nanodrop ND2000分析仪检测吸光度。

1.3血清LncRNA MIAT水平检测 提取血清总RNA，采用实时荧光定量PCR仪(美国Bio-Rad公司C1000型)进行检测。采用Primer Premier5.0进行PCR引物设计，引物合成由北京赛百盛基因技术有限公司提供，LncRNA MIAT与GAPDH(内参)引物序列见表1。采用2-ΔCt计算LncRNA MIAT的相对表达水平，结果用对数形式表示。

表1 LncRNA MIAT和GAPDH引物序列

2 结 果

2.1各组血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9水平比较 各组血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。其中，胃癌组血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9水平均高于良性病变组与对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.2血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9水平与胃癌病理特征的关系 血清LncRNA MIAT、MMP-2、MMP-9水平与肿瘤部位无明显关系(P>0.05)，而与胃癌的TNM分期及组织学类型有关(P<0.05)，血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9水平在TNM Ⅲ～Ⅳ期和印戒细胞癌患者中增高最为明显。见表3。

2.3血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9单独及联合检测诊断胃癌的效能 ROC曲线分析结果显示，血清LncRNA MIAT单独检测诊断胃癌的曲线下面积(AUC)为0.887，高于MMP-2和MMP-9单独检测。LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9 联合检测的AUC(0.937)高于各项指标单独检测，灵敏度为79.9%，特异度为94.3%。见图1、表4。

表2 各组血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9水平比较

注：与胃癌组比较，aP<0.05。

表3 血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9水平与胃癌病理特征的关系

图1 血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9单独及联合检测诊断胃癌的ROC曲线

2.4危险因素分析 将是否患胃癌作为因变量，血清LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9水平作为自变量，进行危险因素分析。单因素分析结果显示，血清LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9是胃癌发生的危险因素(P<0.05)；多因素分析结果显示，血清LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9是胃癌发生的独立危险因素(P<0.05)。见表5。

表4 血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9单独及联合检测诊断胃癌的效能

注：-为无数据。

2.5生存曲线分析 50个月的随访完成时，120例胃癌患者中死亡72例，无失访。以胃癌患者血清LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9水平的中位数(LncRNA MIAT 为13.4，MMP-2 为42.5 pg/mL，MMP-9为33.1 pg/mL)为界值，将120例患者分为高、低水平LncRNA MIAT，高、低水平MMP-2和高、低水平MMP-9胃癌患者。相比低水平LncRNA MIAT患者(中位生存时间50个月)，高水平LncRNA MIAT患者(中位生存时间27个月)中位生存时间明显缩短(P<0.05)，Kaplan-Meier生存曲线见图2A；相比低水平MMP-2患者(中位生存时间50个月)，高水平MMP-2患者(中位生存时间28个月)中位生存时间明显缩短(P<0.05)，Kaplan-Meier生存曲线见图2B；相比低水平MMP-9患者(中位生存时间50个月)，高水平MMP-9患者(中位生存时间33个月)中位生存时间明显缩短(P<0.05)，Kaplan-Meier生存曲线见图2C。

表5 危险因素分析结果

注：A为LncRNA MIAT的Kaplan-Meier生存曲线；B为MMP-2的Kaplan-Meier生存曲线；C为MMP-9的Kaplan-Meier生存曲线。

图2 高、低水平血清MIAT、MMP-2和MMP-9胃癌患者的Kaplan-Meier生存曲线分析

3 讨 论

LncRNA MIAT作为肿瘤基因参与多种不同类型肿瘤的发展，尤其在消化道肿瘤发病机制中的研究已取得较大进展。在结直肠癌中，LIU等[7]在癌组织、直肠癌LOVO和SW480细胞系中检测到LncRNA MIAT水平较癌旁组织和人正常结肠细胞系HcoEpic中的水平均明显增高，机制研究指出，LncRNA MIAT可通过下调miRNA-132促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭、转移，并抑制细胞凋亡。在胰腺癌中，LI等[8]研究指出，LncRNA MIAT在胰腺癌组织和胰腺癌细胞系PATU-8988、BxPC-3、PANC-1、SW1990和AsPC-1中的表达水平较癌旁组织和人正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7均明显增高，且高表达的LncRNA MIAT与胰腺癌的转移和增殖相关。在胃癌中，研究者发现LncRNA MIAT可通过EGFR信号通路调控细胞的增殖，参与细胞周期阻滞、细胞凋亡、上皮间质转化、细胞迁移和侵袭等过程，其水平在胃癌发生早期即可出现增高趋势[9-10]；另一方面，LncRNA MIAT水平还可在一定程度上反映肿瘤细胞的增殖活性[9]。本研究发现,LncRNA MIAT在胃癌患者血清中的水平高于良性病变组和对照组，且其水平与胃癌的TNM分期及组织学类型有关，TNMⅢ～Ⅳ期和印戒细胞癌患者的LncRNA MIAT水平升高最为明显，这些发现与SHA等[9]、LI等[10]的研究结果一致。此外，LI等[10]的研究还提示，LncRNA MIAT可以促进胃癌细胞的增殖与侵袭，说明高水平的血清LncRNA MIAT与胃癌的不良预后相关。

MMP-2、MMP-9是肿瘤细胞侵袭、转移过程中的两个关键酶，二者的激活可以形成Ⅳ型胶原酶，降解细胞外基质，破坏完整的基底膜，促进肿瘤细胞浸润周围组织，侵入血管和淋巴管，向远处转移[11-12]。目前，关于MMP-2、MMP-9与胃癌的相关研究已取得较大进展。WANG等[13]对94例胃癌组织标本中MMP-2、MMP-9的水平进行检测发现，MMP-2及MMP-9在胃癌组织中的水平均高于癌旁组织，且二者与胃癌的临床分期相关。O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)是重要的肿瘤抑制物，在结直肠癌、食管癌等消化道肿瘤中均有报道[14-15]。机制研究指出，MGMT可通过下调MMP-2的表达而抑制胃癌的进展[16]。LU等[17]的体外研究发现，高表达MMP-2、MMP-9的胃癌细胞可通过p38MAPK信号通路增强细胞的侵袭与转移能力，这可能是高水平MMP-2、MMP-9预示胃癌不良预后的原因之一。本研究发现，胃癌患者血清MMP-2、MMP-9水平高于良性病变组和对照组，且在TNMⅢ～Ⅳ期和印戒细胞癌患者中的增高最为明显，与上述基础研究结果一致[13,17]。

ROC曲线分析结果显示，联合LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9检测诊断胃癌的AUC为0.937，特异度达94.3%，提示3项指标联合检测具有较高的临床应用价值。此外，血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9是胃癌发病的独立危险因素，且高水平LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9患者的预后较低水平患者差，提示血清LncRNA MIAT、MMP-2与MMP-9在胃癌诊断及预后评估中具有重要的临床价值。

4 结 论

综上所述，联合检测血清LncRNA MIAT、MMP-2和MMP-9对胃癌的诊断、发病风险预测及预后评估均具有重要意义，有望为胃癌的临床诊疗提供新的途径。