顶空-气相色谱法测定盐酸贝尼地平中4种溶剂残留量

章少勇，许国峰，吴永江

(1.浙江大学 药学院，杭州310058; 2.绍兴民生医药股份有限公司，绍兴312071)

盐酸贝尼地平化学名为(4RS)-2，6-二甲基-4-(3-硝 基 苯 基)-1，4-二 氢-3，5-吡 啶 二 甲 酸-3-[(3RS)-1-苯甲基-3-哌啶基]酯-5-甲酯盐酸盐。盐酸贝尼地平是日本协和发酵工业公司在70年代后期为改善硝苯地平副作用而合成、筛选得到的一种新型持续性钙拮抗剂[1-2]。盐酸贝尼地平片目前在国内外均有上市。在盐酸贝尼地平的合成过程中，可能发生乙醇、丙酮、二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)等溶剂的潜在残留，残留的溶剂具有一定的毒性，会产生用药安全风险。

目前，针对盐酸贝尼地平中残留溶剂的测定，尚无公开的文献与专利记载，已有的国家药品标准[3]亦无残留溶剂检查项。为控制盐酸贝尼地平原料药的质量，本工作根据其制备工艺，按照《药品注册的国际技术要求》原则[4]和2015版中国药典通则[5]中对于残留溶剂的控制要求，对本品中可能残留的乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF 等进行测定。由于盐酸贝尼地平为盐酸盐类化合物，不适宜进入气相色谱仪，而其潜在的残留溶剂可通过挥发进入气相色谱仪被检测。因此，本工作采用顶空-气相色谱法测定盐酸贝尼地平中残留的乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF的残留量。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

岛津GC2010 型气相色谱仪，配岛津工作站，XS105型电子天平。

对照品储备溶液:称取乙醇620 mg、丙酮620 mg、二氯甲烷75 mg、DMF 110 mg，用二甲基亚砜(DMSO)溶解并转移至100 m L 容量瓶中，用DMSO 稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度分别为6.2，6.2，0.75，1.10 g·L－1的对照品储备溶液。

混合对照品溶液:分别量取2 m L 各对照品储备溶液，置于同一预先装有适量DMSO 的50 m L容量瓶中，用DMSO 稀释至刻度，摇匀，即得乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF 的质量浓度分别为0.248，0.248，0.03，0.044 g·L－1的混合对照品溶液。以此溶液作为100%混合对照品溶液，分别量取1，2.5 m L各对照品储备溶液，同时配制50%，125%混合对照品溶液。

乙醇、丙酮、二氯甲烷、DMF 和DMSO 均为分析纯，盐酸贝尼地平原料药。

1.2 仪器工作条件

HP-5 毛 细 管 色 谱 柱(0.53 m ×30 mm，1.5μm);氢火焰离子化检测器(FID);进样口温度为250 ℃，检测器温度为250 ℃;载气为氮气;分流进样，分流比为10∶1。柱升温程序:初始柱温为40 ℃，保 持4 min;以20 ℃·min－1速 率 升 温 至220 ℃，保持2 min。顶空瓶区域温度80℃;保温时间30 min，低速振荡;定量环温度120 ℃，传输线温度130 ℃;定量管体积1 m L。

1.3 试验方法

称取盐酸贝尼地平250 mg置于20 m L顶空瓶中，加DMSO 5 m L 溶解，密封，作为供试品溶液。按仪器工作条件进行测定。

2 结果与讨论

2.1 色谱行为

分别取空白溶液、混合对照品溶液各5 m L，置于20 m L 顶空瓶中，封装，按仪器工作条件进行测定。另取2 份盐酸贝尼地平各约250 mg，置于20 m L顶空瓶中，分别加入空白溶液和对照品溶液5 m L，封装，摇匀，得到的溶液分别记作供试品溶液和加标供试品溶液，按仪器工作条件进行测定。记录各溶剂峰的保留时间并计算其与相邻峰的分离度，各溶液的色谱图见图1。

图1 色谱图Fig.1 Chromatograms

由图1可知:空白溶剂DMSO 不干扰4种溶剂的检测，空白溶剂峰、各溶剂峰之间分离度均大于1.5，且样品对各溶剂的测定均无干扰。

2.2 提取溶剂和柱温的选择

由于盐酸贝尼地平的水溶性很差，故采用有机溶剂DMSO 将其溶解，避免由于样品不溶解被包裹在小颗粒中或吸附在小颗粒表面而造成结果重复性较差;由于乙醇、丙酮、二氯甲烷均为极性相似的低沸点溶剂(沸点分别是78，56，40℃)，参照中国药典2015年版通则0861 第二法，调整色谱柱初始柱温为40 ℃，并 保 持4 min 后(上 述3 种 成 分 均 在4 min内出峰，DMF 与上述3 种溶剂相差较大，若保温时间过长会增加不必要的分析时间)再进行升温，从而保证了三者之间色谱峰的良好分离。

2.3 标准曲线

配制混合标准溶液系列，按试验方法进行分析。以乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF的质量浓度为横坐标，与其对应峰面积为纵坐标绘制标准曲线，各溶剂的线性参数见表1。

表1 线性参数Tab.1 Linearity parameters

由表1可知:乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF 的质量浓度均在一定范围内呈线性，其相关系数均大于0.998 0。

2.4 检出限与测定下限

取各对照品溶液，用DMSO 逐渐稀释，取5 m L置于20 m L顶空瓶中，封装，顶空进样，记录各主峰的峰高，以3倍信噪比计算方法的检出限(3S/N)，以10倍信噪比计算方法的测定下限(10S/N)，结果见表2。

2.5 精密度试验

移取混合对照品溶液5 m L 共6份，分别置于6个20 m L顶空瓶中，封装;取上述6份溶液顶空进样，记录所得各溶剂的峰面积及理论板数，计算峰面积的相对标准偏差(RSD)，结果见表3。

表2 检出限与测定下限的结果Tab.2 Results of limits of detection and lower limits of determination

表3 精密试验结果(n＝6)Tab.3 Results of test for precision(n＝6)

由表3可知:各溶剂的色谱峰面积RSD 均不大于10%，符合精密度的要求，且理论板数均在5 000以上。

2.6 回收试验

称取已知残留溶剂含量的盐酸贝尼地平供试品约250 mg，共9份，分别置于20 m L顶空瓶中，分别加入50%，100%，125%混合对照品溶液各5 m L溶解，封装。每个加标溶液平行制备3份。在仪器工作条件下测定，根据各有机溶剂峰面积计算各溶剂的回收率，结果见表4。

结 果 表 明:4 种 溶 剂 的 回 收 率 为98.2% ～118%，说明测定值是准确和可靠的。

2.7 样品分析

取3 批样品按试验方法进行测定，结果表明，3批样品均未检出乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF。

表4 回收试验结果Tab.4 Results of test for recovery %

本工作建立了顶空-气相色谱法测定盐酸贝尼地平中溶剂残留量的方法。该方法对乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF的区分能力较强，具有灵敏度高，准确度好等特点，能有效地测定盐酸贝尼地平样品中潜在残留的乙醇、丙酮、二氯甲烷和DMF。