E-钙黏素及β-连环素在胃癌分型中的表达及临床意义

陈 萍 张钦华 刘琼茹

1.广东省江门市中心医院病理科，广东江门 529000；2.广东省江门市中心医院肿瘤科，广东江门 529000

胃癌是我国常见的消化道肿瘤之一，目前按Lauren's 分型将其分为弥漫型胃癌和肠型胃癌两种，并且认为这两型胃癌无论从形态学、发病机制、生物学行为及预后上都明显不同，弥漫型胃癌和肠型胃癌相比其恶性程度更高，预后更差，多项研究证实弥漫性胃癌的致瘤背景、组织学发生与肠型胃癌是一样的[1-2]，以及两者与胃癌临床病理因素之间的关系，探讨E-cadherin 和β-catenin 在两型胃癌中表达的意义。

1 材料与方法

1.1 材料

收集江门市中心医院2014 年1 月～2016 年12月首发胃癌手术切除标本共74 例，每例均包括癌及癌旁正常胃组织，其中男51 例，女23 例，男女之比为2.22 ∶1，年龄37 ～84 岁，平均62.1 岁，按照Lauren's分型：肠型胃癌36 例，弥漫型胃癌38 例，参照WHO推荐的分化分级标准：高-中分化腺癌38 例，低、未分化36 例；浸润深度T1+T2 为13 例，T3+T4 为61 例；有淋巴结转移53 例，无淋巴结转移21 例。

表1 E-cadherin 和β-catenin 在正常胃组织与胃癌组织中的表达情况[n（%）]

1.2 方法

所有组织标本经10%福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋。4μm 厚度切片，1 张行HE 染色，1 张以PBS 溶液代替一抗进行阴性对照，2 张分别行E-cadherin 和β-catenin 免疫组化染色。取癌旁正常胃组织作阳性对照，免疫组化采用S-P 法，E-cadherin 和β-catenin 抗体和S-P 试剂盒，全部是由福州迈新生物技术开发公司生产，实验完全按照说明步骤进行。

1.3 染色结果判定标准[3-4]

E-cadherin 和β-catenin 染色阳性判断标准基本相同，即细胞膜呈现棕色细小颗粒状着色为阳性细胞，正常染色主要定位于细胞膜，即连续的细胞膜染色。染色结果判断标准参照文献方法[3]，染色评分标准如下：细胞膜、胞质全部没有染色则判定为0 分；细胞质染色为主则判定为1 分；异质性染色，即细胞膜、胞质混合型染色则判定为2 分；连续的细胞膜染色则判定为3 分。临床中，为统计分析方便，无连续的细胞膜染色被视为异常，即0 ～2分为异常表达。在同一个肿瘤内，其染色方式常有变化，判断以主要染色区域为准。

1.4 统计学处理

本研究数据采用统计学软件SPSS 16.0 处理，计数资料采用χ2检验；E-cadherin 和β-catenin之间采用相关性分析，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 E-cadherin 和β-catenin 在正常胃组织与胃癌组织中的表达情况

E-cadherin 和β-catenin 蛋白经免疫组化染色后，阳性反应呈现浅棕色至深棕色，在正常胃黏膜组织中定位于细胞膜，呈现网格状阳性（见图1A、2A），在胃癌组织中呈现不同程度的异常表达（见图1B-1D、2B-2D），胃癌中E-cadherin 异常表达率为83.8%（62/74），β-catenin 的异常表达率为79.7%（59/74），两者的异常表达率为均显著高于正常胃组织（P ＜0.01）。见表1。

图1 E-cadherin 和β-catenin 在两型胃癌组织中的定位及表达情况

2.2 E-cadherin 和β-catenin在两型胃癌中的表达及其他临床病理因素的分析

E-cadherin 在弥漫型胃癌中的异常表达率为94.7%（36/38），在肠型胃癌中的异常表达率为72.2%（26/36），β-catenin 在弥漫型胃癌中的的异常表达率为92.1%（35/38），在肠型胃癌中的异常表达率为66.6%（24/36），两者在弥漫型胃癌中的异常表达率均显著高于肠型胃癌（P ＜0.01），见表2，并且两者的异常表达与胃癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移均显著相关，具体表现为在低-未分化胃癌的异常表达率显著高于高-中分化胃癌，浸润深度为T3+T4 的胃癌两者异常表达率高于T1+T2，有淋巴结转移的胃癌两者异常表达率高于无淋巴结转移。见表2。

表2 E-cadherin 和β-catenin在两型胃癌中的表达及其他临床病理因素的分析[n（%）]

2.3 E-cadherin和β-catenin在胃癌中表达的相关性

E-cadherin 和β-catenin 在胃癌中的表达具有一定的相关性（见表3），74 例胃癌组织中E-cadherin 和β-catenin 均正常表达者为12.16%（9/74），E-cadherin 和β-catenin 均异常表达者为75.68%（56/74），两者在胃癌组织中的表达具有相关性（P ＜0.01，r=0.514）。

表3 E-cadherin 和β-catenin在胃癌中表达的相关性

3 讨论

1965 年Lauren 根据胃癌的组织结构和生物学行为，将胃癌分为肠型和弥漫型，两型胃癌有着不同完全不同的病理形态及临床特征[5-6]。肠型胃癌发生于胃黏膜肠上皮化生的背景下，一般具有明显的腺管形成，以高、中分化腺体为主，具有较高的发病几率，患者以男性所占比例较多，预后相对较好。弥漫型胃癌细胞增长方式为弥漫性，细胞缺乏连接，是难以形成腺管的，临床中主要低分化腺癌或印戒细胞癌为主，分化相对较差，年轻女性患者较多，出现远处转移、淋巴结转移的几率较大，临床预后相对较差[7]。E-cadherin 是一个相对分子量为120KD 的钙依赖性细胞粘附分子，属于介导上皮细胞粘附跨膜糖蛋白中的一种，在保持细胞体态结构、保证细胞极性方面具有较高的价值，另外其对于肿瘤细胞还具有防止其离散、脱落的作用[8]。β-catenin是一个相对分子量为92～95KD 的介于细胞骨架与E-cadherin 之间的细胞内糖蛋白，也是细胞黏附素家族的重要成员之一。E-cadherin 作用的发挥离不开β-catenin，必须与β-catenin 形成复合物才能发挥细胞粘附作用[9]。

E-cadherin 和β-catenin 为代表的细胞粘附分子，均属于对肿瘤进行抑制、控制器发展的因素，具有极为重要的价值，抑制肿瘤转移、侵袭的机制较多，效果较佳。两者中任何一种成分异常均可使细胞粘附系统功能障碍引起癌细胞脱落和向远处转移[10-11]。已有研究发现，E-cadherin 表达减少或出现异常表达的情况，影响因素为癌组织分化、淋巴结节转移或者浸润深度等[12]。Bornman 等认为E-cadherin 表达的减少或缺失，在一定程度上降低了细胞间的粘附力，这就容易导致癌症细胞出现弥漫生长、转移或者脱落的情况[13]。另有研究表明β-catenin 的膜表达减弱或缺失与肿瘤低分化和侵袭转移密切相关[14-15]。本研究发现E-cadherin和β-catenin 在胃癌组织中呈现不同程度的异常表达，并且弥漫型胃癌中的异常表达率均显著高于肠型胃癌，提示E-cadherin 和 β-catenin 共同参与介导胃癌的发生发展进程，与肠型胃癌相比，在弥漫型胃癌中E-cadherin 和 β-catenin 更容易出现表达定位改变甚至缺失，进一步提示E-cadherin 和β-catenin 在两型胃癌不同生物学特征的分子学基础中发挥重要作用，从而为临床对不同组织学类型胃癌的分子靶向治疗提供理论依据，并据此为患者制定更为个体化的治疗方案[16-17]。

本研究还发现E-cadherin 和 β-catenin 在胃癌组织中的表达呈正相关关系，并且两者的异常表达与胃癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移均显著相关，在低-未分化、浸润深度为T3+T4、伴有淋巴结转移的胃癌中E-cadherin 和β-catenin 的表达显著降低，因此检测E-cadherin 和 β-catenin 的表达可作为判断胃癌是否侵袭、转移的重要参考指标，也是肿瘤术后增加放化疗可靠依据[18]。

本研究通过检测E-cadherin 和β-catenin 在弥漫型胃癌和肠型胃癌中表达情况及两者相关性，揭示了两型胃癌不同生物学特征的分子基础，从而对不同组织学类型胃癌的分子靶向治疗提供新思路。