灵芝破壁孢子粉对小鼠运动恢复功能的影响

曹晓明

（烟台南山学院，山东 烟台 265706）

流行病学研究表明，大量运动训练在很大程度上会造成机体长时间处于应激状态，不但对机体运动能力产生不好的影响，而且会令机体免疫力下降，干扰运动恢复功能。当前在大量运动后，利用中药或食品的方式调节，从而提高身体功能恢复速度，被广泛应用[1,2］。灵芝孢子就是灵芝生长成熟期从菌盖中弹射的小颗粒物，属于灵芝的生殖细胞，含灵芝所有遗传活性物质[3］。灵芝孢子的化学成分令其有抗肿瘤、调节免疫力等功效。灵芝孢子存在2层质地坚硬且耐酸的孢壁，影响机体对其的消化吸收，需破壁服用[4,5］。本研究针对长期训练小鼠，补充灵芝破壁孢子粉。比较小鼠停止训练后的运动能力与免疫力，研究灵芝破壁孢子粉对小鼠运动恢复功能的影响。

1 研究对象和方法

1.1 受试物

受试物是上海得一健生物科技有限公司提供的灵芝破壁孢子粉，其通过低温物理法破壁，破壁率很高，超过90%。

1.2 实验小鼠和分组

实验选择120只SPF级健康雄性小鼠作为研究对象，小鼠的体重在16 g～24 g范围内，由山东医学院实验室提供。将小鼠划分成3组，第1组为对照组，只服用正常的饲料与水，第2组与第3组为实验组。其中第2组小鼠除服用正常的饲料和水外，服用小剂量的灵芝破壁孢子粉，第3组小鼠服用正常的饲料和水外，服用大剂量的灵芝破壁孢子粉，依次被称作小剂量组与大剂量组。每组小鼠40只。

1.3 实验方法

训练方式选用无负重游泳训练，详细训练过程如下。

游泳池的大小是300 cm×220 cm×50 cm，游泳池内壁光滑，同时和底部垂直，从而防止小鼠游泳时在池壁上休息。

在小鼠训练时，需要专人管理，令其以安静的游泳方式进行，避免出现撕咬等现象，防止小鼠受外界干扰造成负荷有显著差异[6］。

小鼠每天训练1次，共训练3周，每天的训练时间是50 min。

在进行上述训练的过程中，对照组与服用灵芝破壁孢子粉的2个实验组均进行相同量的训练。

3组小鼠通过自有饮食的方式在相同环境下饲养，3组小鼠饮食饲料一样，但在小剂量组中添加小剂量的灵芝破壁孢子粉，约0.1 g，在大剂量组中添加大剂量的灵芝破壁孢子粉，约0.4 g，共干预3周。

1.4 实验结果处理

实验结果采用SPSS 13.0统计软件分析，通过进行描述，组间对比通过LSD检验实现[7,8］。在原始数据不满足方差齐性要求的情况下，需对数据进行转换，完成比较检验。在P＜0.05的情况下，认为差异有统计学意义[9］。

2 实验结果

2.1 灵芝破壁孢子粉对小鼠免疫器官脏器指数的影响

在训练前后给小鼠称重同时记录，进行灌喂、造模以及眼眶采血处理后将小鼠处死，解剖处脾脏与胸腺，依次用生理盐水清洗并用滤纸吸干，称重，则脏器指数可通过脏器质量与体质量之比测定[10］。

经实验，灵芝破壁孢子粉对小鼠免疫器官脏器指数的影响结果用表1进行描述。

表1 灵芝破壁孢子粉对小鼠免疫器官脏器指数的影响Tab.1 Effect of Ganoderma lucidum spore powder on immune organ index in mice

分析表1可以看出灵芝破壁孢子粉不同剂量组别小鼠与对照组小鼠脾脏指数与胸腺指数差异无统计学意义（P＞0.05），说明灵芝破壁孢子粉对小鼠脾脏与胸腺没有显著影响。

2.2 迟发型变态反应实验

迟发型变态反应通过足趾增厚法测试，在训练完成后，向小鼠腹腔注射绵阳红细胞，注射后一段时间对左后足跖厚度进行测量，再在测量处皮下注射绵阳红细胞，注射后一段时间对左后足跖厚度进行测量，相同部位测量5次取均值，通过2次操作前后足跖厚度差值，也就是足跖肿胀度对小鼠迟发型变态反应进行描述[11］。

运动小鼠服用不同剂量灵芝破壁孢子粉以及未服用灵芝破壁孢子粉迟发型变态反应情况用表2进行描述。

表2 不同小组小鼠迟发型变态反应情况Tab.2 Delayed allergic reactions in different groups of mice

分析表2可以看出，小剂量组肿胀度与对照组相比明显降低，有非常显著性差异（P＜0.01），大剂量组肿胀度与对照组相比也明显降低，有非常显著性差异（P＜0.01），说明灵芝破壁孢子能够降低小鼠肿胀程度，延缓迟发型变态反应。

2.3 灵芝破壁孢子粉对小鼠血清溶血素水平的影响

血清溶血素通过半数溶血值测定法测定，在力竭游泳训练完成后，采小鼠尾血2 mL，静置1 h，令血清充分析出，经1 500 r·min-1离心处理8 min，对血清进行采集，通过生理盐水对血清进行稀释，在37℃水浴锅中孵育12 min，冰浴12 min，停止反应，1 500 r·min-1离心处理8 min，取上清液，在540 nm处对各管OD值进行测定，对结果进行记录[12］。表3所示的是灵芝破壁孢子粉对3组小鼠血清溶血素水平的影响结果。

表3 3组小鼠血清溶血素水平变化情况Tab.3 Changes in serum hemolysin levels in three groups of mice

分析表3可以看出，对照组、小剂量组与大剂量组小鼠血清半数溶血值随灵芝破壁孢子粉剂量的升高而升高，小剂量组半数溶血值高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。大剂量组半数溶血值高于对照组，差异有非常显著性（P＜0.01），可以看出灵芝破壁孢子粉可有效提升大量训练后小鼠血清溶血素水平。

2.4 灵芝破壁孢子粉对NK细胞活性的影响

研究灵芝破壁孢子粉对自然杀伤（NK） 细胞活性影响时，通过乳酸酶脱氢法对其进行检测[13］，得到的结果用表4进行描述。

表4 3组小鼠NK细胞活性比较结果Tab.4 Comparison of NK cell activity in three groups of mice

分析表4可以看出，和对照组相比，小剂量组与大剂量组小鼠NK细胞虽然均在一定程度上更高，但差异无统计学意义 （P＞0.05）。

2.5 灵芝破壁孢子粉对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

小鼠最后一次训练完成后，在腹腔注射2 mL鸡红细胞悬液。30 min后颈椎脱臼处死小鼠，把腹部朝上放置，切开腹壁皮肤。在腹腔注射2 mL生理盐水，通过吸管吸出腹腔洗液，滴在2篇载玻片上，置于37℃孵箱中40 min。取出在生理盐水中漂洗，取出晾干，并染色5 min，通过蒸馏水漂洗取出晾干，在显微镜下观察[14］。通过下述关系式求出吞噬率与吞噬指数:

吞噬率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量/计数的吞噬细胞数量×100%。

吞噬指数=吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数。

灵芝破壁孢子粉对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响结果用表5进行描述。

表5 3组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力比较Tab.5 Three groups of mice peritoneal macrophage phagocytic ability is chicken erythrocytes

分析表5可知，大剂量灵芝破壁孢子粉处理组的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率以及吞噬指数与对照组相比显著升高（P＜0.05），小剂量灵芝破壁孢子粉处理组的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率以及吞噬指数与对照组相比在一定程度上有所升高，但差异无统计学意义（P＜0.05）。

2.6 小鼠碳廓清实验

最后一次训练后30min，在小鼠尾部静脉注射稀释的印度墨汁，并且开始计时。注入墨汁后5 min，从内眦静脉丛取血15 μL，马上添加至碳酸钠溶液中。通过酶标仪在540 nm处对光密度值进行测定，获取吞噬指数[15］。得到的灵芝破壁孢子粉对小鼠碳廓清吞噬指数的影响结果用表6进行描述。

表6 灵芝破壁孢子粉对小鼠碳廓清吞噬指数的影响Tab.6 Effect of phagocytic index Ganoderma spores carbon clearance in mice

分析表6可以看出，服用小剂量灵芝破壁孢子粉小鼠碳廓清吞噬指数和对照组相比有所降低，但差异无统计学意义（P＞0.05）。而服用大剂量灵芝破壁孢子粉小鼠碳廓清吞噬指数和对照组相比显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05），说明服用多量灵芝破壁孢子粉对小鼠碳粒廓清能力有显著提高。

3 讨论与结论

长期大运动量训练会使机体免疫功能降低，对感染性疾病的易感率明显提升，影响机体运动恢复功能。本文通过研究灵芝破壁孢子粉对小鼠运动恢复功能的影响，为灵芝破壁孢子粉应用的研究提供全面的信息基础，对推广灵芝破壁孢子粉具有重要应用价值。

灵芝破壁孢子粉为灵芝的生殖细胞，是浓缩的灵芝精华。当前大量医学研究表明，灵芝破壁孢子粉可有效提高机体免疫力与调节身体不同组织的机能，可对肿瘤产生抑制作用，还有抗病毒、降糖降脂与延缓衰老的功效。

按照灵芝破壁孢子粉的用法、用量对训练后小鼠运动恢复功能的影响进行实验，从实验结果可知，灵芝破壁孢子粉对小鼠免疫器官脏器指数无显著影响。在细胞免疫方面，小剂量组与大剂量组小鼠都可显著降低小鼠足肿胀情况。服用灵芝破壁孢子粉后，小剂量组与大剂量组小鼠可延缓小鼠的迟发型变态反应，有助于小鼠运动恢复功能的提高。在体液免疫功能方面，小剂量组与大剂量组小鼠可提升血清半数溶血值，也就是灵芝破壁孢子粉可有效提升大量训练后小鼠血清溶血素水平，改善小鼠运动恢复功能。在巨噬细胞功能方面，小剂量组与大剂量组小鼠能够提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，而且大剂量组能够显著提高运动后小鼠的碳廓清能力。但在NK细胞活性方面无显著影响，这可能受到测量仪器等的影响出现检测误差。但整体看来，灵芝破壁孢子粉有很好的提高免疫功能的作用，灵芝破壁孢子粉可能通过免疫细胞提高活性，对机体免疫功能进行调节。基本作用机制是灵芝孢子粉增强了巨噬细胞水平调节免疫，有助于干扰素生成，调节免疫功能。

综上可以看出，在大量运动期间给小鼠补充灵芝破壁孢子粉，在整体上有助于改善小鼠免疫力指标，而且有利于小鼠身体运动功能的恢复，提高小鼠运动能力，训练效果更好。同时提示长期锻炼人群，在锻炼过程中补充灵芝破壁孢子粉对提高健身效果有益，灵芝破壁孢子粉有很好的应用前景。