宫颈磷癌组织中Survivin的表达及其与患者临床病理特征的关系

额尔德木图 贾玉玲 秦晓玲 牛丽蓉 宝莹娜 郁志龙

宫颈癌是严重威胁女性健康的常见恶性肿瘤之一，约占女性生殖器官恶性肿瘤的50%以上，其中宫颈鳞癌约占宫颈癌的75%～80%左右［1］。近年来的流行病学调查研究显示，我国宫颈癌患者的发病率呈逐年增加和年轻化趋势［2］，因此，临床对宫颈癌发生及发展过程中相关生物学指标变化的关注度也在不断提高。Survivin 是凋亡抑制因子（inhibitor of apoptosis proteins，IAP）家族成员之一，具有抗凋亡、促进细胞增殖及促进血管新生等重要作用［3-4］。近年来有许多研究显示，Survivin在人类胃癌［5］、肝癌［6］、肺癌［7］、乳腺癌［8］等实体瘤肿瘤组织中表达增加。然而，目前有关Survivin 在宫颈癌组织中的表达及其与宫颈癌增殖、侵袭、转移的确切关系尚不明确，因此，本研究旨在进一步分析宫颈鳞癌组织中Survivin 的表达及其与患者临床病理特征的关系，以期为未来宫颈鳞癌的靶向治疗提供一定的参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2012年8月至2019年8月在本院收治的宫颈鳞癌患者200例，纳入标准：经临床首次确诊并通过病理学验证证实为宫颈鳞癌［9］，各项功能性指标符合研究标准，行为状态评分（Karnofsky Performance Status，KPS）70 分以上，具有明确的可测量病灶者，患者及其家属同意并签署知情同意书。排除标准：对化疗药物不耐受者，肝、肾功能存在异常者，病情严重，预计生存期＜5 个月者。患者的平均年龄（54.52±4.23）岁，分期按照国际妇产科协会（Federation International of Gynecology and Obstetr，FIGO）分期标准［10］：Ⅰb～Ⅱa 期13例、Ⅱb 期128例、Ⅲ期22例、Ⅳ期6例，有淋巴结转移31例。宫颈鳞癌组织标本为200例患者在本院病理科库存蜡块，同时取经病理检查证实为正常宫颈组织的200例癌旁组织库存蜡块作为对照。另选取同期在本院经宫颈肿瘤切除术后病理学诊断确诊的宫颈鳞状上皮内病变的50例患者的组织标本作为对照。所有患者及家属均签署知情同意书。

1.2 免疫组织化学染色法检测各组织中Survivin蛋白的表达

应用免疫组织化学染色法检测宫颈鳞癌组织、癌旁组织及宫颈鳞状上皮内病变组织中Survivin 蛋白的表达，将厚度为4 μm 的石蜡切片经常规脱蜡及水化后，加入3% H2O2溶液灭活20 min，以消除内源性过氧化物酶的活性，再加入柠檬酸盐缓冲液加热至100℃，维持20 min 左右，以进行抗原修复。将冷却后的切片严格按照SP 组织化学试剂盒（陕西信康电子科技公司）说明书要求进行操作。

1.3 免疫组织化学染色结果判定

免疫组织化学片由3 位主治以上的病理诊断医生盲审。阳性结果判定标准［11］：以细胞质及细胞核中出现颗粒状或弥漫性棕黄色至棕褐色染色为阳性细胞，否则视为阴性细胞。

1.4 采用RT-PCR 法检测各组织中Survivin mRNA 的表达

超声匀浆各组织样本，按TRIzol 试剂盒（上海生工生物工程股份有限公司）说明书提取组织总RNA，再逆转录为cDNA。按照PCR 试剂盒（广州锐博生物科技有限公司）操作说明书进行。以GAPDH 为内参基因，采用2-ΔΔCt值法分析扩增结果。

1.5 统计学分析

采用SPSS 20.00 处理数据，计数资料以n表示，采用秩和检验，计量资料以（）表示，采用t检验或单因素方差分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Survivin 蛋白在不同组织中的表达

免疫组织化学结果显示，Survivin 在癌旁组织和宫颈鳞状上皮内病变组织中均不表达，总阳性率均为0.00%，Survivin 在癌组织中主要定位于细胞质或和细胞核，呈弱阳性至强阳性表达，且Survivin 在细胞核的表达变化随分期增加而表达增强；宫颈磷癌组织中Survivin总阳性率显著高于癌旁组织和宫颈鳞状上皮内病变组织，差异具有统计学意义（P＜0.05），见图1。

图1 Survivin 在不同组织中的表达（免疫组织化学染色，×40）Figure1 The expression of Survivin in different tissues（免疫组织化学染色，×40）

2.2 Survivin mRNA 在不同组织中的表达

RT-PCR 检测结果显示，Survivin mRNA 在宫颈磷癌组织（4.46±0.97）中的相对表达量明显高于癌旁组织（1.17±0.42）和宫颈鳞状上皮内病变组织（1.29±0.51），差异有统计学意义（P＜0.05），Survivin mRNA 癌旁组织和宫颈鳞状上皮内病变组织组织中的表达相比差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 宫颈癌组织中Survivin 的表达与患者临床病理特征的关系

根据宫颈癌患者的年龄、FIGO 分期、组织分级、浸润深度、有无淋巴结转移分为不同亚组，比较各亚组组织中Survivin 蛋白及mRNA 表达的差异性，结果显示，不同FIGO 分期、组织分级、浸润深度及有无淋巴结转移的宫颈癌患者组织中Survivin 蛋白及mRNA 表达情况存在明显差异（P＜0.05），但不同年龄的宫颈癌患者并无明显差异（P＞0.05），见表1。

3 讨论

宫颈癌是妇科临床常见的恶性肿瘤之一，多发于中年女性，严重威胁女性的健康［12］。目前已知HPV 病毒是导致宫颈癌的病因，故宫颈癌成为人类第一个可通过注射疫苗、筛查等手段预防及早期发现的恶性肿瘤［13］。然而，宫颈癌易在发现早期也出现侵袭及转移，而影响患者的远期预后［14］，因此，解析宫颈癌发生及发展过程中关键生物学指标的变化情况，对于提高宫颈癌患者的预后极为重要。

宫颈癌的发生、侵袭、转移机制复杂，与多种癌基因、抑癌基因的激活、失活调控及细胞凋亡异常有关［15-16］。Survivin 是目前发现的抑制凋亡作用最强的抗凋亡因子，其可直接作用于凋亡途径的终末效应酶，而发挥抗凋亡作用［17］。此外，Survivin 还具有肿瘤异质性，可促进肿瘤细胞的异常增殖分化、参与肿瘤细胞的分裂及血管新生等多种复杂作用［18-19］。近年来大量的文献报道，Survivin 在多种肿瘤组织中表达增加［20-21］。然而，目前有关Survivin 在宫颈癌组织中的表达及其与宫颈癌增殖、侵袭、转移的确切关系尚不明确。在本研究中，免疫组织化学结果显示，Survivin 在癌组织中主要定位于细胞质或和细胞核，呈弱阳性至强阳性表达，且Survivin 在细胞核的表达变化随分期增加而表达增强，宫颈磷癌组织中Survivin 总阳性率明显高于癌旁组织和宫颈鳞状上皮内病变组织，而且，RT-PCR 检测结果显示，Survivin mRNA在宫颈磷癌组织中的相对表达量明显高于癌旁组织和宫颈鳞状上皮内病变组织，Survivin mRNA 癌旁组织和宫颈鳞状上皮内病变组织组织中的表达相比，差异具有统计学意义（P＞0.05），表明宫颈癌组织中Survivin 的表达明显增加。李桂湖等人［22］研究发现，Survivin 在宫颈癌组织中的表达明显高于宫颈上皮内瘤变组织及慢性宫颈炎组织，这一结果支持本研究结果。

表1 宫颈癌组织中Survivin 的表达与患者临床病理特征的关系［n（%），（±s）］Table1 The relationship between the expression of Survivin and clinicopathological characteristics of cervical cancer［n（%），（±s）］

表1 宫颈癌组织中Survivin 的表达与患者临床病理特征的关系［n（%），（±s）］Table1 The relationship between the expression of Survivin and clinicopathological characteristics of cervical cancer［n（%），（±s）］

项目Survivin 蛋白表达+（n=53）++（n=61）+++（n=86）Z 值P 值Survivin mRNA表达t/F 值P 值年龄（岁）≤60（n=137）＞60（n=63）FIGO 分期（无淋巴结转移）Ⅰb～Ⅱa 期（n=13）Ⅱb 期（n=128）Ⅲ期（n=22）Ⅳ期（n=6）淋巴结转移有（n=31）无（n=169）组织分级低分化（n=72）中高分化（n=128）浸润深度＜1/2（n=134）≥1/2（n=66）31（22.63）22（34.92）44（32.12）17（26.98）1.531 0.317 0.575 0.472 62（45.26）24（38.10）7（53.85）37（28.91）3（13.63）1（16.67）5（38.46）40（31.25）5（22.72）1（16.67）4.39±0.75 4.52±0.63 15.836 0.000 11.209 0.000 1（7.69）51（39.84）14（63.64）4（66.67）3（9.68）50（29.59）6（19.35）55（32.54）1.72±0.41 2.19±0.32 5.18±0.46 5.76±0.54 8.536 0.000 7.530 0.000 22（70.97）64（37.87）4（5.56）49（38.28）29（40.28）32（25.00）5.37±0.63 3.85±0.76 7.622 0.000 5.268 0.000 39（54.17）47（36.72）49（36.57）4（6.06）41（30.60）20（30.30）4.94±0.75 3.93±0.82 10.709 0.000 6.315 0.000 44（32.84）42（63.64）5.19±0.81 3.39±0.66

为了进一步研究Survivin 表达与宫颈癌进展的关系，本研究根据宫颈癌患者的年龄、FIGO 分期、组织分级、浸润深度、有无淋巴结转移分为不同亚组，比较了各亚组组织中Survivin 表达的差异性，结果显示，不同FIGO 分期、组织分级、浸润深度及有无淋巴结转移的宫颈癌患者组织中Survivin 蛋白及mRNA 表达情况存在明显差异，但不同年龄的宫颈癌患者组织中Survivin 蛋白及mRNA 表达情况无明显差异，表明宫颈癌组织中Survivin 的表达增加，使得肿瘤细胞的增殖异常，有助于肿瘤细胞向周围组织及淋巴结侵袭迁移。贾利刚等人［23］的研究显示，宫颈癌组织中Survivin的表达与临床分期及浸润深度有关，这与本研究结果相一致。我们推测宫颈癌组织中Survivin 表达水平越高，则肿瘤细胞越易发生侵袭及转移，患者的预后可能越差。

综上所述，宫颈磷癌组织中Survivin 的表达明显增加，且与宫颈磷癌的临床分期、恶性程度及侵袭转移有关，本研究结果有助于宫颈磷癌的预后判断。在后续的研究中，本研究将收集更多的病例，以进一步探讨Survivin 表达与宫颈磷癌患者预后的关系，以期为宫颈磷癌的精准治疗提供一定的参考依据。