高效液相色谱法检测维生素C片中维生素C含量的分析

河南省新蔡县食品药品检验所（463500）陈曦娟

《中国药典》（2015年版）在对维生素C片中的维生素C含量测定时，采用0.05mol/L的碘滴定液进行滴定，该方法受人为的因素影响较大，且淀粉指示剂需要临用新制。因此，本文采用高效液相色谱法来测定维生素C片中维生素C的含量。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 高效液相色谱仪，电子分析天平，超声波清洗器，甲醇，超纯水。维生素C对照品；维生素C片。

1.2 方法

1.2.1 设置色谱分析条件 应用WondaSil C18Superb液相色谱柱，流动相为2%醋酸水溶液-甲醇（90∶10），检测波长为224nm，流速为1.0ml/min；柱温25℃；进样量20μl。理论板数按维生素C计算。

附表1 回收率实验结果

附表2 维生素C片中维生素C含量测定结果（%）

1.2.2 检测溶液制备①对照品溶液制备：取对照品置于容量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成2mg/mL的对照品溶液备用。②供试品溶液制备：取维生素C片各20片称定，研细称取适量，置于容量瓶中，用流动相稀释至刻度。用干燥滤纸过滤，取续滤液，吸取续滤液1ml，置于棕色瓶中，用流动相稀释至刻度，用0.22μm的有机滤膜过滤。

1.2.3 测定方法 吸取对照品溶液、供试品溶液各20μl注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算得维生素C的含量。

2 结果

2.1 标准曲线 吸取对照品溶液，置于容量瓶中，用流动相稀释定容制成标准贮备液①；吸取对照品溶液1ml，置于容量瓶中，用流动相稀释定容制成标准贮备液②；分别吸取标准贮备液①②置于容量瓶中；用流动相缓慢稀释至刻度，按照色谱条件进样，以峰面积(Y)作为纵坐标，以浓度X作为横坐标，进行回归分析。可得回归方程为：Y=85672X－1568.7（r=0.9999）；结果表明维生素C线性范围2.70～46.54μg/ml。

2.2 精密度试验 吸取“2.1”项下的标准贮备液②，准确吸取20μl进样，连续进样6次，测定峰面积，维生素C的RSD为0.6%。色谱图见附图。

2.3 重复性实验 取供试品，按照1.2.2中方法制备6份，按照1.2.1中设置进样20μl，根据供试品的峰面积计算相对标准偏差RSD为0.6%。显示本组方法具有好的重复性。

2.4 稳定性实验 取批号为5180326的供试品制成的供试品溶液和“2.1”中制成的标准贮备液②；分别进样20μl，根据所得的色谱图的峰面积计算RSD，结果表明：标准贮备液②的RSD值为0.6%；供试品组的RSD值为0.5%。对照品溶液和供试品溶液在8h内稳定。

附图 维生素C对照品的HPLC色谱图

2.5 加样回收率实验 精密称取对照品制成的供试品溶液，符合药典规定。见附表1。

2.6 含量测定 用碘滴定液测定维生素C的含量。将二者结果进行比较，见附表2。

3 讨论

3.1 紫外检测波长的选择 配置的标准贮备液在224nm的波长处有最大吸收。所以，本次采用224nm作为检测波长。

3.2 供试品的稳定性 在流动相中使用醋酸溶液抑制其分解；使用棕色的容量瓶避光也是避免其分解。本次实验中，供试品溶液可以稳定保存8h，但到12h后，供试品溶液的测定结果已经变低。所以本实验溶剂条件可保证供试品溶液稳定保存8h。

3.3 对比分析 目前，《中国药典》在维生素C片中维生素C含量测定时采用化学滴定法[1]。本文中所采用的色谱条件，流动相简单，稳定性高，精密度好、重复性好。对维生素C的测定与《中国药典》比较结果准确度好，精密度好，重复性和相关性都符合药典相关规定。因此，高效液相色谱法测定的结果更能体现药物的真实含量。建议用此种方法来测定维生素C片中维生素C的含量。