儿童血清25(OH)D水平与慢性中耳炎合并积液的相关性分析

杜慧慧，郑国君

(温州市中西医结合医院耳鼻喉科，浙江 温州 325000)

中耳炎合并积液(otitis media with effusion，OME)是临床上儿科常见的中耳非化脓性疾病，80%～90%的学龄前儿童可受到影响[1]。当OME持续3个月以上时疾病发展为慢性中耳炎合并积液(chronic otitis media with effusion，COME)，2岁儿童的发病率约为4%～6%，主要临床特征为中耳积液、听力下降、语言发育缓慢等，长期无有效治疗可引发中耳胆脂瘤、智力发育迟缓，严重时导致听力丧失，严重影响儿童健康[2-3]。维生素D对促进儿童生长发育及提高免疫力具有重要作用，儿童特别是婴幼儿易出现维生素D不足或缺乏现象，而25-羟维生素D[25(OH)D]是衡量机体维生素D营养状态的检测指标。有研究报道补充维生素D能有效预防上呼吸道感染发生，而COME主要症状之一为上呼吸道感染引起耳闷胀感，中耳黏膜系统同时是上呼吸道系统的延续[4-5]。因此，本研究旨在探讨COME患儿血清25(OH)D水平变化情况及其与疾病发生风险的相关性分析。

1资料与方法

1.1临床资料

选取2017年1月至2018年1月温州市中西医结合医院耳鼻喉科收治的COME患儿48例作为研究组，选取同期儿科体检中心健康体检儿童48例作为对照组。纳入标准：①经临床症状及耳内镜检确诊为COME；②年龄≤10岁；③患儿家属对本研究有详细了解，自愿参与，并签署知情同意书；④经本院伦理委员会审核批准。排除标准：①入组前2周有急性上呼吸道感染、急性中耳炎及急性鼻窦炎发作；②合并哮喘；③有中耳置管、鼓膜切除等中耳手术史；④近2个月内有维生素D服用史；⑤近3个月内有免疫增强剂或免疫抑制剂使用史；⑥合并精神疾病或认知功能障碍。研究组男30例，女18例；年龄3～8岁，平均(5.23±1.02)岁；单侧34例，双侧14例；病程6～58天，平均(22.31±5.27)天。对照组男27例，女21例；年龄3～10岁，平均(5.64±1.22)岁，两组儿童性别、年龄比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。

1.2 COME的诊断标准

①耳内镜检测显示骨膜隆起或下陷，骨膜颜色模糊不清，内有液面可视；②骨膜活动迟缓或受限；③有传导性耳聋；④耳压测试中耳压≤-150daPa；⑤声导抗呈“B”型或“C”型曲线；⑥病程超过3个月。

1.3样本采集

所有受试儿童清晨空腹抽取肘静脉血3～5mL，室温静置20min，2 500r/min离心15min，取上层血清于离心管中，置于：-80℃超低温冰箱保存待检。

1.4检测方法

酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清25(OH)D、白介素(IL)-1β、IL-8及肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。25(OH)D试剂盒由英国IDS公司提供，IL-1β、IL-8、TNF-α试剂盒由达科为生物科技有限公司提供。步骤如下：①配制标准品，稀释血清样本，设置标准管和空白对照管，配制25(OH)D、IL-1β、IL-8、TNF-α标准液。②血清25(OH)D、IL-1β、IL-8、TNF-α水平检测，加样：加待测血清与标准液，混匀；孵育：37℃恒温箱2h(IL-1β、IL-8、TNF-α孵育45min)；水洗：洗涤液反复冲洗3次，纸上拍干；加一抗工作液100μL，空白孔除外，混匀；孵育：37℃恒温箱1h(IL-1β、IL-8、TNF-α孵育25min)；水洗：洗涤液反复冲洗3次，纸上拍干；加二抗：每孔加入酶标二抗(辣根过氧化物酶标记链霉亲和素)100μL；孵育：37℃恒温箱30min(IL-1β、IL-8、TNF-α孵育15min)；水洗：洗涤液反复冲洗3次，纸上拍干；加底物：每孔加底物工作液100μL，混匀，37℃恒温箱避光孵育20min；终止：加终止液100μL终止反应；OD值测定：450nm波长测定。所有操作均由同一人严格按照说明书执行。分别以OD值、标准品为纵坐标和横坐标绘制标准曲线，计算相应的血清25(OH)D、IL-1β、IL-8、TNF-α水平。

1.5统计学方法

2结果

2.1两组血清25(OH)D水平的比较

研究组患儿血清25(OH)D水平低于对照组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

组别例数(n)25(OH)D(ng/mL)对照组4836.85±8.24研究组4815.67±5.13t15.118P0.000

2.2两组血清炎症因子表达水平的比较

研究组患儿血清IL-1β、IL-8、TNF-α水平均高于对照组(均P<0.05)，见表2。

组别例数(n)IL-1β(pg/mL)IL-8(pg/mL)TNF-α(ng/mL)对照组481.43±0.274.38±0.430.72±0.21研究组482.85±0.456.73±0.712.37±0.32t18.74719.61529.867P0.0000.0000.000

2.3 COME患儿血清25(OH)D与炎症因子表达的相关性

通过Pearson相关性分析显示，COME患儿血清25(OH)D与IL-1β呈负相关(r=-0.653，P=0.000)，见图1；COME患儿血清25(OH)D与IL-8呈负相关(r=-0.643，P=0.000)，见图2；COME患儿血清25(OH)D与TNF-α呈负相关(r=-0.686，P=0.000)，见图3。

2.4影响COME发病的多因素Logistic回归分析

年龄、25(OH)D均是影响COME发病的保护因素(均P<0.05)，IL-1β、IL-8、TNF-α均是影响COME发病的危险因素(均P<0.05)，见表3。

图1 COME患儿血清25(OH)D与IL-1β的相关性 图2 COME患儿血清25(OH)D与IL-8的相关性 图3 COME患儿血清25(OH)D与TNF-α的相关性

Fig.1 Correlation between serum 25(OH)D level and IL-1β in children with COMEFig.2 Correlation between serum 25(OH)D level and IL-8 in children with COMEFig.3 Correlation between serum 25(OH)D level and TNF-α in children with COME

表3 影响COME发病的多因素Logistic回归分析

3讨论

COME是导致儿童致聋的主要疾病之一，早期采取有效治疗措施，对听力影响较小，但治疗不及时可造成永久性听力障碍及语言障碍等，给患儿心理及生活带来较大影响[6]。COME病因较为复杂，虽然对其发病机制的研究取得较大的进展，但具体机制现代医学尚不能给出明确阐释。多数学者认为咽鼓管发生阻塞及咽鼓管功能障碍易诱发COME发病，主要是由于儿童咽鼓管较短、粗且平，处于半开放状态，易发生感染，感染后释放大量细胞因子，提高毛细血管通透性，增加渗出液，而损失的中耳黏膜纤毛使渗出液滞留，导致中耳积液，长期未得到有效治疗发展成为COME。目前COME主要治疗手段有鼓膜穿刺抽液、鼓室导管放置及全身抗生素治疗等，但前两者都具有创伤性，风险性大，患儿耐受性较差，且易复发，而儿童正处于生长发育阶段，自身免疫系统发育尚不完善，全身抗生素治疗对患儿长期影响较大[7-8]。因此，寻找有效的COME早期预防检测指标极为重要。

3.1血清25(OH)D水平与患儿维生素D间的关系

维生素D是人体必需的脂溶性维生素之一，除早期发现调节钙磷代谢，促进骨骼生长以外，还对机体神经系统、心血管系统、内分泌系统及免疫系统等具有调节作用[9]。维生素D少部分可从食物中摄取，机体大部分是皮肤经紫外线照射后在肝脏及肾脏内合成，但合成过程中需要25(OH)D在1-α-羟化酶的作用下进行转化，且血清25(OH)D含量稳定，半衰期长，能较准确的反应机体维生素D水平。维生素D缺乏与多种疾病的发生发展有关。刘宁等[10]研究显示维生素D缺乏可引起2型糖尿病早期胰岛素分泌降低，并与胰岛β细胞功能低下相关，补充维生素D可能作为预防糖尿病发生的辅助方法。徐丹丹等[11]研究发现哮喘患者普遍存在维生素D缺乏现象，且血清25(OH)D水平与肺功能参数及疾病控制程度相关。熊翠莲等[12]研究发现血清25(OH)D在下呼吸道感染患儿中普遍存在不足或缺乏现象，临床治疗时补充维生素D制剂可有效降低儿童下呼吸道发生感染。Walker等[13]研究表明血清25(OH)D在COME患儿中水平降低，同时对急性中耳炎补充维生素D制剂后可有效降低复发性急性中耳炎复发率。本研究结果显示，研究组患儿血清25(OH)D水平低于对照组，与Asghari等[14]研究结果基本一致，提示COME患儿普遍存在血清25(OH)D的缺乏现象。

3.2 COME患儿血清25(OH)D与炎症因子的关系

本研究通过对COME患儿炎症因子指标检测发现，研究组患儿血清IL-1β、IL-8、TNF-α水平均高于对照组，这与周长华等[15]研究结果基本一致，提示COME患儿存在严重的炎症反应。本研究通过Pearson相关性分析显示，COME患儿血清25(OH)D与IL-1β、IL-8、TNF-α均呈负相关，提示25(OH)D可能通过对炎症反应进行调控参与COME疾病发生发展。IL-1β、IL-8、TNF-α是由巨噬细胞及单核细胞分泌的促炎因子，可引起严重的炎症反应，维生素D是一种免疫炎症反应调节器，维生素D缺乏时能通过激活AMPK蛋白激酶信号通路诱导巨噬细胞分泌IL-1β、IL-8、TNF-α等炎症因子释放，加重机体炎症反应。维生素D缺乏时还能诱导黏膜上皮细胞释放IL-6、IL-8，进一步加重炎症反应，在COME疾病中维生素D可能也是通过此类调节方法参与其发病过程，其具体机制还需进一步研究[16-18]。

3.3影响COME发病的多因素分析

本研究通过Logistic多因素回归分析显示，年龄、25(OH)D均是影响COME发病的保护因素，而IL-1β、IL-8、TNF-α均是影响COME发病的危险因素，提示血清25(OH)D可作为COME发生的预测指标，可能通过补充维生素D制剂的方式降低COME发生率。

综上所述，本研究通过对COME患儿血清25(OH)D水平检测显示，COME患儿血清25(OH)D水平存在普遍降低现象，并与炎症反应密切相关，血清25(OH)D升高是COME的保护因素，临床中可通过对血清25(OH)D水平检测作为COME发生的预测指标，同时对儿童补充维生素D制剂可能有效降低COME的发生率。

[专业责任编辑：邵 渊]