TWEAK 基因多态性与老年急性心肌梗死的关系研究

吕炜俊 王云乡 应婕

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧的基础上发生的，多表现为胸骨后疼痛，可并发心率失常、休克等，常危及生命[1]。AMI 是多基因疾病，其发生、发展与多种易感基因有关。相关研究表明，肿瘤坏死因子凋亡微弱诱导剂（tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis，TWEAK）参与了AMI 的病程进展，但其机制仍未阐述清楚[2]。TWEAK 基因序列可改变其转录活性，从而使蛋白质表达水平受到影响[4]。本研究以126 例老年AMI 作为研究对象，探讨TWEAK 基因多态性与老年AMI 之间的关系，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选取我院2016 年7 月至2018 年3 月收治的，符合《2016 年中国成人血脂异常防治指南》[3]、《急性心肌梗死诊断和治疗指南》[4]等标准的126 例老年AMI患者作为病例组。纳入标准：意识清晰，无精神病史；无严重瓣膜病、心房颤动等；无严重凝血功能障碍、肝肾疾病；无脑梗死、恶性肿瘤者；依从性良好者等。排除标准：严重肝肾疾病者；脑梗死者；周围动脉栓塞者；恶性肿瘤者；严重肝肾疾病者；依从性差者等。并选取同期132 例健康体检者作为对照组。两组受检者性别、年龄、吸烟史、饮酒史、糖尿病史、高血压史、平均收缩压、血小板计数、甘油三酯、高密度脂蛋白及总胆固醇的比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）；病例组平均舒张压、心率、白细胞计数、低密度脂蛋白、空腹血糖及肌钙蛋白均高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表1。本研究取得本院伦理委员会批准，得到受检者或其家属知情同意，并签署相关同意书。

1.2 方法

1.2.1 提取外周血白细胞DNA方法所有受检者均晨起空腹采集外周静脉血5ml，低温储存于乙二胺四乙酸抗凝管，备用。采用酚-氯仿有机油提法对受试者外周血白细胞DNA 进行提取，并低温保存于TE 缓冲液，备用。

1.2.2 指标检测 采用酶联免疫吸附法测定TWEAK水平；采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCRRFLP）技术检测TWEAK3 个多态性位点rs11552708、rs12937543 及rs4968211 的基因型和等位基因；采用全自动生化分析仪检测血糖、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇等水平。操作步骤均严格按照说明书进行。

1.3 统计学处理 采用SPSS 22.0 统计软件。测得计量资料以表示，组间比较采用t检验；计数资料组间比较采用χ2检验或Fisher 确切概率法。采用Haploview4.2软件进行Hardy-Weinberg 遗传平衡检验；基因频率及基因型频率分布采用优势比（OR）及其95%可信区间（95%CI）表示；采用多因素logistic 回归分析3 个位点的基因型频率分布及等位基因频率分布在两组中的差异。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 遗传平衡检验 Hardy-Weinberg 遗传平衡检验结果提示，TWEAK 基因3 个多态性位点rs11552708、rs12937543 及rs4968211 在两组人群中均符合HWE 平衡（均P＞0.05），适合进一步进行统计学分析。

表1 两组受检者的基线资料

2.2 TWEAK 各位点基因型频率分布情况 见表2。

由表2 可见，位点rs12937543 基因型频率分布在两组人群中的差异有统计学意义（P＜0.05）；rs11552708及rs4968211 两个位点基因型频率分布在两组人群中的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

2.3 TWEAK 各位点等位基因频率分布情况 见表3。

由表3 可见，rs11552708 及rs4968211 两个位点中A、G 等位基因频率分布在两组人群中的差异均无统计学意义（均P＞0.05）；rs12937543 位点A、T 等位基因频率分布在两组人群中的差异有统计学意义（P＜0.05），其中，携带等位基因T 者患AMI 的风险是携带等位基因A 者的1.74 倍。

2.4 两组中TWEAK 水平比较 根据上述位点分析，设定rs12937543-T 为危险等位基因。病例组携带AT+TT 基因者血清TWEAK 水平高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.01），两组携带AA 基因者血清TWEAK水平差异无统计学意义（P＞0.05）；病例组携带T 基因患者血清TWEAK 水平高于非T 基因携带患者，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表2 TWEAK 各位点基因型频率分布情况[例（%）]

表3 TWEAK 各位点等位基因频率分布情况[例（%）]

表4 两组中TWEAK 水平比较（pg/ml）

3 讨论

AMI 是在冠状动脉病变的基础上发生的一种缺血性心肌坏死[5]。本病病因复杂，可能与高血压、糖尿病、生活压力、体力劳动等有关[6]。近年来，大量研究发现TWEAK 参与了冠脉粥样斑块慢性炎症的每个环节[7]。Chorianopoulos 等[8]研究发现，sTWEAK 在ST 段抬高型AMI 患者血清中高表达，且与患者预后呈负相关关系。然而，也有研究发现TWEAK mRNA 水平在AMI 患者中存在低表达情况[9]。此外，许多动物研究模型也表明TWEAK 参与了AMI 患者的心肌纤维重构[10-11]。目前，关于TWEAK 参与AMI 的机制尚不明确。相关研究表明，基因序列变异能改变其表达，并导致产生的蛋白质功能异常，从而影响疾病的进展[12]。为此，推测TWEAK 基因多态性可能与AMI 的发生发展存在一定关系。

相关研究表明，AMI 的发生发展与各类炎性因子有关，其中，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）可促进炎症及血栓的形成[13]。另有研究表明，Th1、Th2 等细胞因子的基因多态性与AMI 的进展存在一定相关性[14]。TNF-α 启动子（-308）的多态性位点基因参与了ST 段抬高型AMI缺血损伤过程。表明TNF-α 启动子的多态性位点与ST段抬高型AMI 的发生、发展明显相关。另外，TNF-α 启动子（-308）多态性位点携带A 等位基因AA+AG 者，其血清心肌缺血指标存在高表达现象，且AA 者与不稳定心绞痛有关。Listi 等[15]研究发现，连接蛋白37（Cx37）的多态性位点与AMI 的发生相关。另有研究表明，AMI 患者的Cx37（C1019）多态性位点的T 等位基因频率分布高于正常对照组[16]。本研究与上述研究结果相类似，发现两组TWEAK 多态性位点rs12937543 基因型频率分布存在差异。另外，两组rs12937543 中A、T 等位基因频率分布存在差异，且携带等位基因T 患AMI 的风险较等位基因A 高1.74 倍。表明TWEAK 多态性位点rs12937543与AMI 的发生有关，且携带等位基因T 患者发生AMI的风险较高。另外，本研究发现，病例组携带AT+TT 基因者血清TWEAK 水平均高于对照组，且病例组间携带T 基因患者血清TWEAK 水平高于非T 基因携带患者，但两组携带AA 基因者血清TWEAK 水平差异无统计学意义。表明TWEAK 在AMI 患者中高表达，且携带T基因患者TWEAK 水平较高。本研究提示，TWEAK 多态性位点与AMI 有关，TWEAK 基因多态性可能参与了老年AMI 的发生、发展过程，但具体机制仍需要深入研究。综上所述，TWEAK 基因多态位点rs12937543 与老年AMI 患者有关，可能参与了老年AMI 的发生、发展过程。但本研究收集的样本量较小，存在一定局限，下一步笔者将继续收集样本，增加研究中心，扩大研究范围，进行验证性探讨，以期进一步阐释TWEAK 基因参与AMI的机制。