MDM2 Bcl-2 AR的表达与脑膜瘤病理类型的关系

宋 魏 孙淼淼 张建波 于庆凯

郑州大学附属肿瘤医院病理科，河南 郑州 450000

脑膜瘤是指发生于脑膜细胞的良性肿瘤，发病率高，据资料显示其发生率占原发脑肿瘤的19.2%～30.0%，严重破坏视力，累及范围较广[1-5]。临床常采用手术进行治疗，但由于脑膜瘤生长位置、瘤体质地大小与周围结构的解剖关系等因素影响，造成17%～50%的患者瘤细胞不能完全切除，且术后复发率可高达20%，再加之良性瘤变对放疗、化疗不敏感，导致临床治疗难度不断增加，因此进行脑膜瘤病理学研究具有重要的临床价值，有助于创新治疗方法，为改善预后进行指导[6-8]。本研究以90例已经证实的脑膜瘤患者标本作为研究对象，应用其标本进行MDM2、Bcl-2、AR的表达与脑膜瘤病理类型的关系探讨。

1 资料与方法

1.1材料来源从郑州大学附属肿瘤医院病理科计算机中检索到2012-02—2014-06收治脑膜瘤患者356例，其中已经病理学证实的340例患者，将其标本进行编号并利用计算机SPSS 20.0统计学软件随机抽取其中的90例作为研究对象，按照WHO(世界卫生组织)脑膜瘤的分级标准将90例标本进行病理分型，其中Ⅰ级58例，Ⅱ级22例，Ⅲ级10例，根据标本号提出保存的蜡块，将每份蜡块作3片切片备用。其中使用的MDM2、Bcl-2、AR鼠抗人单克隆抗体工作液体军均由ZYED公司生产提供。

1.2方法LSAB法免疫组化染色：所有蜡块切片均需要脱蜡至水，具体操作如下：二甲苯，5 min/次，持续2次；100%乙醇，5 min 2次；95%乙醇1次5 min；80%乙醇、70%乙醇1次2 min。然后采用30%双氧水+90 mL蒸馏水对标本处理后，将室内温度控制在合理范围之内，放置15 min，然后采用蒸馏水洗，将温度调高至95 ℃对抗原进行热修复，时间5 min，采用1 mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA)pH 8.0修复液对AR进行处理，然后采用内源性过氧化物酶磷酸缓冲液对标本进行清洗5 min，再采用3%正常血清进行处理，将室温控制在正常范围之内，放置20 min。然后采用滤纸将标本上的血清完全清除，直接滴加第一抗体，温度控制在37 ℃，时间20 min；然后采用内源性过氧化物酶磷酸缓冲液对标本进行清洗，5 min/次，持续清洗2次。滴加第二抗体bio-tin(1：500)，温度控制在37 ℃，时间30 min；然后采用内源性过氧化物酶磷酸缓冲液对标本进行清洗，5 min/次，持续清洗2次。滴加第三抗体streptoavidin，温度控制在37 ℃，时间30 min；然后采用内源性过氧化物酶磷酸缓冲液对标本进行清洗，5 min/次，持续清洗2次。DAB显色后在显微镜下面进行观察，如可见清晰着色、境界明确的阳性产物时，可终止实验。采用自来水细水流对标本进行冲洗，然后采用苏木素进行复染，正常室温，控制在5 min，返蓝20 min，梯度乙醇脱水后采用甲苯透明、中性树胶封片。

1.3观察指标选择已经病理学证实的AR阳性标本进行对照，内源性过氧化物酶磷酸缓冲液代替一抗作为阴性对照模板。阳性判定标本：细胞核染色为棕褐色，细胞质可见为棕黄色。MDM2、Bcl-2以扁桃体阳性组织作为对照，源性过氧化物酶磷酸缓冲液代替一抗作为阴性对照模板。阳性想判定标准：细胞质染色为棕黄色，细胞核染色则为棕褐色。

2 结果

参照WHO分级标准，MDM2的表达呈现一定的梯度效果，其中Ⅲ级脑膜瘤、Ⅱ级脑膜瘤、Ⅰ级脑膜瘤阳性表达率分别为10.0%、54.5%、56.9%，差异无统计学意义(P>0.05)；Bcl-2的表达也呈现一定的梯度，Ⅲ级脑膜瘤、Ⅱ级脑膜瘤、Ⅰ级脑膜瘤阳性表达率分别为40.0%、45.5%、51.7%，差异无统计学意义(P>0.05)；AR的表达在不同病理类型脑膜瘤中的阳性表达率梯度最为明显，Ⅲ级脑膜瘤、Ⅱ级脑膜瘤、Ⅰ级脑膜瘤阳性表达率分别为70.0%、54.5%、29.3%，经Chi-Square检验差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 不同病理类型脑膜瘤中MDM2、Bcl-2、AR的阳性表达率比较 [n(%)]Table 1 Comparison of positive expression rates of MDM2，Bcl-2 and AR in meningioma of different pathological types [n(%)]

3 讨论

脑膜瘤是常见的良性颅内肿瘤，主要起源于蛛网膜内皮细胞，少数起源于脉络丛组织，瘤组织生长缓慢，病程长，患者病史一般多在1～3 a，患病初期，患者只伴随轻微、间歇性头痛，但是随着肿瘤体积逐渐增大，患者颅内压力明显增高，头痛发作频率增加且程度加重，时常伴有视力下降以精神症状[9-15]。当患者颅内压力相当严重时，进行眼底检查可见患者视神经乳头发生高度水肿或者出现继发性萎缩，严重者甚至失明，甚至会导致患者出现癫痫、侧肢体肌力减退等症状，因此进行疾病早诊断、早治疗具有重要的临床价值[16-20]。

手术治疗是脑膜瘤疾病控制的常用手段，但是也存在部分患者治疗后效果不佳的现象，事实上要想增强患者的治疗效果，清楚了解脑膜瘤生物学特性是必可可少的工作内容，因此，加强病理学研究具有重要的实践意义[21-25]。近年来，有学者对脑膜瘤的病理学特点进行了研究，发现脑膜瘤通常呈实质性，只有少数会伴随囊变，且多为单发，常由颈外、颈内(或椎基)动脉双重供血，血循环相当丰富，并累及硬脑膜与颅骨，为临床操作人员了解其生理解剖结构提供了资料，但关于其激素受体方面研究相对较少，仍然存在较大的研究空间[26-30]。本研究中以90例已经证实的脑膜瘤患者标本为例，通过免疫组化染色法检测MDM2、Bcl-2、AR的表达，旨在深入探究脑膜瘤的病理学特征，为创新治疗方法提供新路径。有学者发现，脑膜瘤的增殖与PR(孕激素受体)、AR(雄激素受体)、CHR(生长激素受体)、GR(糖皮质激素受体)等激素受体存在相关性[31-35]。临床中关于PR的研究相对其他激素受体较多，多数学者认为该激素受体在脑膜瘤中专一性以及亲和力最强，阳性率高达52%～89%，且良性脑膜瘤以及女性患者的阳性率更高，多见于标本的细胞核，能够诱导启动子控制的基因转录[36-40]。因此，有学者采用抗孕激素方法(以米非司酮为主)对脑膜瘤患者施治，结果发现治疗效果并不理想，也有学者认为该治疗方法主要适用于孕激素受体缺乏的患者[41-45]。在不断的实践发现中，研究工作者更加关注AR，有文献资料显示，AR在不同级别的脑膜瘤中的阳性表达率可高达40%～60%，且女性患者更高，具有亲和力高、低容量的特性，多见于标本的细胞核；另外，AR mRNA的高表达以及对脑膜瘤的促生长作用都表明该激素受体参与了脑膜瘤的增生[46-48]。此外，有学者专门因此进行了体外实验，结果发现AR主要是细胞核表达，其Ⅲ级脑膜瘤、Ⅱ级脑膜瘤、Ⅰ级脑膜瘤阳性表达率分别为80%、64%、34%，采用激素拮抗剂能够有效抑制脑膜瘤的增殖活性，且AR的阳性表达率与脑膜瘤的病理级别呈正相关，正好有别于PR的表现，事实上也证明AR的表达趋势更加贴合恶性脑膜瘤生长迅速的现象[49-52]。研究显示，AR的表达在不同病理类型脑膜瘤中的阳性表达率梯度最为明显，Ⅲ级脑膜瘤、Ⅱ级脑膜瘤、Ⅰ级脑膜瘤阳性表达率分别为70.0%、54.5%、29.3%，经Chi-Square检验差异有统计学意义(P<0.05)，与上述研究成果存在一致性。此外，研究还发现AR表达存在以下特点：PR参与脑膜瘤的增殖作用主要与AR存在相关性；AR表达阳性率方面，女性构成比较高，源于男性自身的雄激素水平较高，会在一定程度上降低AR表达；AR与MDM2、Bcl-2的表达无关，表明AR在脑膜瘤发生发展中具有独特的作用，可作为预后的参考因子。本研究还显示，MDM2、Bcl-2在不同级别脑膜瘤的阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)，表明脑膜瘤存在凋亡缺陷，与预后关系不大，在脑膜瘤疾病发展中可能占主导地位。

AR表达与脑膜瘤的病理级别分型明显相关，临床实践中要意识到其对瘤细胞增殖作用的重要性，可将其作为预后效果的评估指标。