疏肝苦荞茶的制备工艺及其含量测定的研究

孙芮芮，李明杰，李慧峰，裴妙荣

（山西中医药大学，山西 晋中030619）

疏肝苦荞茶是由香橼、佛手、苦荞3 味药食同源的药材组成。香橼是芸香科植物枸橼Citrus medicaL.的干燥成熟果实，含有甲基阿酸等16 种挥发油活性物质［1］，具有疏肝理气、宽中化痰的功效，用于肝胃气滞，胸胁胀痛等［2］。佛手是芸香科植物佛手Citrus medicaL.var.sarcodactylis Swingle的干燥果实，含有多糖、黄酮、香豆素、氨基酸和无机元素等丰富的化学成分，具有抗动脉硬化、抗菌、抗肿瘤等药理作用［3-4］。苦荞为双子叶蓼科植物，别称苦荞麦Fagopyrum tataricum（L.）Gaertn，具有降血糖、降血脂及抗氧化的作用［5］。

香橼、佛手、苦荞三者组成的疏肝苦荞茶是具有疏肝理气作用的保健品，具有方便携带服用、便于保存的优点。此茶剂为新品，尚未建立质量标准，因此本实验以提取工艺、成型工艺、含量测定3 个部分对疏肝苦荞茶进行研究，以便对疏肝苦荞茶的进一步开发与生产提供依据。

1 仪器与试药

Waters 2695 高效液相色谱仪，Waters 2998 检测器，Empower 色谱工作站（美国沃特世公司）；SB-5200 DTDN 超声波清洗器（宁波新艺生物科技股份有限公司）；AB135- S 电子天平（十万分之一，瑞士METTLER 公司）；HANGPING FA2104 型（万分之一天平，上海精科）；GZX-9076 MBE 型电热恒温鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司医疗设备厂）。

芦丁对照品（批号：5981，上海诗丹德标准技术服务有限公司）；香橼（批号：20171011）、佛手（批号：20171114）均购自太原万民大药房，苦荞（批号：20170516）购自山西省忻州市；甲醇（色谱纯，欧普森天津市彪仕奇科技发展有限公司）；冰乙酸（色谱纯，天津市光复科技发展有限公司）。甲醇（分析纯，天津市进丰化工有限公司）。

2 方法与结果

2.1 提取工艺研究

2.1.1 单因素考察 本实验采用水煎煮法提取香橼、佛手饮片，分别考察以1∶6、1∶8、1∶10、1∶12 为实验因素的料液比，0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h 为实验因素的提取时间及1、2、3、4 次为实验因素的提取次数对干膏得率的影响。随着料液比的增高，香橼和佛手出膏率先升高后基本不变，随着提取时间的延长，香橼和佛手出膏率先升高后降低，而随着提取次数增多，药材出膏率逐渐降低。结果见图1、图2、图3。

图1 料液比考察

图2 提取时间考察

图3 提取次数考察

2.1.2 正交实验设计优选最佳提取工艺 以单因素实验考察结果为基础、干膏得率为考察指标，选择料液比（A）、提取时间（B，h）、提取次数（D，次）3 个对水提工艺影响较大的因素，每个因素设定3个水平。从单因素考察结果看，料液比1∶12 提取所得出膏率与料液比1∶10 相比变化不大，故正交实验中选取料液比分别为1∶6、1∶8、1∶10 3 个水平，提取时间为2 h 提取所得出膏率降低，所以正交实验中选取提取时间分别为0.5 h、1.0 h、1.5 h 3个水平。对于提取次数的单因素考察，由于随着提取次数的增多，出膏率逐渐降低，故正交试验中选取提取次数分别为1、2、3 次3 个水平。采用L9（34）正交表安排正交实验，正交因素水平表见表1，正交试验结果见表2、表3。实验所得最佳提取水平组合为A2B1D3，从数据分析得到的最佳提取水平组合为A2B3D3。因此对实验结果的影响因素次序为D>A>B，其中D 因素对出膏率有显著影响，所以提取次数是影响干膏得率的主要因素。

表1 正交试验因素水平表

2.1.3 验证实验 对2.1.2 项下所得实验最佳提取水平组合A2B1D3及实验数据分析所得最佳提取水平组合A2B3D3进行进一步验证试验，结果见表4。最佳提取工艺为A2B3D3，即料液比为1∶8，提取时间为1.5 h，提取次数3 次为最佳水提工艺。此工艺稳定可靠，合理可行。

2.2 成型工艺研究

取药材（香橼50 g 和佛手50 g），以2.1.3 项下最优提取工艺进行提取，过滤，得滤液，加热浓缩至80 mL。将苦荞进行膨化，取80 g 平均分为4份，每份20 g，按照1∶0.5，1∶1，1∶1.5，1∶2 与浓缩好的药液混合，放入烘箱中60 ℃烘干。根据其色泽、口感判断其最佳吸附比。结果见表5，不同吸附比所得样品图如图4。

表2 正交实验设计与结果

表3 方差分析

表4 验证实验结果

表5 不同吸附比的苦荞茶性状

2.3 含量测定研究

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm ×200 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.5%冰乙酸（34∶66）；检测波长：256 nm；柱温为30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL［5-7］。

图4 不同吸附比所得苦荞茶

2.3.2 溶液的制备

2.3.2.1 对照品溶液的制备 将精密称定的0.001 g芦丁标准品置于10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解后，定容至刻度，摇匀即得。所得芦丁对照品的浓度为0.000 106 g/mL。

2.3.2.2 供试品溶液的制备 取苦荞茶成品粉末1 g，精密称取，置于锥形瓶中，加甲醇25 mL，超声30 min，滤过，取续滤液，即得。

2.3.2.3 阴性对照溶液的制备 苦荞阴性对照。将香橼和佛手（1∶1）药材制得的干膏研成粉末，精密称取1 g 于锥形瓶中，制备方法如供试品溶液的制备。香橼阴性对照。将佛手煎煮一定时间，取其滤液，制成干膏研成粉末，与膨化的苦荞粉末按1∶1 混合，精密称取1 g 于锥形瓶中，制备方法如供试品溶液的制备，所得香橼阴性对照品的浓度为0.039 9 g/mL。佛手阴性对照，将香橼煎煮一定时间，取其滤液，制成干膏研成粉末，与膨化的苦荞粉末按1∶1 混合，精密称取1 g 于锥形瓶中，制备方法如供试品溶液的制备，所得佛手阴性对照品的浓度为0.042 8 g/mL。

2.3.3 系统适应性试验 将对照品溶液与供试品溶液分别精密吸取各10 μL，注入液相色谱仪，测定芦丁含量。在256 nm 波长下检测得到的各溶液色谱图见图5～图8。

2.3.4 方法学考察

图8 苦荞阴性色谱图

2.3.4.1 线性关系考察 取“2.3.2 项下”的芦丁对照品溶液，分别精密吸取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 至5 mL 容量瓶中加甲醇稀释且定容到容量瓶刻度，横坐标为对照品的进样量（ng），纵坐标为峰面积的积分值，以峰面积Y对进样量X（ng）进行线性回归，回归方程为Y=3709X-86 274，r=0.999 934。

2.3.4.2 精密度考察 取“2.3.2 项下”的芦丁对照品溶液精密吸取10 μL，连续进样6 次，照建立的色谱条件检测，测定峰面积积分值，计算RSD值。芦丁峰面积的RSD=1.07%，说明该仪器的精密度良好。

2.3.4.3 稳定性试验 取“2.3.2 项下”的供试品溶液，将同一供试品溶液精密吸取10 μL，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h 进样，照建立的色谱条件检测，记录峰面积积分值，计算RSD值，芦丁峰面积的RSD为1.16%，说明该供试品溶液在10 h 以内稳定。

2.3.4.4 重复性试验 照“2.3.2 项下”的供试品溶液制备方法，取同一批供试品溶液6 份，每份分别进样10 μL，照建立的色谱条件检测，测定峰面积积分值并计算含量，计算RSD值。芦丁的RSD=1.61%，说明重复性良好。

2.3.5 样品的测定 照“2.3.2 项下”的供试品溶液制备方法，取两批疏肝苦荞茶，制备供试品溶液，照建立的色谱条件检测，两批样品的含量测定结果见表6。

表6 样品含量测定结果

3 讨 论

由于疏肝苦荞茶为茶剂，因此本实验以水煎煮法提取，并且以单因素考察为基础，对香橼和佛手的提取工艺进行正交实验，优选出的工艺得到最大的出膏率，干膏得率为58.83%。同时本实验考察了膨化苦荞对香橼和佛手药液的吸附性，优选的吸附工艺为苦荞与提取液的比例为1∶0.5，在此条件下制得的茶剂成品，苦荞与提取液吸附完全，混合均匀，药料松散，色泽明显，茶味清香，口感怡人。此成型工艺稳定可行。 以芦丁为检测指标，建立的疏肝苦荞茶的含量测定方法，简单、准确、灵敏、重复性好。