孙绪丁,刘振勋,王小云,王 天
(1.山东汉方制药有限公司,山东 济南 250101;2.山东汉方生物科技有限公司,山东 济南 250101;3.烟台大学,山东 烟台 264005)
疮疡是指各种致病因素侵袭人体后引起的一切体表化脓感染性疾病的总称,包括急性和慢性两大类[1-2]。疮疡包括了体表上的肿疡及溃疡、痈、疽、疔疮、疖肿、流注、流痰、瘰疬及有关皮肤病的内容,是中医外科疾病中最常见的一大类病证,具有发病迅速,部分病情较重等特点,在面部可引起疔疮走黄(西医称为败血症或脓毒败血症),在手、足易引起伤筋损骨的严重后果。创伤出现感染以后,就形成了疮疡。本文通过制备大鼠疮疡模型研究复方黄柏液抗疮疡作用,以及对比不同工艺复方黄柏液产品的抗疮疡药效作用。旨在了解复方黄柏液的抗疮疡效果,为临床应用提供可靠的实验依据。
ES-6KHTS电子天平(长沙湘平科技发展有限公司)。
复方黄柏液产品(原工艺,批号16010811;新工艺1,批号151230;新工艺2,批号151224;原工艺优化,批号151227;复方黄柏液凝胶,批号160112;复方黄柏液产品来自山东汉方制药有限公司);康复新液(批号M150349,湖南科伦制药有限公司);链球菌(ATCC43143)、金黄色葡萄球菌(AS1.1476)、绿脓杆菌(ATCC9027)均由滨州医学院微生物与免疫实验室提供。见表1。
SD大鼠,雄性,体重320~340 g,由山东绿叶制药有限公司提供,动物合格证号:SYXK(鲁)2014003。
表1 复方黄柏液产品不同工艺
SD大鼠随机分为8组:对照组、模型组、康复新组、原工艺组、新工艺1组、新工艺2组、原工艺优化组、复方黄柏液凝胶组,大鼠背部剃毛,切开皮肤,深达真皮,长3厘米,冠状面做两个切口,切口间距1厘米,矢状面做1个切口,之后,在切口部位均匀滴加链球菌(30亿/ml)、金黄色葡萄球菌(30亿/ml)、绿脓杆菌(15亿/ml),各0.1 ml,48小时后评分,按照评分进行分组,分组后给予相应药物,用1.5 ml药液浸润棉球,以棉球擦拭伤口,2次/天,连续给药14天,分别于给药后第7天和第14天评分;取大鼠皮肤,4%甲醛固定,HE染色观察。
按下列指标及标准评定伤口感染的严重程度和药物治疗效果。伤口收缩情况,测量伤口长和宽(cm);伤口红、肿、分泌物及坏死组织情况,按下表标准评分,4项治疗的最高综合评分为10分。
表2 评分标准
给药前,各组评分无差异;给药后7天与给药后第14天各组分评分未见显著性差异(P>0.05)(表3)。
对照组疮疡瘢痕愈合,较窄,表面覆盖角化的复层扁平上皮,其下为较幼稚的结缔组织,成纤维细胞、纤维细胞和胶原纤维较少,皮肌破坏,皮下组织轻度炎症;模型组疮病瘢痕愈合,疮疡较宽,表面覆盖角化的复层扁平上皮,其下为较幼稚的结缔组织,成纤维细胞、纤维细胞和胶原纤维较少,皮肌破坏,皮下结締组织有脓肿形成;康复新组疮疡瘢痕愈合,较模型组窄,表面覆盖角化的复层扁平上皮,其下为较为成熟的结缔组织填充,胶原纤维相对较多,皮肌破坏,皮下结缔组织无炎性反应;原工艺组疮疡瘢痕愈合,较模型组窄,表面覆盖角化的复层扁平上皮,其下为较为成熟的结缔组织,胶原纤维相对较多。皮肌破坏,皮下结缔组织无炎性反应;新工艺1组疮疡瘢痕愈合,较模型组宽,表面覆盖角化的复层扁平上皮,其下为较为幼稚的结缔组织,胶原纤维相对较少,皮肌破坏,皮下结缔组织轻度炎性反应;新工艺2组病理改变与新工艺1组相同;原工艺优化组疮疡瘢痕愈合,较宽,深达皮下组织,为较幼稚的结缔组织填充,成纤维细胞或纤维细胞,胶原纤维较少,井且有炎性细胞浸润,皮肌破坏,皮下结缔组织有脓肿形成;复方黄柏液凝胶疮疡愈合,深达皮下组织,填充的结缔组织较为幼稚,胶原纤维相对较多,皮下结缔组织有轻度炎性反应,见附录图一。其中,A对照组,D模型组,G康复新组,J原工艺组,M新工艺1组,P新工艺2组,S原工艺优化组,V复方黄柏液凝胶组(×40); B对照组,E模型组,H康复新组,K原工艺组,N新工艺1组,Q新工艺2组,T原工艺优化组,W复方黄柏液凝胶组(×100);C对照组,F模型组,1康复新组,L原工艺组,O新工艺1组,R新工艺2组,U原工艺优化组,X复方黄柏液凝胶组(×400)。
研究表明原工艺、新工艺1、新工艺2、复方黄柏液凝胶组具有抗疮疡作用,其中原工艺抗疮疡作用最优。
复方黄柏液为纯中药制剂,主要成分为黄柏、连翘、金银花、蒲公英、蜈蚣等,具有清热解毒,消肿祛腐的作用。临床主要用于外伤感染、伤口愈合、皮炎湿疹、褥疮、溃疡性结肠炎、糖尿病溃疡等疾病[3-10]。由于黄柏液为中药提取物,不含乙醇,对皮肤组织无刺激,不但安全有效,而具有利于上皮细胞的爬行和生长,可促进疮面愈合。不同工艺生产的复方黄柏液样品的药理活性不同,抗疮疡作用有所差距,原工艺产品抗疮疡作用最优,实验表明复方黄柏液涂剂具有较好的抗疮疡作用,为临床应用提供依据。
表3 复方黄柏液对大鼠疮疡评分的影响(±s,n=7-12)
表3 复方黄柏液对大鼠疮疡评分的影响(±s,n=7-12)
对照 3.12f1.89 2.17f1.36 0.00f0.00模型 4.54f1.20 2.20f0.89 0.20f0.42康复新 5.22f0.44 2.38f0.70 0.14f0.38原工艺 4.27f1.10 2.18f0.75 0.09f0.30新工艺1 4.27f1.35 2.55f0.93 0.00f0.00新工艺2 4.31f1.18 2.64f1.12 0.18f0.40原工艺优化 4.39f1.04 2.27f0.90 0.18f0.40复方黄柏液凝胶 4.27f1.10 2.45f0.93 0.11f0.33