淋巴细胞功能测定对常见肺部疾病的临床意义

陈向红 白敏 张造章 王祥丰

海南医学院第二附属医院全科医学科（海口570311）

目前越来越多的研究表明，淋巴细胞功能在各种临床疾病如自身免疫性疾病、变态反应性疾病、病毒感染等都有异常改变，在各种疾病的发生、发展过程中淋巴细胞功能的异常产生着极其重要的影响，血液中淋巴细胞功能的检测是观察机体细胞免疫水平的重要方法。临床上常见的肺部疾病多存在有免疫功能的异常，而社区获得性肺炎（community-acquired pneumonia，CAP）、慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary diseases，COPD）及肺结核（tuberculosis，TB）等是临床上最常见的三种呼吸系统疾病，目前仍存在较多病例治疗效果欠佳、鉴别诊断困难等情况，因此笔者对211 例确诊为CAP、COPD、TB 患者及78 例健康对照者进行了T 淋巴细胞亚群、B 淋巴细胞及NK 细胞活性等功能的检测及对比分析，以了解其免疫功能的变化及特点，试图通过对其免疫系统功能进行检测及对比研究探讨其临床意义，为其临床诊断、预防、治疗及鉴别诊断提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2016年1月至2018年12月期间海南医学院第二附属医院根据临床症状、体征、实验室和其他检查确诊为CAP 的患者72 例，其中男40 例、女32 例，均符合中华医学会呼吸病学分会制定的《中国成人社区获得性肺炎诊断和治疗指南（2016年版）》标准［1］。排除有先天性疾病、免疫功能异常、哮喘、支气管扩张、COPD、恶性肿瘤、妊娠期女性或哺乳期妇女；COPD 患者68例，其中男37 例、女31 例，均符合《内科学》第8 版慢性阻塞性肺疾病诊断标准［2］，同时排除了合并患有心、肝、肾等严重疾病和肺结核；TB 患者71例，其中男38 例、女33 例，均诊断符合《内科学》第8 版肺结核诊断的标准［3］，排除艾滋病、糖尿病、肺外结核、肿瘤、既往明确寄生虫感染以及合并其他肺部疾病者；211 例患者年龄29～73 岁、平均48.33岁；健康对照组共78 例，其中男45 例、女33 例，年龄21～65岁、平均45岁，均来自海南医学院第二附属医院体检中心的健康体检者，均无心肺病史。各组间年龄、性别差异均无统计学意义（表1）。

表1 肺部疾病组与对照组基本情况Tab.1 Basic information of pulmonary disease group and control group ±s

表1 肺部疾病组与对照组基本情况Tab.1 Basic information of pulmonary disease group and control group ±s

组别CAP 组COPD 组TB 组对照组例数72 68 71 78性别（例）女32 31 33 31男40 37 38 37年龄（岁）37±13.2 39±14.5 38±12.3 35±11.3

1.2 方法

1.2.1 检测方法受试对象均于次日空腹采集EDTA 抗凝外周全血2 mL 于普通离心管中充分混匀，室温（20 ～25℃）存放待用，8 h 内作染色裂解处理，根据T、B、NK 细胞表面标志，适当的荧光素标记特异性单克隆抗体与淋巴细胞反应，通过美国BD 公司FACSCalibur 流式细胞仪严格按照试剂盒及仪器操作说明对样本进行测定，即可了解相应细胞的阳性百分比和荧光强度。

1.2.2 仪器与试剂仪器FACSCalibur 流式细胞仪为美国BD 公司生产，试剂包括MultiTEST CD3/CD8/CD45/CD4、MultiTEST CD3/CD16/CD56/CD45/CD19、FACS Lysing Solution（红细胞裂解液）等均由美国BD 公司生产。

1.2.3 操作步骤取两支上样管，分别标定样本编号及管1、2，在管1 中加入20 μL CD3/CD8/CD45/CD4 抗 体，管2 中 加 入20 μL CD3/CD16/CD56/CD45/CD19 抗体，充分混匀血液样本，在每管中分别加入50 μL 全血样本，充分混匀，避光室温放置15 min，每管中加入450 μL 稀释过的红细胞裂解液（红细胞裂解液用去离子水10 倍稀释），充分混匀，避光室温放置15 min，使用FACSCalibur 流式细胞仪测定CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD8+/T、CD19+/CD3-细胞数目及NK 细胞。

1.3 统计学方法采用SPSS 25.0 统计软件，计量资料用表示。按照分组进行方差齐性分析，方差齐性行独立样本t检验，方差不齐行Mann-Whitney秩和检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

3 组患者各项免疫细胞功能指标变化：社区获得性肺炎患者T 淋巴细胞亚群中CD3+与健康对照组相比降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；双阳性T 淋巴细胞（CD4+CD8+/T）及NK 细胞与对照组相比均升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；但B 淋巴细胞（CD19+/CD3-）功能未见明显异常。慢性阻塞性肺疾病组T 淋巴细胞亚群中CD3+与健康对照组相比降低，差异有统计学意义（P＜0.001）；双阳性T 淋巴细胞（CD4+CD8+/T）及NK 细胞与对照组相比均升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；B 淋巴细胞（CD19+/CD3-）功能也未见明显异常。肺结核病组T 淋巴细胞亚群中CD3+与健康对照组相比降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；双阳性T 淋巴细胞（CD4+CD8+/T）与对照组相比无明显差异；NK细胞与健康对照组相比显著升高，差异有统计学意义（P＜0.001）；B 淋巴细胞（CD19+/CD3-）功能与健康对照组相比明显降低，差异有统计学意义（P＜0.001）。见表2。

表2 3 组患者各项免疫细胞功能指标变化结果Tab.2 Changes of immune cell function indexes in the three groups ±s

表2 3 组患者各项免疫细胞功能指标变化结果Tab.2 Changes of immune cell function indexes in the three groups ±s

注：与对照组相比：*P ＜0.05，**P ＜0.01

组别对照组COPD 组CAP 组TB 组F 值P 值总T 淋巴细胞CD3+68.38±7.36 60.55±16.23**65.51±12.46*61.33±16.62*7.690＜0.001双阳性T 淋巴细胞CD4+CD8+/T 0.63±0.69 1.95±6.05*1.01±1.31*0.80±0.96 3.559 0.014 NK 细胞16.14±6.33 23.02±15.78**18.93±10.27*29.57±15.39**16.751＜0.001 B 淋巴细胞CD19+/CD3-12.54±4.78 13.35±12.01 12.87±10.05 5.90±5.25**7.587＜0.001

3 讨论

淋巴细胞在调节机体免疫机能中发挥着重要作用，分为主要参与细胞免疫的T 淋巴细胞（CD3+）和主要参与体液免疫的B 淋巴细胞（CD19+）和NK 细胞（CD16+/CD56+）等。T 淋巴细胞（CD3+）表达降低多提示细胞免疫功能低下，机体易反复发生感染。T 淋巴细胞又分为辅助性T 淋巴细胞（CD3+CD4+）和抑制性/细胞毒性T 淋巴细胞（CD3+CD8+），后两者之间相互诱导和制约形成了T 细胞网络，对于调节细胞免疫反应和维持免疫平衡具有重要作用［4］。CD19+为B 淋巴细胞亚群中最具标志性的分子，参与B 细胞的活化、增殖及信号转导，调节人体的免疫应答［5］。CD4+CD8+双阳性（double positive，DP）T 细胞是一种指同时表达CD4和CD8 抗原的未成熟的T 细胞，广泛存在于多种动物和人的外周血及免疫器官，具有独特的免疫活性，能受到有丝分裂原、病原体及毒性物质等的刺激而增殖［6-7］。唐甜等［8］研究发现，急性呼吸系统感染性疾病DP 细胞明显增高，提示免疫系统异常参与了CAP 疾病的发生、发展过程，检测DP 细胞对于急性呼吸系统感染性疾病的诊断具有重要意义；NK 细胞是机体重要的免疫细胞，自身具有抗肿瘤、抗感染及免疫调节等功能，还能有效的调节T 淋巴细胞活性［9-11］。T 淋巴细胞、B 淋巴细胞及NK 细胞的异常可以解释许多疾病发病机理，对患者的免疫功能和预后做出判断以及临床指导治疗。

有研究［12］表明，老年肺炎患者CD4+CD+25 T 细胞减少；调节性细胞因子升高，后者可能有助于肺炎组织修复，防止致病性炎症的发生。反复发作的气道炎症和破坏性肺气肿是COPD 的主要病理特征［13］。COPD 气道炎症主要由肺部浸润的免疫细胞炎性介质过量分泌导致［14］，其中CD8+T 细胞是关键的致炎淋巴细胞亚群［15］。有研究表明，COPD 患者外周血CD8+T 细胞显著增加，并且患者的肺功能下降与存在于肺内的CD8+数量和CD4+/CD8+比率的下降有关［16-21］。机体感染结核时，结核病变部位CD4+可发生凋亡，由此使结核分枝杆菌丧失了原有生存环境，清除炎症部位的感染细胞，抑制结核分枝杆菌生长和复制，从而控制结核分枝杆菌感染［22］。有研究发现，呼吸系统患者受感染后其免疫功能出现紊乱现象可能与以下因素有关：（1）病原体诱导了CD8+的细胞增多而抑制了CD4+细胞的合成；（2）机体的感染引起了促肾上腺皮质激素合成与类固醇糖皮质激素分泌增加［23］，通过抑制了T 淋巴细胞增殖的活化和增加CD4+细胞的调亡等机制而使CD4+细胞的合成减少［24］。

呼吸道是一个开放的气道，因此是病原体感染的主要靶器官，一方面机体免疫力低下容易导致呼吸道病原体感染，另一方面病原体感染又可降低呼吸道防御功能，同时机体对不同病原体的免疫反应亦不相同，因此研究常见呼吸道感染性疾病机体免疫功能状况对其诊断、治疗及预后均有重要意义，本研究通过观察机体免疫系统对不同疾病的反应试图寻找有利于疾病鉴别诊断的依据，为国内首次报道。本研究结果显示：CAP、COPD 及TB 患者均存在CD3+功能明显降低，与笔者以往的研究结论一致，说明呼吸道疾病患者T淋巴细胞（CD3+）表达降低多提示细胞免疫功能低下，机体易反复发生感染。同时三者NK 细胞功能明显升高，说明NK 细胞发挥了其抗感染及免疫调节等功能；但双阳性T 淋巴细胞（CD4+CD8+/T）功能升高仅存在CAP 及COPD 患者中，而B 淋巴细胞（CD19+/CD3-）功能明显降低仅存在TB 患者，说明结核启动了与前两者不同的免疫途径。由此可见，通过以上不同肺部疾病的淋巴细胞亚群检测结果的区别，可对肺部感染、肺结核及慢性阻塞性肺疾病的诊断、治疗及预后判断，尤其是对重症及诊断、治疗困难患者提供新的认识。那么，通过观察不同疾病不同的免疫反应，是否能够成为鉴别诊断的标志物值得探索，进一步的观察研究有可能为鉴别诊断提供新的思路。