肺炎支原体 23S rRNA 基因突变与儿童肺炎支原体肺炎的临床特征相关性分析

贺双，王垒，孙欣荣

（1. 西安医学院，陕西 西安；2. 西安市儿童医院，陕西 西安）

0 引言

肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）是社区获得性肺炎常见的病原之一，因无细胞壁，仅对大环内酯类、四环素及喹诺酮类抗生素敏感[1]。MP感染人体后大多症状轻微且具有局限性，但临床上出现对大环内酯类抗生素耐药的难治性肺炎支原体肺炎（refractory Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，RMPP）。目前研究表明MP 对大环内酯类耐药的主要机制为药物作用靶点的改变，以23S rRNA基因结构域 V 区A2063G 和 A2064G 位点突变最为常见[2]。目前国内MP耐药率高，部分地区高达90%。但临床上出现检测出耐药基因的MP，仍对大环内酯类抗生素敏感，故本文对肺炎支原体23SrRNA基因突变与肺炎支原体肺炎(Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia，MPP) 的临床特征相关性进行了研究。

1 对象与方法

1.1 研究对象

收集2019年 4 月至 2019 年 9 月在我院儿科住院诊断为MPP的患儿 59例，依据A2063G 和 A2064G 的点突变结果，将患儿分为突变组39 例与非突变组20例。

1.2 诊断标准

MPP诊断标准：临床诊断标准参考《儿童肺炎支原体肺炎专家共识》2015年版。

1.3 排除标准

①原有先天性心脏病、免疫功能缺陷、遗传代谢性疾病、先天性肺支气管疾病、结核病及反复呼吸道感染的病例；②入院后行病原学检测合并细菌和病毒感染的病例；③临床资料不完整的病例。

1.4 研究方法

患儿入院后24小时用无菌棉签拭抹咽后壁部位，采用MP核酸及耐药突变位点检测试剂盒(荧光PCR法；江苏默乐生物科技有限公司)行MPP—DNA和大环内酯类药物耐药基因检测。试剂盒采用PCR结合Taqman荧光探针技术，针对P1基因保守区设计引物探针检测MPP，针对23S rRNA基因突变位点设计引物探针检测A2063G和A2064G突变。按说明书流程进行操作和结果判读。

同时检测患儿的一般情况：性别、年龄、热峰；实验室检查：血常规、C 反应蛋白、降钙素原、红细胞沉降率、血生化；胸部影像学。

1.5 统计学方法

采用SPSS 18.0软件，对所有数据进行分析，计数资料以百分比表示，两组间采用卡方检验。计量资料进行正态分布检验，符合正态分布以均数±标准差表示，采用t检验。不符合正态分布的计量资料以中位数（四分位间距）表示，采用秩和检验。P值＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MP耐药基因点突变情况

本研究共纳入MPP患儿59例，其中MP 23S rRNA Ⅴ 区A2063G、A2064G 位点基因突变阳性为39例（66.1%），阴性为20例（33.9%）。

2.2 临床特征比较

2.2.1 一般情况

男性36例（61%），女性23例（39%），两组间性别构成差异，无统计学意义（P＞0.05）。突变组年龄为7.95±2.19岁大于非突变组年龄为6.46±2.09岁，两组间年龄构成差异，有统计学意义（P＜0.05）。

2.2.2 临床特征

突变组热峰为40℃与非突变组相似，两组间无统计学差异（P＞0.05）；突变组的热程、住院时间、病程均低于非突变组，但两组间无统计学差异（P＞0.05）。

突变组的胸痛、气喘、皮疹、胸腔积液、纵隔气肿的发生频率均高于非突变组，但两组间差异均无统计学意义（P＞0.05），提示两组间病情轻重、肺外表现、胸部影像学表现无差异（表1）。

表1 两组间临床特征表现

两组间白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数，C反应蛋白、降钙素原、红细胞沉降率、乳酸脱氢酶、白蛋白均无统计学差异（P＞0.05），提示两组间实验室检查无明显差异（表2）。

表2 两组间实验室检查表现

3 讨论

MPP是社区获得性肺炎的常见类型，约占儿童社区获得性肺炎的10%-40%[3]，首选大环内酯类抗生素治疗。MP感染人体后症状轻微局限，但有一部分发展成为RMPP，导致严重的肺损害及肺外表现，留有闭塞性细支气管炎等后遗症。

目前RMPP的发生机制尚未明确，主要有以下方面：大环内酯类抗生素耐药：核糖体大亚基23SRNAV区基因位点突变，使大环内酯类抗生素与核糖体主要结合部位发生结构改变，亲和性降低，从而产生耐药。14和15元环大环内酯类抗生素，其相关基因位点有2063、2064、2067、2017位等；16元环大环内酯类抗生素，相关基因位点有2063、2064、2067位等；免疫紊乱：细胞免疫主要与T细胞相关，MP感染的患儿外周血中CD4+T细胞数目下降、CD8+T细胞数显著增加、CD4+/CD8+比例下降。RMMP感染患者CD4+T细胞减少，CD8+T细胞明显升高，CD4+/CD8+比值倒置，病情越重倒置越明显，病情恢复越慢；粘液高分泌；混合感染等。

大环内酯类抗生素耐药为RMPP发生的主要机制。近年来，MP耐药率高，我国部分地区基因突变率约90%。回顾既往研究发现，MP 23srRNA V区基因点突变，会延长发热时间及住院时间。而且感染基因突变的耐药MP会有更高的炎症反应[4]。同时研究显示，MP对大环内酯类药物耐药基因突变是重症肺炎支原体肺炎的危险因素。

本研究中，MP耐药基因突变率占66.1%。比较突变组及非突变组临床特征示：耐药基因突变组年龄偏大，有统计学差异（P＜0.05），在其他临床表现上均无统计学差异，与黎燕[5]等人的研究相似。

为进一步证实MP耐药基因突变与RMPP的相关性，参考《儿童肺炎支原体肺炎专家共识》2015年版中RMPP诊断标准，将患儿分为MPP组及RMPP组，比较两组间耐药基因检测差异。研究显示：两组间23srRNA V区基因A2063G、A2064G点突变，同样无统计学差异（χ2=1.841，P=0.263）。

综上所述，肺炎支原体 23S rRNA 基因突变为RMPP的主要发病机制有待进一步研究，且肺炎支原体 23S rRNA 基因突变与MPP的疾病轻重无明显相关性。