特应性皮炎患者皮肤中转谷氨酰胺酶2蛋白的检测

沈 辉，高艳薇

特应性皮炎（atopic dermatitis，AD）是一种自身变态反应性疾病，其发病机制复杂[1]，临床主要为IgE和嗜酸粒细胞增多[2]，具体的致病机制仍未完全阐明，研究其发病机制对于疾病的防治具有积极的意义。转谷氨酰胺酶2（transglutaminase-2，TG2）是角质包膜形成的关键蛋白，在皮肤的最后分化阶段起到关键的作用[3]。已有研究显示TG2作为自身抗原参与了一些自身免疫性疾病的发病过程[4]。本研究检测了AD患者皮肤中转谷氨酰胺酶2蛋白表达的水平，借此探讨其在AD致病中的作用。

1 病例和方法

1.1 病例资料

收集我院2017年1月—2018年1月皮肤科诊治的AD患者52例的皮损组织，纳入标准：符合Williams AD诊断标准[5]。排除标准：伴发皮肤炎症以及其他免疫异常病变者，曾服用糖皮质激素类或免疫抑制剂治疗者。另取我院同期痣切除患者切缘周围正常皮肤标本30例作为正常对照。AD组男28例、女24例，平均年龄（32.28±6.62）岁（8～52岁）；对照组男27例、女25例，平均年龄（32.15±6.71）（9～51岁）。两组患者在性别、年龄方面具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 皮肤组织TG2蛋白表达的酶联免疫吸附试验（ELISA） 取AD患者皮损处皮肤50 mg，1 ml PBS缓冲液中组织匀浆，离心取上清，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清中TG2蛋白表达水平，检测试剂盒购自上海鲁汶生物科技有限公司，交由检验科参照试剂盒说明书步骤操作。加入相关试剂显色后，450 nm波长测定样品的吸光度，结合试剂盒提供的标准品绘制标准曲线，对照标准曲线计算各样本皮肤组织中TG2蛋白表达水平。

1.2.2 临床观察指标 记录患者的嗜酸粒细胞计数和评估AD评分（SCORAD），SCORAD评分根据临床症状按 0、1、2、3 等级评分[6]。

1.4 统计学方法

SPSS16.0软件处理实验数据，计量数据符合正态分布，采用t检验，计数资料采用χ2检验，Spearman检验分析各指标间的相关关系，检验水准α=0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AD患者皮肤组织TG2 蛋白表达和临床指标的变化

AD患者皮肤组织TG2 蛋白为（11.57±3.25 ）ng/ml，显著高于对照组（0.16±0.03）ng/ml（P＜0.01）。AD患者嗜酸粒细胞计数为（0.52±0.13）×109/L，显著高于对照组（0.31±0.07）×109/L（P＜0.01）。AD患者SCORAD评分为（8.46±1.54）分，显著高于对照组的（0.09±0.02）分（P＜0.01）（表1）。

表1 两组TG2 蛋白和临床指标比较

2.2 AD患者皮肤组织TG2 蛋白表达与临床指标的相关性分析

Spearman检验分析显示AD患者皮肤组织中TG2蛋白表达与患者的性别和年龄无显著相关性，但TG2蛋白与AD患者的嗜酸粒细胞计数（r=0.473，P＜0.05）和SCORAD评分（r=0.462，P＜0.05）呈显著正相关（表2）。

表2 TG2蛋白与AD患者嗜酸粒细胞计数和SCORAD评分的相关性分析

3 讨论

皮肤屏障功能受损是AD发生、发展的主要机制之一，近年来正逐渐引起学者们的关注[7]。TG2是一种多功能蛋白，由331个氨基组成，可以参与细胞分化、炎症、迁移和伤口愈合在内的多种细胞过程[8]。在皮肤组织角质包膜形成过程中需要TG2的酰基转移或赖氨酸残基转移作用，为皮肤屏障功能维护的重要活性分子[9]。Li等[7]的研究发现谷氨酰胺转胺酶基因缺失小鼠会发生皮肤屏障功能的损伤，表皮局部对刺激的保护性反应减少，在紫外线照射过程中皮肤的炎症反应显著减低，可能是内质网钙释放，在缺失了TG2后，无法打开钙通道。本研究显示AD患者皮肤组织中TG2高表达，可能是这些高表达的TG2，加强了炎症通路的激活，导致了患者病程的发生和进展。苏惠春等[10]使用ELISA检测AD患者TG2特异性IgE水平表达，发现患者有高的血清特异性TG2-IgE表达，并且与患者的病情呈正相关，这可能是皮肤中高表达的TG2激活了机体的免疫反应，产生了针对TG2的特异性IgE抗体。自身变态反应也是AD的一个主要发病机制，临床研究已经发现患者体内会出现一些针对自身蛋白的特异性IgE抗体，这些特异性IgE抗体的滴度与患者的病情动态变化呈现正相关[11]。这一结果从侧面验证了笔者的研究结果。本研究的相关性分析显示AD患者皮肤组织TG2 蛋白表达水平与患者的外周血嗜酸粒细胞计数和SCORAD评分呈显著正相关，提示了TG2高表达可能参与了AD病变的进展。

综上所述，本研究显示AD患者皮肤组织中TG2蛋白高表达，其表达水平与患者的外周血嗜酸粒细胞计数和SCORAD评分呈显著正相关。