复方氨酚烷胺胶囊（片）胆红素的含量考察

（菏泽市食品药品检验检测研究院，山东 菏泽 274000）

复方氨酚烷胺制剂适用于缓解普通感冒及流行性感冒引起的发热、头痛、四肢酸痛、打喷嚏、流鼻涕、鼻塞、咽痛等症状。本品为复方制剂，胶囊剂和片剂处方为每粒（片）含对乙酰氨基酚250 mg，盐酸金刚烷胺100 mg，人工牛黄10 mg，咖啡因15 mg，马来酸氯苯那敏2 mg。本品有解热、镇痛效果，能解除或改善感冒引起的各种症状。目前，国内共130家复方氨酚烷胺片生产企业，涉及130个批准文号；121家复方氨酚烷胺胶囊生产企业，涉及120多个批准文号。复方氨酚烷胺胶囊、片剂的现行质量标准[1-3]均未对人工牛黄中主要成分胆红素进行质量控制。在该制剂质量控制方面，对复方氨酚烷胺胶囊剂和片剂中的对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、咖啡因和马来酸氯苯那敏进行控制的研究较多[4-10]，对人工牛黄成分含量分析的不多[11]。复方氨酚烷胺类制剂是我省风险监测探索研究品种，我们对28个厂家生产的61批次样品中人工牛黄胆红素进行了考察。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），DAD检测器，安捷伦色谱工作站；FRQ-1010T型超声波清洗器（杭州法兰特公司），输出功率 600 W，工作频率42 kHz；Mettler XS 105十万分之一天平（Mettler Toledo）。

1.2 试药

胆红素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100077-201808，含量98.9 %）；复方氨酚烷胺胶囊（来自12个厂家，共22个批次）；复方氨酚烷胺片（来自17个厂家，共38个批次）；其他试剂均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 对照品与供试品溶液制备

2.1.1 对照品溶液制备 取胆红素对照品适量，精密称定，加三氯甲烷制成每1 ml含8 μg的溶液，即得。

2.1.2 供试品溶液制备 分别取装量差异检测合格的胶囊内容物或重量差异检测合格的片剂供试品，研细，精密称取细粉适量（约相当于人工牛黄30 mg），置25 ml量瓶中，加三氯甲烷-甲醇-水-盐酸（900:100:3:0.3）适量，振摇，超声15 min溶解，迅速冷却至室温，加上述溶液稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent C18（4.6 mm×250 mm，5µm）；以甲醇-三氯甲烷-1 %磷酸溶液（81:13:6）为流动相；流速1.0 ml/min；检测波长449 nm；柱温30 ℃；进样体积10 μl。理论板数按胆红素峰计算应不低于3000，分离度应符合规定。色谱图见图1。色谱峰面积大，峰型好，没有拖尾现象，主峰前后没有肩峰，各项系统适用性实验参数均达到药典要求。

图1 对照品溶液、供试品溶液及空白溶液HPLC图谱

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 取胆红素对照品适量（约 16 mg），精密称定，置100 ml 量瓶中，加三氯甲烷溶液适量溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；分别精密量取贮备液3，2，1，0.5，0.2 ml，分别置10 ml量瓶中，并用三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，进样分析，记录色谱图，以浓度（μg/ml）为横坐标（X），峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程：A=53.39X-40.15（r=0.9996，n=5，胆红素线性范围为 3.17～47.56 μg/ml 。

2.3.2 精密度试验

2.3.2.1 重复性 取同厂家同批号样品（批号：20190301），按2.1.2项下方法制备供试品溶液，测定含量6次，平均含量为0.1670 mg/粒，RSD=0.60 %，表明本方法精密度良好。

2.3.2.2 中间精密度 在不同日期，取同厂家同批号样品（批号：20190301），按2.1.2项下方法制备供试品溶液，按2.2项色谱条件进样测定，平均含量为0.1659 mg/粒，RSD=1.1 %；不同实验人员，取同厂家同批号样品（批号：20190301），按2.1.2项下方法制备供试品溶液，按2.2项色谱条件进样测定，平均含量为0.1732 mg/粒，RSD=1.4 %；使用不同品牌的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱[Agilent（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Phenomenex（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Kromasil 100-5（4.6 mm×250 mm，5μm）]，取同厂家同批号样品（批号：20190301），按2.1.2项下方法制备供试品溶液，按2.2项色谱条件进样测定，平均含量为0.1632 mg/粒，RSD=1.0 %。

2.3.3 加样回收率测定 分别取重量差异检测合格的6批供试品（批号：20190301，20190302，20190303，20190304，20190210，20190810），研细，精密称取细粉适量（约相当于人工牛黄30 mg），置25 ml量瓶中，加入一定量的胆红素对照品，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，按2.2项下色谱条件进样测定，计算回收率，结果见表1。

表1 胆红素加样回收率试验结果

2.3.4 定量限与检测限 取2.1.1项下的胆红素对照品溶液，以三氯甲烷为溶剂，进行系列稀释，进样测定，测得定量限（S/N≈10）为0.751 μg/ml（7.51 ng）；检测限（S/N≈3）为0.250 μg/ml（2.50 ng）。

2.3.5 耐用性试验 采用不同品牌的高效液相色谱仪和色谱柱进行含量测定，并适当调整流动相的比例、pH值与流速，或在适当范围内调整柱温箱温度，均可得到满意的实验数据，表明该含量测定方法有良好的耐用性。

2.4 含量测定结果

取28个厂家的61批次复方氨酚烷胺制剂，按2.1.2项方法制备供试品溶液，分别精密量取供试品溶液与对照品溶液各10 µl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中胆红素的含量与转移率。结果见表2。

表2 复方氨酚烷胺胶囊（片）人工牛黄中胆红素含量测定结果

注：*转移率低于85 %

3 讨论

《中国药典》2015年版一部[12]规定：药材人工牛黄中，按干燥品计算，含胆红素不得少于0.63 %。由表2可见，61批次样品中，人工牛黄中胆红素含量为0.43 %～0.65 %，平均含量为0.58 %，人工牛黄中胆红素投料转移率为68.3 %～103.2 %，平均转移率为92.4 %。有3个厂家的8批次胆红素转移率低于85 %，最低转移率为厂家代码21的68.3 %，值得引起我们的重视。61批次复方氨酚烷胺制剂胆红素含量整体偏低，含量均值、转移率均值都低于药材人工牛黄胆红素含量的低限，原因值得进一步研究。

由于现行的质量标准仅对人工牛黄中胆酸进行化学鉴别，质量标准存在明显的漏洞，部分企业为降低成本，牟取更大利益，有可能钻质量标准的空子，使用劣质人工牛黄，导致胆红素含量偏低。生产环境条件不佳，特别是生产过程不注意避光，也有可能导致胆红素含量偏低。

建议对胆红素含量偏低的企业进行风险提示，督促其改进生产工艺，并规范仓储条件，必要时对涉嫌企业进行现场检查。药品监督管理部门应完善并提高质量标准，严格控制该制剂质量，有效防范可能出现的质量风险。