慢性阻塞性肺疾病合并重症肺炎患者免疫功能指标和血清降钙素原及前清蛋白检测的临床意义

符翔

(广昌县人民医院，江西 广昌 344900)

慢性阻塞性肺疾病是常见且多发的呼吸系统疾病，具有较高的发病率和病死率，目前已成为全球慢性病第四大死亡病因[1]。细菌感染是引起慢性阻塞性肺疾病病情加重的重要原因，感染若得不到及时控制易进展为重症肺炎，患者肺泡、肺间质及终末气道出现严重炎症反应，导致急性呼吸窘迫和呼吸衰竭，病情严重者出现全身多器官功能障碍综合征(MODS)等严重并发症[2]，常危及生命。血清前清蛋白(PA)和血清降钙素原(PCT)是判断细菌感染的常用指标[3]，在重症肺炎患者中，上述指标水平发生显著变化，而在慢性阻塞性肺疾病合并重症肺炎患者中，应用上述指标判断患者预后鲜有报道。本研究通过检测慢性阻塞性肺疾病合并重症肺炎患者外周血T细胞亚群和NK细胞活性及PCT，PA水平，探讨上述指标与患者转归及预后的关系。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年5月—2018年4月收治的54 例慢性阻塞性肺疾病合并重症肺炎患者作为观察组，同期选取40 例体检健康者为对照组。观察组男34 例，女20 例，年龄(48.23±8.20) 岁。对照组男30 例，女24 例，年龄(47.65±6.38) 岁。两组受试者年龄、性别比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。根据转归将54 例慢性阻塞性肺疾病合并重症肺炎患者分为存活组(38 例)和死亡组(16 例)。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：均符合2007年修订版《慢性阻塞性肺疾病诊治指南》[4]中关于慢性阻塞性肺疾病的诊断标准；均符合美国感染病学会/美国胸科学会(IDSA/ATS)[5]中关于重症肺炎的诊断标准；均伴有高热、气急及咳脓痰等症状。排除标准：合并免疫系统、血液系统疾病及感染性疾病；近1个月内服用免疫抑制剂者。

1.3 方法

健康受试者体检时、慢性阻塞性肺疾病合并重症肺炎患者入院时、存活者出院时和死亡者死亡当天，在无菌条件下空腹采集2mL外周血，置于0.2%EDTA-K2抗凝管中，取100 μL全血加入CD483混合抗体[鼠抗人CD8-藻红蛋白(PE)、鼠抗人CD4-异硫氰酸荧光素(CD4-FITC)、鼠抗人CD3-藻红蛋(PE)-Cy5]和NK细胞活性测试抗体[鼠抗人CD1+CD56-PE单克隆抗体、鼠抗人CD3-异硫氰酸荧光素(CD3-FITC)]。同时设置阴性对照管，避光室温孵育，向对照管内加入红细胞裂解液，在细胞仪作用下裂解红细胞。采用美国Coulter公司提供的Epocs XL型流式细胞仪对表面标志CD3+，CD4+，CD8+阳性的细胞进行分离，分析各种细胞的百分率，计算CD4+/CD8+，并分析自然杀伤细胞(NK)的活性值。采集4 mL全血，分离血清待测。采用双抗体夹心免疫发光法检测两组血清PCT水平，试剂盒由青岛汉唐生物科技有限公司提供。采用免疫透射比浊法检测两组血清PA水平，试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供。采用双抗体夹心法检测两组血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及白介素-8(IL-8)，试剂盒由上海康朗生物科技有限公司提供。所有操作步骤按试剂盒说明书严格进行。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 免疫功能指标

观察组CD3+，CD4+，CD4+/CD8+和NK细胞活性显著低于对照组，CD8+显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

表1 两组受试者免疫功能指标比较

2.2 血清PCT和PA水平

观察组血清PCT，TNF-α，IL-6及IL-8水平显著高于对照组，血清PA水平显著低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)(见表2)。

表2 两组血清PCT和PA水平比较

2.3 不同转归患者血清PCT和PA水平比较

存活组患者出院时检测的血清PCT，TNF-α，IL-6及IL-8水平显著低于死亡组患者死亡当天所测水平，血清PA水平显著高于死亡组，差异有统计学意义(P<0.05)(见表3)。

表3 不同转归患者血清PCT和PA水平的比较

3 讨 论

近年来有研究发现[6-7]，机体免疫功能低下及紊乱是导致慢性阻塞性肺疾病患者反复急性加重的一个重要因素。T淋巴细胞是常用于评价机体免疫功能的重要指标，研究表明[8]，CD4+T淋巴细胞在机体抗结核免疫中有着相当独立的作用，而CD+8细胞属于抑制性T细胞。慢性阻塞性肺疾病患者外周血中CD8+T淋巴细胞明显增加，主要作用为溶解感染后失去免疫活性的靶细胞，促进其凋亡，并可促进细菌的暴露及病灶的清除[9]。CD3+细胞数量的减少表示机体整体细胞免疫水平的下降，而CD4+/CD8+的降低代表机体T淋巴细胞亚群比例失衡，即机体免疫功能异常，会影响机体IL-4，IL-6及IL-10的表达水平[10]，因此CD4+/CD8+常被作为疾病预后的重要指标。相关研究显示[11]，重症感染能够导致机体T淋巴细胞凋亡，引发T淋巴细胞亚群数量的改变，免疫功能低下与重症感染形成恶性循环，导致患者病情迅速加重。慢性阻塞性肺疾病患者由于呼吸道有细菌定植、患者热量摄入不足、呼吸功能受阻、机体发热等因素，若增加其能量消耗，会引起免疫功能进一步下降，从而影响治疗效果[12]。PA是机体处于急性感染时肝脏细胞合成的急性时相反应蛋白之一。目前研究显示[13]，PA是人体非特异性宿主防御物质，可清除感染过程中病原体释放入血液的各种毒性代谢物，同时能够被毒性代谢物消耗。在急性感染时，患者机体PA虽处于快速合成状态，但由于清除毒性代谢物，其外周血PA浓度急剧下降，尤其是细菌感染时下降程度更加明显。国外学者认为[14]，细菌感染所致的机体应激、发热、缺氧会导致机体蛋白分解增加，并出现负氮状态，这与PA水平下降有关。PCT属于降钙素(CT)的前肽物质，是由116个氨基酸组成的可溶性多功能免疫调节糖蛋白。血清PCT是诊断全身感染的重要标志物，同时在重症肺炎诊断中有着较高应用价值[15]。TNF-α和IL-6是炎症反应中首先出现的炎性因子，二者水平升高提示机体已存在初步炎症反应，比常规C反应蛋白灵敏度更高，而IL-8可聚集于炎症组织，其水平升高也提示出现炎症反应。TNF-α，IL-6及IL-8等多种炎性因子共同参与调控机体炎性病理过程[16]。

本研究观察组CD3+，CD4+，CD4+/CD8+及NK细胞活性显著低于对照组，CD8+显著高于对照组，差异有统计学意义，说明在慢性阻塞性肺疾病合并重症肺炎患者中存在免疫功能抑制，与目前文献报道一致[17]。此外，观察组血清PCT水平显著高于对照组，血清PA水平显著低于对照组，存活组血清PCT显著低于死亡组，血清PA水平显著高于死亡组，说明在慢性阻塞性肺疾病合并重症肺炎患者中，血清PCT及PA水平对于判断患者预后具有重要意义。相关研究证实[18]，在机体严重感染初期存在过度炎性反应，同时会产生大量促炎因子，起到免疫抑制作用。随着研究的不断深入，蒋一雅等[19]指出，严重感染时免疫抑制与免疫亢进并存，二者处于一种复杂的平衡状态下，故Lewis[20]认为，在机体严重感染时应采用免疫刺激联合抗炎治疗。本研究中，慢性阻塞性肺疾病合并重症肺炎患者NK细胞及T细胞亚群数量均发生改变，表明患者存在免疫抑制，而存活组患者血清PCT，TNF-α，IL-6及IL-8显著低于死亡组，血清PA水平显著高于死亡组。故在慢性阻塞性肺疾病合并重症肺炎患者中，抗感染与调控免疫功能对于改善预后具有同等积极作用。