p16 与PIK3CA、PIK3CB 突变在食管鳞癌中的表达及临床意义

温菲菲 何 双 许晓阳 李扬扬 吴淑华

（滨州医学院附属医院，山东 滨州 256603）

0 引言

PI3K/AKT 通路作为重要途径之一， 多类肿瘤的发生与其失调有关。 PI3KCA、PIK3CB 编码的p110α、p110β 存在于机体内， 当其表达增多，PI3K/AKT 通路失调[1]。 在许多HPV 相关人类癌症中，亦存在PI3K/Akt 途径的失调。 Syrjanen 等人第一次发现部分食管癌的发生与HPV 有关[2]。 在高危HPV 不断感染中，HPV E6/E7 的表达增加可能会干扰细胞周期控制，使pRb 失活，导致p16 表达增加。 因此，针对 p16 表达的免疫组化（IHC）被作为诊断是否有HPV 感染的替代检法[3]。

本研究在食管正常黏膜、鳞癌病例中，检测p16、PI3Kp110α、p110β 蛋白的表达差异及相关性， 探讨p16 与 PI3Kp110α、p110β 蛋白的作用，以期发现新的靶标与思路指导食管鳞癌的治疗。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集2014 年1 月至2015 年12 月于滨医附院病理科根治切除的食管鳞癌病例137 例、 正常黏膜32例。 由2 位消化亚专科病理医生参照《WHO 消化系统肿瘤分类》（2019 版）[4]，对其阅片分类。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学

应用免疫组化染色， 一抗浓度 PI3Kp110α （1∶150）、p110β（1∶250）、p16 应用即用型工作液。 阴性对照为 PBS；p16、PI3Kp110α、p110β 指标的阳性对照分别为宫颈癌切片、正常脑组织切片、扁桃体切片。

1.2.2 结果判断

p16 阳性在鳞癌细胞质和细胞核中；PI3Kp110α、p110β 阳性在鳞癌的细胞膜和细胞质。 对所染切片，镜下观察10 个高倍视野。 p16 指标评判标准：鳞癌细胞阳性表达面积≥70%判定为阳性。 PI3Kp110α、p110β 的评判标准如表 1 所示。

表1 PI3Kp110α、p110β 的免疫组化评判标准表

1.3 统计学分析

统计学处理采用SPSS 23.0 软件。 正常食管黏膜与鳞癌组间蛋白的表达采用 χ2检验；p16、PI3Kp110α、p110β 与各临床病理因素间、 不同蛋白间的表达的相互关系均应用Spearman 相关性分析； 显著性检验标准为P≤0.05。

2 结果

2.1 p16、PI3Kp110α、p110β 在食管鳞癌与正常黏膜中的表达差异

采用 χ2检验，p16、PI3Kp110α、p110β 在鳞癌中的表达，与正常黏膜相比，表达量显著增多（P＜0.05，见图1、表2）。

图1 p16、PIKp110α、p110β 在食管鳞癌中的表达

表2 p16、PI3Kp110α、p110β 在食管鳞癌中的表达差异

2.2 食管鳞癌中 p16、PI3Kp110α、p110β 与临床特征的相关性

在食管鳞癌中，p16 的表达与发病部位、 分化程度、淋巴结转移具有相关性。 其中相对于食管中段与下段，颈段与上段p16 表达高，差异均具有显著性（P<0.05）。PI3Kp110α、p110β 与淋巴结转移呈显著正相关（P＜0.05，见表 3）。

表3 p16、PI3Kp110α、p110β 与临床特征的相关性

2.3 p16 与 PI3Kp110α、p110β 表达的关系

p16 与PI3Kp110α 在食管鳞癌中有显著相关性（r=0.177，P=0.039）； 然而，p16 与 PI3Kp110β 在食管鳞癌中的表达无相关性（P=0.760，见表4）。

表4 p16 与 PI3Kp110α、p110β 表达的相关性

3 讨论

食管癌是一种极具侵袭性的肿瘤，由于缺乏特定的初始症状，通常在晚期诊断，5 年生存率仅为15%～34%[5，6]。 食管鳞癌的治疗主要是手术辅以放化疗，但对于临床分期Ⅲ~Ⅳ期的患者，预后仍然较差[7]。 因此，研究能够预警食管癌发生的分子指标迫在眉睫。 本实验中，鳞癌组织中p16 蛋白的阳性率为34.3%，明显高于食管正常黏膜的阳性率0， 表明食管鳞癌的发生与HPV 的感染有关。 同时分析显示，p16 与食管部位有明显相关性。 笔者认为，食管颈段与上段距离外环境近， 更易感染HPV。 分化程度高的食管鳞癌病例中，p16 的表达高，提示在HPV 感染诱导的肿瘤中，分化程度较高。 在无淋巴结转移的病例中，p16 的表达高，HPV 感染以后，肿瘤分化程度较高，发展相对缓慢，进而淋巴结转移率低。

HPV 的持续感染，病毒多量复制，会异常激活多种信号途径[8，9]。在本实验中，与正常黏膜相比，PI3Kp110α、p110β 在食管鳞癌中表达增多， 提示在食管鳞癌中，PIK3CA、CB 被激活。研究亦显示，PI3Kp110α、p110β 与食管鳞癌的转移有关。 笔者认为，PIK3CA、CB 蛋白异常表达会使PI3K/AKT 途径失衡，失衡后的PI3K/AKT途径可导致mTOR 的异常表达，进而调控内皮细胞生长，导致肿瘤的转移。 p16 蛋白的表达均与PIK3CA 呈正相关，当食管发生HPV 的持续感染时，HPV 感染刺激 IL-17 诱导 Mcl-1 突变，导致 PIK3CA 的激活，PI3K途径失衡，诱导了肿瘤进展。

总之，在食管鳞癌的发生中，会有HPV 的感染，同时存在PI3K/AKT 信号途径失衡。联合检测PIK3CA和p16 可能有助于优化食管鳞癌的治疗。