lncRNA RGMB-AS1在脑胶质瘤预后评估中的价值

程飞飞 刘 江 周红军

胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤。据报道，WHO 分级Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤病人5 年存活率在30%～70%，Ⅳ级病人的存活期仅9～12 个月[1]。虽然过去几十年里，胶质瘤的治疗取得了巨大的进步，但是病人总体生存率仍未明显提高[1]。研究证实，长链非编码RNA（long-chain non-coding RNA，lncRNA）在人类多种肿瘤中异常表达，并参与肿瘤的侵袭和转移[2]。RGMB-AS1 是近年来发现的 lncRNA。Li 等[3]首次发现lncRNA RGMB-AS1 在非小细胞肺癌中表达上调，能够促进癌细胞的增殖和迁移。而且，lncRNA RGMB-AS1在肝细胞癌、甲状腺癌和食管鳞癌等中发挥致癌作用[4～6]。Pan等[7]发现，胶质瘤组织lncRNA RGMB-AS1 表达上调，沉默 RGMB-AS1 表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，可通过靶向调控miR-1200/HOXB2 信号通路发生致癌作用。本文探讨lncRNA RGMB-AS1 在脑胶质瘤病人预后评估中的作用。

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取 2014 年 9 月～2017 年 6 月收治的经术后病理检查证实的脑胶质瘤140 例，术前未接受过放、化疗。术中切除胶质瘤组织后，立即冻存于液氮，随后保存于-80 ℃冰箱。140例中，男72例，女68例；年龄23～78岁，平均（53.68±4.20）岁；术前KPS评分＜80 分 77 例，≥80 分 63 例；WHO 分级Ⅰ级 19例，Ⅱ级45 例，Ⅲ级22 例，Ⅳ级54 例。另选取颅脑损伤内减压术中切取正常脑组织25 例为对照。本研究已经过本院伦理委员会批准，所有受试者均签署知情同意书。

1.2 实时荧光定量PCR 法检lncRNA RGMB-AS1 的表达 严格按照试剂盒说明书操作。用TRIzol 试剂（美国invitrogen 公司）提取总RNA，随后利用AMV反转录试剂盒（美国Sigma 公司）反转录为cDNA。使用2×SYBR Green PCR Mastermix 试剂盒（美国Sigma 公司）检测lncRNA RGMB-AS1 相对表达量。本研究引物均由北京奥科鼎盛生物科技有限公司设计并 提 供 。 RGMB- AS1： 上 游 5′- AGTGGGCAAACTTCAACGTTC-3′；下游 5′-GAGCTGCCATTGAATTAATCCG-3′。内参 GAPDH：上游 5′-GAGTCCACTGGCGTCTTC- 3′ ；下 游 5′- GATGATCTTGAGGCTGTTGTC-3′。PCR 反应条件为：95 ℃ 20 s、95 ℃ 10 s、60 ℃、20 s，共40个循环。用2-ΔΔCq法计算 RGMB-AS1 相对表达量。以 RGMB-AS1表达量的中位数为截断值，分为高表达组和低表达组。

1.3 随访 140例脑胶质瘤术后以电话和门诊方式进行随访，每 3 个月随访 1 次，随访时进行 CT、MRI 或PET 检查。总体生存期（overall survival，OS）定义为术后第一天至死亡或最后一次随访。无进展生存期（progression-free-survival，PFS）指术后至第一次发生疾病进展或任何原因死亡的时间[8]。随访时间截止至2019年9月。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0软件进行分析；正态分布计量资料用表示，采用t检验；计数资料采用χ2检验；用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，采用logrank检验；多因素Cox比例回归风险模型检验生存期影响因素；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胶质瘤组织lncRNA RGMB-AS1 的表达变化 140 例胶质瘤中，lncRNA RGMB-AS1 高表达 70 例，低表达70例。胶质瘤组织lncRNA RGMB-AS1的相对表达量明显高于对照组（P＜0.001）。高级别胶质瘤（WHO 分级Ⅲ～Ⅳ级）lncRNA RGMB-AS1 的相对表达量明显高于低级别胶质瘤（WHO分级Ⅰ～Ⅱ级；P＜0.001）。见图1。

2.2 胶质瘤病人生存期的影响因素 多因素Cox比例回归风险模型分析结果显示，年龄≥50岁、术前KPS评分＜80分、WHO分级Ⅲ～Ⅳ级、lncRNA RGMB-AS1高表达是脑胶质瘤病人PFS 和OS 的独立影响因素（P＜0.05），见表1、2。

2.3 140 例脑胶质瘤病人的生存曲线分析结果 140例胶质瘤的PFS 在1～60 个月，中位数为17 个月（四分位间距：14～42 个月）；OS 在3～60 个月，中位数为21个月（四分位间距：15～50个月）。lncRNA RGMBAS1 低表达组 PFS 在 5～60 个月，中位数为 52 个月（四分位间距：34～56 个月）；OS 在6～60 个月，中位数为52 个月（四分位间距：38～55 个月）。lncRNA RGMB-AS1高表达组PFS在1～42个月，中位数为11个月（四分位间距：6～27 个月）；OS 在3～44 个月，中位数为18 个月（四分位间距：14～35 个月）。lncRNA RGMB-AS1 低表达组PFS 和OS 均较高表达组明显延长（P＜0.001，见图2）。

2.4 不同级别胶质瘤病人的生存曲线分析结果

2.4.1 低级别胶质瘤 lncRNA RGMB-AS1 高表达组PFS 在 7～58 个月，中位数为23 个月（四分位间距：16～38 个月）；OS 在8～60 个月，中位数为25 个月（四分位间距：20～41 个月）；lncRNA RGMB-AS1 低表达组PFS在5～60个月，中位数为53个月（四分位间距：43～56 个月）；OS 在7～60 个月，中位数为51 个月（四分位间距：43～55 个月）。lncRNA RGMB-AS1 低表达组PFS 和OS 均较高表达组明显延长（P＜0.05，图3）。

表1 脑胶质瘤病人无进展生存期影响因素的Cox比例回归风险模型分析结果

表2 脑胶质瘤病人总体生存期影响因素的Cox比例回归风险模型分析结果

2.4.2 高级别胶质瘤 lncRNA RGMB-AS1 高表达组PFS 在5～27 个月，中位数为9 个月（四分位间距：5～13个月）；OS在5～36个月，中位数为13个月（四分位间距：8～25个月）。低表达组PFS在5～43个月，中位数为18 个月（四分位间距：12～27 个月）；OS 在6～44个月，中位数为19 个月（四分位间距：14～30 个月）。lncRNA RGMB-AS1低表达组PFS 和OS 均较高表达组明显延长（P＜0.05，图3）。

图2 lncRNA RGMB-AS1低表达组与高表达组脑胶质瘤病人的生存曲线

3 讨论

图3 不同级别胶质瘤病人生存曲线

lncRNA在胶质瘤的发生和发展中起重要作用，对胶质瘤的早期诊断及预后评估有一定意义[9]。lncRNA RGMB-AS1位于人类染色体5q21.1，长度为2 053 bp。lncRNA RGMB-AS1在多种肿瘤中表达上调。Li 等[10]发现 lncRNA RGMB-AS1 与排斥导向分子b的表达呈负相关，lncRNA RGMB-AS1可能通过调控排斥导向分子b外显子2介导其表达，进而参与肺腺癌的发生与发展。Zhang等[5]发现，E2F1可以通过激活lncRNA RGMB-AS1 促进甲状腺肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。Xu 等[4]也发现，lncRNA RGMBAS1 可以通过靶向调控miR-22/NLRP3 信号通路促进食管鳞癌细胞的侵袭。本文结果显示，与正常脑组织比较，胶质瘤组织lncRNA RGMB-AS1 表达水平明显升高；高级别胶质瘤组织lncRNA RGMB-AS1表达水平明显高于低级别胶质瘤；此外，lncRNA RGMB-AS1 高表达胶质瘤病人预后更差。这提示lncRNA RGMB-AS1可能与胶质瘤发生和发展有关。本文结果发现lncRNA RGMB-AS1 表达水平与胶质瘤WHO 分级呈正相关，说明lncRNA RGMB-AS1 与胶质瘤的恶性程度相关。胶质瘤病人预后的影响因素有很多，包括年龄、基因多态性、免疫、KPS 评分、WHO 分级和手术方式等[11]。本文发现lncRNA RGMB-AS1高表达是胶质瘤病人预后不良的独立影响因素，lncRNA RGMB-AS1 高表达的胶质瘤病人PFS 和OS 较低表达病人明显缩短，并且这种差异与胶质瘤病理分级无关。

综上所述，lncRNA RGMB-AS1表达水平与胶质瘤恶性程度和分化程度有关。lncRNA RGMB-AS1高表达水平与胶质瘤病人的不良预后有关。这提示lncRNA RGMB-AS1可作为胶质瘤的分子标志物。