非小细胞肺癌患者血浆Cripto-1的水平及临床意义

池传珍 徐春华 朱艳梅

Cripto-1(CR-1)是表皮生长因子Cripto-FRL-Criptic(EGF-CFC)家族成员之一，其基因定位在人染色体3P21.3[1]。已经发现CR-1在人类的多种肿瘤中高表达[2-5]，它可以激活PI3K/Akt/GSK-3βc-Src和ras/raf/MAPK信号通路，介导细胞增殖和抑制细胞凋亡[6]。然而CR-1在肺癌患者血浆中的变化情况鲜见报道，我们应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定了35例正常体检者，40例良性肺部疾病患者和102例NSCLC患者血浆CR-1浓度，探讨CR-1与NSCLC之间的关系以及临床中的应用价值。

资料与方法

一、临床资料

本次研究中选取2007年1月至2009年12月来我院接受治疗的患者为研究对象，研究对象去除资料不全以及不愿意接受调查者。其中NSCLC组共有102位患者经病理组织学确诊。患者年龄在35～78岁之间，其中男性52例，女性50例。根据病理类型不同将患者进行划分，发现42例鳞癌、60例腺癌；低分化癌占比较高，共有48例，其次是中分化癌40例，高分化癌14例。根据肺癌TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期30例，Ⅲ期29例，Ⅳ期30例；根据有无淋巴结转移可以将患者分为有淋巴结转移和无淋巴结转移，其中淋巴结转移患者62例。良性肺疾病组为同期住院患者40例，男25例，女15例，年龄35～74岁。健康对照组35名，均为门诊健康体检者，男25名，女10名，年龄23～69岁。3组年龄和性别之间的差异P>0.05，表明差异不具有统计学意义(见表1)。本次研究中对患者进行了为期一年的随访。

二、检测方法

均空腹无菌抽取外周静脉血2 mL，用0.11mol/L枸橼酸钠抗凝，3000 r/min离心10 min，收集血浆-70℃冰箱中保存便于日后检测。收集标本时应排除接受放化治疗、手术治疗以及其他抗肿瘤治疗的患者。通过ELISA法检测CR-1水平，操作过程应严格按照CR-1检测试剂盒上的说明书进行操作。

三、统计学处理

结 果

一、NSCLC患者和良性肺疾病以及健康对照者血浆CR-1水平比较

这一结果表明NSCLC患者血浆CR-1水平显著高于良性肺疾病患者和健康对照者(P<0.05)；良性肺疾病和健康对照组之间的差异不具有统计学意义(见表1)。

表1 不同组别血浆CR-1水平

二、NSCLC患者血浆CR-1水平与临床病理关系

实验结果显示NSCLC患者血浆中的CR-1水平和病理类型、患者的性别、年龄以及病理分级之间的差异P>0.05，表明无明显相关性。相比之下，TNM分期与是否存在淋巴结转移之间的差异P<0.05，表明存在显著相关性(见表2)。

三、NSCLC患者血浆CR-1水平与患者生存时间的关系

统计所有患者生存时间，>12个月患者52例，<12个月者50例，其血浆CR-1水平分别为(3.99±2.34)ng/mL和(7.87±3.47)ng/mL，生存时间>12个月CR-1明显低于生存时间<12个月者(χ2=3.617，P=0.001)，说明NSCLC患者血浆CR-1与患者生存时间密切相关。

血浆CR-1水平对NSCLC患者生存的影响进行单因素和多因素分析(表3)。单因素分析显示，血浆CR-1水平与患者预后有关(P=0.005)。在多因素分析中，结果显示血浆CR-1水平是影响NSCLC患者预后的独立因素(P=0.03)。

表2 NSCLC患者血浆CR-1水平与临床病理特征的关系

表3 NSCLC患者预后影响因素的Cox多因素回归分析结果

注：*P<0.05

讨 论

CR-1为表皮生长因子Cripto-FRL-Criptic(EGF-CFC)家族成员之一，是从人类的恶性畸胎瘤cDNA文库中分离出来的188个氨基酸组成的糖蛋白，参与细胞黏附和信号转导。生理情况下，CR-1参与胚胎的正常发育，在出生后CR-1表达降低，随着年龄的增长，青春期后CR-1主要存在乳腺组织中，起着促进乳腺组织发育的作用。通过分析人体多种上皮恶性肿瘤后发现，CR-1高表达与肿瘤的发生、发展密切关联[2-5]。Yoon等[7]报道口腔鳞状细胞癌中CR-1的表达与其进展、转移密切相关。Ertoy等[8]报道宫颈癌中CR-1蛋白的过表达与淋巴结转移密切相关，CR-1蛋白在宫颈癌转移淋巴结中的表达水平明显高于原发肿瘤。Liu[5]等的研究结果显示，CR-1蛋白在食管癌组织中的表达水平与食管癌TNM分期、浸润深度、淋巴结转移呈正相关，CR-1表达是食管癌预后的独立指标。Gong等[9]通过免疫组织化学方法检测乳腺癌标本中CR-1的表达情况，发现CR-1在乳腺癌组织中的阳性率为 47.5%，CR-1 表达是乳腺癌患者的独立预后因素。Bianco 等[10]通过对健康志愿者、良性乳腺病变及乳腺癌和结肠癌患者血浆CR-1检测发现，乳腺癌和结肠癌患者血浆CR-1水平明显高于良性乳腺病变患者和健康者。徐春华等[11]通过Western blot检测新鲜NSCLC组织，发现CR-1表达明显高于癌旁正常肺组织，且肺癌细胞分化越差，CR-1阳性表达越高；该研究还发现NSCLC组织CR-1表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期相关。黄美欧等[12]通过免疫组织化学方法检测CR-1蛋白在人肺癌组织中的表达，结果证实CR-1蛋白表达与肿瘤淋巴结的转移、侵袭显著相关。

本研究采用ELISA法对35例正常体检者，40例良性肺部疾病患者和102例NSCLC患者血浆CR-1水平进行检测。结果显示，NSCLC患者血浆中的CR-1水平显著高于健康对照组与良性肺部疾病组，证明通过检测CR-1水平有利于早期诊断NSCLC。Xu等[13]的研究结果也证实了这一点，在I/Ⅱ期肺癌患者中，血浆CR-1联合CEA，与单用CEA相比，可使诊断的敏感性提高近21%，特异性提高95%。NSCLC患者有淋巴结转移者血浆中CR-1水平明显高于无淋巴结转移者；Ⅲ～Ⅳ期患者血浆CR-1水平明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者，说明血浆CR-1水平与NSCLC患者的TNM分期、淋巴结转移密切相关，因此可以推测血浆CR-1检测有利于评估NSCLC病情的严重程度。而生存时间>12个月患者血浆CR-1明显低于生存时间<12个月者，则可以初步推断血浆CR-1检测对于判定NSCLC的预后也有一定参考作用。进一步的单因素和多因素分析显示血浆CR-1水平是影响NSCLC预后的独立因素。

综上所述，血浆CR-1水平可以用来评估肿瘤发生和转移，可以作为肺癌检测和预后的重要指标，有利于为临床工作者提供参考作用。